目的:探讨血管生成素(angiopoietin，Ang)-1、Ang-2和酪氨酸激酶-2(tyrosine kinase-2，Tie-2)在儿童过敏性紫癜(Henoch-Sch?nlein purpura，HSP)中的表达和临床意义。方法:收集2017年9月至2018年10月在无锡市儿童医院住院的HSP患儿共90例作为实验组，根据临床表现再将其分为A组(单纯型，30例)、B组(关节型，30例)、C组(腹型，30例)。收集同一时段在无锡市儿童医院参与健康体检的正常学龄期及学龄前期儿童共40例作为对照组。采集各组研究对象的血清和尿液标本，采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)测定各组标本中Ang-1、Ang-2、Tie-2的表达水平，计算Ang-1/Ang-2比值，比较三种因子在各组患儿血清和尿中的差异。结果:HSP患儿血清Ang-1、Tie-2表达水平及血清Ang-1/Ang-2比值低于健康儿童{[pg/mL：(1457.68±16.71)比(3362.76±8.70)、(330.18±31.66)比(728.94±15.12)]、[(15.02±3.55)比(94.17±13.31)]， t值分别为680.23、75.79、52.59， P值均<0.05}，Ang-2表达水平显著高于健康儿童[pg/mL：(99.24±12.59)比(36.14±11.07)， t＝-27.34， P<0.05]。腹型HSP患儿中血清Ang-1、Tie-2的表达水平及血清Ang-1/Ang-2比值低于单纯型和关节型患儿{[pg/mL：(1328.10±13.32)比(1521.35±17.68)比(1523.58±13.70)；(295.77±24.77)比(349.87±30.02)比(344.90±35.02)]；[(12.16±2.13)比(16.37±3.41)比(16.67±2.98)]， F值分别为1.67、1.50、1.31， P值均<0.05}，Ang-2表达水平明显高于单纯型和关节型患儿[pg/mL：(111.85±10.20)比(93.70±7.82)比(92.16±7.22)， F＝1.70， P<0.05]。尿Ang-1/尿肌酐、尿Ang-2/尿肌酐、尿Tie-2/尿肌酐及尿Ang-1/Ang-2比值在HSP患儿与健康儿童之间，差异均无统计学意义( P值均>0.05)。尿Ang-1/尿肌酐、尿Ang-2/尿肌酐、尿Tie-2/尿肌酐及尿Ang-1/Ang-2比值在单纯型、关节型和腹型HSP患儿之间相比，差异均无统计学意义( P值均>0.05)。 结论:Ang-1、Ang-2和Tie-2在血清中的表达水平较尿液对儿童HSP的发生发展更具临床意义。Ang/Tie-2信号通路可能参与了儿童HSP的发生，并在腹型HSP患儿的发病过程中起到更加重要的作用。

抗血管内皮生长因子(VEGF)治疗应用于眼底新生血管疾病领域以来，在提高视力、稳定疾病病变和在某些情况下逆转疾病方面显示了卓越的效果。但抗VEGF治疗需要频繁玻璃体内注射给药，患者治疗负担重，长期疗效受影响。前期临床研究发现，调控血管生成素(Ang)/含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶(Tie)通路在眼底新生血管疾病的治疗中有较好的效果。目前已发布了3个Ang/Tie通路阻断药物治疗眼底新生血管疾病的临床研究数据，其中靶向VEGF-A和Ang-2的双特异性免疫球蛋白G1抗体faricimab进入了Ⅲ期临床试验并达到终点，faricimab的2种延长治疗间隔(12周和16周)的给药方案均被证实有效。本文基于已发表的研究报告，就调控Ang/Tie通路在眼底新生血管性疾病治疗中的作用及临床应用作一综述，总结分析Ang/Tie通路的作用机制以及未来药物的应用前景。

