目的 研究敲除血小板反应蛋白1(thrombospondin 1,TSP-1)在四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝损伤中的保护作用.方法 选取C57BL/6J小鼠16只,TSP-1基因敲除小鼠8只:C57BL/6J小鼠分为WT组和WT+CCl4组,TSP-1基因敲除小鼠为TSP-1-/-+CCl4组;WT+CCl4和TSP-1-/-+CCl4组给予0.5 mL CCl4+9.5 mL/kg橄榄油进行腹腔注射建立急性肝损伤模型,WT组注射橄榄油10 mL/kg作为对照.通过HE染色以及血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)观察各组小鼠肝脏损伤情况及炎症反应程度;同时检测肝组织丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)的含量并通过免疫组化和TUNEL检测凋亡的变化.结果 敲除TSP-1对CCl4诱导的急性肝损伤具有明显的改善作用,表现为血清AST、ALT、IL-6和TNF-α的降低和肝细胞坏死的减少,以及降低MDA含量和升高GSH含量,减少肝组织中凋亡及caspase-3的表达.结论 敲除TSP-1对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤具有明显的保护作用,其机制可能与抑制炎症、氧化应激和细胞凋亡相关.

目的 筛选紫苏叶发挥保肝活性的关键组分并探究其作用机制.方法 小鼠随机分为 8 组,正常组和模型组灌胃PBS,给药组分别灌胃 30 mg/kg奥贝胆酸阳性药和120 mg/kg紫苏叶水煎液、醇沉上清液、醇沉固体、总黄酮以及多糖,每天1 次,连续7d.末次给药后2h,各组小鼠(除正常组外)腹腔注射0.5%CCl4 花生油(10 mL/kg)进行造模.造模结束后,收集血清和肝脏组织,全自动生化分析仪检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性及总胆红素(TBIL)水平,HE染色观察肝组织病理形态变化,试剂盒检测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,ELISA法检测肝组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)及白细胞介素-1β(IL-1β)水平,RT-qPCR法检测肝组织NLRP3、半胱肽氨酸蛋白酶-1(caspase-1)和IL-1β mRNA表达.结果 与模型组比较,紫苏叶固体组和总黄酮组小鼠血清ALT、AST活性和TBIL水平均降低(P<0.05,P<0.01),肝组织SOD活性和TGF-β1 水平升高(P<0.05,P<0.01),MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β水平和NLRP3、caspase-1、IL-1β mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01).结论 水溶性总黄酮是紫苏叶发挥保肝作用的关键活性组分,抑制 NLRP3/caspase-1 炎性小体信号通路可能是其抗 CCl4 致急性肝损伤的作用机制之一.

目的:探究肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对CCl4 所致小鼠肝脏损伤IL-8、TNF-α、IL-4、IL-21表达水平的影响.方法:建立CCl4急性肝损伤小鼠模型,通过梯度密度离心分离肝实质细胞及白细胞,体外加入不同浓度HGF,ELISA检测细胞因子表达水平.结果:体内损伤模型中,肝实质细胞实验结果显示,10 ng/mL HGF组与损伤肝细胞组相比IL-8表达水平降低(P<0.05),50 ng/mL HGF组与 10 ng/mL HGF组相比IL-8 表达水平升高(P<0.05);与损伤肝细胞组相比,25 ng/mL HGF组(P<0.05),50 ng/mL HGF组(P<0.05)IL-4表达水平均降低.白细胞实验结果显示,与损伤白细胞组相比,10 ng/mL HGF组(P<0.05)、25 ng/mL HGF组(P<0.05)TNF-α表达水平均降低.体外损伤模型中,肝实质细胞实验结果显示,与正常对照组相比,25 ng/mL HGF组(P<0.05)、50 ng/mL HGF组(P<0.05)TNF-α表达水平均降低;25 ng/mL HGF组与正常对照组相比IL-4表达水平降低(P<0.05).白细胞实验结果显示,50 ng/mL HGF组与10 ng/mL HGF组相比TNF-α表达水平升高(P<0.001);与正常对照组相比CCl4模型组(P<0.05)、10 ng/mL HGF组(P<0.05)、25 ng/mL HGF组(P<0.05)、50 ng/mL HGF组(P<0.05)IL-21表达水平均降低.结论:CCl4致小鼠肝脏急性受损时,HGF可降低肝实质细胞分泌炎性因子IL-8,TNF-α,IL-4以及肝脏白细胞TNF-α的表达水平.

目的 基于核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)-抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)信号通路研究竹节参多糖(Panax japonicus polysaccharide)保护四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)所致大鼠急性肝损伤的作用机制.方法 通过CCl4间隔诱导法建立急性肝损伤大鼠模型,给予水提醇沉法制备的竹节参多糖治疗7 d后取材,通过苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化;全自动生化仪检测大鼠血清中肝功能相关指标;ELISA法检测肝组织氧化应激水平;免疫组化法观察大鼠肝组织Nrf2表达;Western blotting测定大鼠肝组织Nrf2-ARE通路相关蛋白表达.结果 与模型组比较,竹节参多糖组大鼠血清中肝功能相关指标呈不同程度的降低(P＜0.05、0.01),肝组织中Nrf2-ARE信号通路明显激活(P＜0.01),肝脏中脂类过氧化产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平降低(P＜0.01),抗氧化酶活性明显升高(P＜0.05、0.01),细胞质中氧化应激效应物Nrf2阳性的细胞数有所减少(P＜0.01),大鼠肝脏损伤程度明显减轻.结论 竹节参多糖可激活Nrf2-ARE信号通路,增强机体的抗氧化酶系表达,减轻CCl4引起的氧化损伤.

目的 探讨激活素ⅡA型受体(ActRⅡA)在四氯化碳化学性诱导小鼠急性肝损伤中的表达.方法 将48只清