目的:探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)功能的影响,以及Ang1/Tie2通路在其中的作用.方法:培养HUVEC细胞,不同浓度脂多糖(LPS)和aFGF刺激HUVEC,CCK-8实验确定刺激浓度,并观察生长活性;细胞划痕实验检测aFGF对HUVEC迁移能力的影响;Western blot实验检测增殖蛋白PCNA,凋亡蛋白Cleaved caspase 3、Bax,抗凋亡蛋白Bcl2,炎症相关蛋白NLRP3、IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-4和IL-10,血管生成相关蛋白CD31和通路相关蛋白Ang1、Tie2的表达水平;免疫荧光实验检测PCNA、Cleaved caspase 3、IL-6、IL-10以及CD31的荧光强度.分离小鼠主动脉,离体培养后进行免疫荧光实验,观察PCNA、Cleaved caspase 3、IL-6、IL-10以及CD31蛋白的荧光强度.结果:CCK-8实验显示LPS抑制HUVEC生长活性,5 μg/mL为最适刺激浓度(P＜0.01);aFGF促进HUVEC生长活性,其中100 ng/mL为最适刺激浓度(P＜0.01).细胞划痕实验提示aFGF促进细胞迁移.Western blot和免疫荧光实验结果显示,aFGF促进增殖蛋白和血管功能蛋白表达,抑制凋亡蛋白和炎症蛋白表达,上调Ang1/Tie2通路蛋白(P＜0.05).离体血管免疫荧光实验显示aFGF上调PCNA、IL-10以及CD31的荧光强度,下调Cleaved caspase 3和IL-6的荧光强度(P＜0.05).结论:aFGF增强HUVEC生长活性和迁移能力,促进其增殖,抑制其凋亡,并通过调控Ang1/Tie2通路抑制炎症反应,促进血管功能修复.

脓毒症以及伴随的多器官功能障碍是一组常见的临床综合征,其患病率随着人口老龄化逐年上升.全球每年发生2 000万例脓毒症,死亡率为26%.早期准确诊断脓毒症,有利于及时采取针对性的治疗策略,这是降低病死率的关键.内皮细胞是外源病原体或内源性损伤信号的早期作用对象.研究提示,内皮细胞的结构改变与功能活化在脓毒症的发生、发展中发挥重要作用.作为内皮细胞专属信号通路,血管生成素(angiopoietin,Ang)/酪氨酸激酶受体(tyrosine kinase receptor,Tie)在内皮细胞的异常激活和损伤中发挥重要作用.Ang/Tie信号通路主要包括2种位于内皮细胞中的酪氨酸激酶受体(Tie1、Tie2)和4种分泌性糖蛋白配体(Ang-1、Ang-2、Ang-3、Ang-4).机制研究方面,Ang-1可持续性激活Tie2受体,维持细胞与细胞、细胞与基质间的相互作用,支持血管内皮细胞正常的生理功能;Ang-2是Ang-1拮抗剂,可竞争性阻断Ang-1与Tie2受体结合.脓毒症环境下,Ang-1下降,Ang-2升高,Ang-1/Ang-2的比值下降.Ang-2竞争性阻断Ang-1与可溶性Tie2受体结合,内皮细胞处于严重异常激活状态.Ang-2介导肝素酶的释放导致糖萼损伤,可引起血管通透性增加;Ang-2可促进炎症反应;Ang/Tie信号系统失调介导凝血功能障碍,Ang-2升高是弥散性血管内凝血的前哨性事件.临床病情监测方面,Ang-2>5.61 ng/mL,诊断脓毒症的灵敏度为74.36%;Ang-2持续升高,提示内皮功能难以恢复,器官发生功能性改变.早期动态监测Ang-2可用于预测脓毒症相关肺损伤、急性肾损伤.Ang-2/Ang-1比值上升、Ang1/可溶性Tie2比值下降可预测脓毒症患者90 d病死率(ROC曲线面积分别为0.787和0.704).Ang-2和可溶性Tie-2水平下降,则提示脓毒症血浆置换有效.靶向Ang/Tie信号通路的动物实验获得一定成功,但目前临床试验未能获得有价值的结果.脓毒症相关Ang/Tie信号通路有待于进一步深入研究.

目的 探讨5α-羟基木香酸(5α-hydroxycostic acid,5α-HA)体外抑制脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)模型的作用及其机制.方法 体外培养大鼠脉络膜血管内皮细胞(choroidal vascular endothelial cells,CECs)后分为(n=3):空白对照组、模型组[30 ng/mL 抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)164]、干预组(30 ng/mL VEGF164+100 μmol/L 5α-HA)、抑制剂组[30 ng/mL VEGF164+5 μmol/L Semaxanib(VEGFR2 特异性阻断剂)].CCK-8 实验检测各组CECs的增殖情况,细胞划痕实验、Transwell实验以及Matrigel基质胶管腔形成实验分别观察各组CECs的增殖、迁移以及管腔形成.RT-qPCR检测各组细胞渗漏相关因子如血管生成素2(Angiopoietin 2,Ang 2)、血管内皮钙黏蛋白(VE-Cadherin)、紧密连接蛋白(ZO-1)的mRNA水平的表达;Western blot检测各组细胞信号通路及渗漏相关蛋白P-VEGFR2、P-Tie2、P-FAK、VE-Cadherin、ZO-1、Occudin的表达;免疫荧光检测各组细胞中Ang 2蛋白的表达,统计分析上述各组间的指标差异.结果 CCK-8实验表明:与模型组比较,干预组5α-HA作用于CECs后能抑制CECs的异常增殖(P＜0.01).细胞划痕实验、Transwell实验以及Matrigel基质胶管腔形成实验表明:干预组能扭转模型组VEGF164引起的CECs迁移及管腔形成(P＜0.01).RT-qPCR结果显示:干预组能抑制模型组中Ang 2 mRNA的上调以及VE-Cadherin和ZO-1的下调(P＜0.01).Western blot结果显示:干预组能减少模型组中 P-VEGFR2、P-Tie2 及 P-FAK 蛋白的表达(P＜0.01),同时上调 VE-Cadherin、ZO-1 以及 Occudin 蛋白的表达(P＜0.05).细胞免疫荧光实验结果显示,与模型组比较,干预组能减少模型组中Ang 2蛋白的表达(P＜0.01).结论 5α-HA可能通过抑制VEGFR2、Tie2双途径磷酸化以及抑制VEGFR2/FAK信号通路抑制VEGF164诱导的CECs增殖、迁移以及管腔形成.

[目的]通过对糖尿病溃疡组织中酪氨酸激酶受体(Tie-2)、血管紧张素I(Ang-1)及血管紧张素Ⅱ(Ang-2) mRNA转录水平的动态观察,探讨生肌象皮膏对糖尿病溃疡大鼠Ang/Tie-2通路的影响.[方法]首先应用链脲佐菌素(STZ)经大鼠尾静脉注射及背部打孔法制备2型糖尿病难愈性溃疡动物模型,按照血糖和体质量分层随机分为糖尿病对照组、生肌象皮膏组、凡士林组及空白对照组.生肌象皮膏组采用生肌象皮膏纱条于溃疡处外敷,凡士林组用凡士林纱条外敷,空白对照组、糖尿病对照组均以生理盐水纱条外敷,各组分别于创伤后1、3、7、14、21 d分别处死部分大鼠,并取溃疡组织,应用聚合酶链式反应(PCR)法检测各组大鼠溃疡组织中Ang-1、Ang-2和Tie-2 mRNA的转录水平.[结果]生肌象皮膏组各时间点肉芽组织中Ang-1、Tie-2蛋白表达水平均高于其余各组,Ang-2表达水平均低于其余各组(P<0.05).[结论]生肌象皮膏可能通过增加创面肉芽组织中Ang-1,Tie-2的表达水平,抑制Ang-2表达方式,促进糖尿病大鼠溃疡面血管新生,加快糖尿病溃疡愈合.

表达Tie2的单核巨噬细胞(Tie2 expressing monocyte/macrophages,TEMs)是肿瘤相关巨噬细胞的重要亚群,存在于外周血、实体肿瘤等组织中.在肿瘤免疫抑制微环境中,TEMs能促进肿瘤生长、转移和复发,是肿瘤预后不良的新的指标,其作用机制主要通过促进血管生成、调节血管重塑、增加微血管密度、促进肿瘤微血管的形成;同时还可以抑制T细胞增殖、促进Treg的浸润、抑制抗肿瘤免疫应答.Ang-Tie2介导的Rheb/mTOR/p70S6K1信号通路是TEMs在肿瘤免疫微环境中促进肿瘤微血管生成的作用机制,对该细胞及相关通路的干预将成为新的肿瘤治疗靶点和策略.

目的 探讨负压创面治疗(NPWT)糖尿病大鼠创面微血管的改变,进一步分析其潜在的分子机制.方法 将96只大鼠随机分为NPWT组、NPWT+Tie-2组、纱布组(Gauze组)、Gauze+Tie-2组.NPWT组、NPWT+Tie-2组创面选择合适尺寸的VSD敷料覆盖,Gauze组和Gauze+Tie-2组进行常规纱布换药.NPWT+Tie-2组及Gauze+Tie-2组大鼠腹腔注射Tie-2抑制剂50 mg/kg.于术后1、3、7、10d取创面肉芽组织行HE染色、免疫组化、mRNA及蛋白水平检测.结果 NPWT组中Ang-1的mRNA及蛋白表达水平在术后第1、3天显著低于其他3组(P＜0.05),术后第7、10天时呈增加趋势且其表达水平显著高于其他3组(P＜0.05).NPWT组中Ang-2的mRNA表达水平在术后第1、3天显著高于其他3组(P＜0.05),术后第7、10天时急剧下降且其表达水平显著低于其他3组(P＜0.05).结论 糖尿病创面愈合早期负压使Ang-2能够优先被Tie-2受体绑定并产生磷酸化作用,血管处于可塑和失稳定状态,促进微血管发芽;在创面愈合后期负压能够促使Ang-1和Tie-2受体优先绑定使激酶磷酸化过程提前出现,血管处于不可塑和稳定状态,创面微环境逐渐稳定并促进微血管成熟.因此,负压通过Ang/Tie-2信号通路促进糖尿病创面微血管成熟.

目的:通过观察化痰活血扶正方拆方后的相关药组对肝纤维化大鼠模型Ang-1、Ang-2/Tie-2信号通路的影响探讨其相关作用机制.方法:选择雄性SD大鼠90只,随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组、低中高剂量化痰组、低中高剂量活血化瘀组、低中高剂量扶正组、低中高剂量化痰活血扶正组.除正常组外,其余各组大鼠均用10％ CCl4橄榄油溶液按3 mI/kg剂量皮下注射,每周2次,共8周,复制大鼠肝纤维化模型.造模开始次日,各低、中、高剂量组分别按照0.25,0.5,1.0 g/kg剂量,每日1次、予10 mL/kg体质量不同浓度的药物灌胃,阳性药物组给予秋水仙碱0.05 mg/kg体重灌胃,每日1次,用药8周.PCR观察治疗前后的Ang-1 mRNA,Ang-2mRNA,Tie-2mRNA,HE染色后光镜下观察其病理变化.结果:干预后,模型组的Ang-1mRNA、Tie-2mRNA的表达较正常组升高,有统计学意义(P＜0.05);模型组的Ang-2mRNA较正常组减低,结果有统计学意义(P＜0.05)、FD、TD、TZ、TG、QD、QZ、QG组的Ang-1 mRNA表达降低,与模型组比较有统计学意义(P＜0.05);XD、FG、QZ组的Ang-2mRNA表达虽然较模型组有所升高,但无统计学意义(P＞0.05);XD、XG、TD、TZ、TG、QD、QZ、QG组的Tie-2mRNA表达降低,与模型组相比有统计学意义(p＜0.05);各中药治疗的大鼠病理组织学较模型组均有不同程度的改善.结论:化痰活血扶正方相关药组能够减轻肝纤维化大鼠模型的肝纤维化改变及进程,其机制可能与调控Ang-1、Ang-2/Tie-2 mRNA的表达,延缓乃至阻断肝窦毛细血管化的形成有关.

目的 观察血管生成素-2(Ang2)上调后对血管瘤干细胞(HemSCs)生物学功能的影响.方法 通过酶消法结合免疫磁珠分选技术分离,纯化提取HemSCs;通过慢病毒转染的方法获得Ang2上调稳定表达的HemSCs;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测Ang2上调的HemSCs中分泌型Ang2、血管内皮生长因子(VEGF)表达水平;EDU法、细胞迁移(Transwell)法观察Ang2上调的HemSCs细胞增殖,迁移能力变化;通过蛋白质印迹法(Western blot)检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)通路关键靶蛋白表达变化.结果 Ang2上调的HemSCs细胞增殖能力增强(空白组:117.000±3.786,对照组:126.000±3.464,实验组:179.667±2.603,P＜0.01)、迁移能力增强(空白组:102.667±2.028,对照组:108.000±2.646,实验组:308.667±2.603,P＜0.01);HemSCs Ang2上调组中Ang2(空白组:60.103±0.361,对照组:69.343±0.526,实验组:1962.440±43.205,P＜0.01)、VEGF(空白组:92.667±3.480,对照组:91.000±1.523,实验组:455.000±15.100,P＜0.01)分泌蛋白表达上调;PI3K-Akt信号通路相关蛋白:Akt1(空白组:0.612±0.163,对照组:0.624 ±0.163,实验组:0.907±0.162,P＜0.01)、PI3K(空白组:0.624±0.163,对照组:0.474±0.163,实验组:0.766±0.162,P＜ 0.01)、PI3KR5(空白组:0.505±0.163,对照组:0.405±0.163,实验组:0.890±0.162,P＜0.01)、PAkt(空白组:0.549±0.163,对照组:0.644±0.163,实验组:0.684 ±0.162,P＜0.01)、p38(空白组:0.618 ±0.163,对照组:0.759±0.163,实验组:0.947±0.162,P＜0.01)在HemSCs Ang2上调组中表达增强.结论 Ang2上调可通过PI3K-Akt信号通路增强HemSCs增殖,迁移能力.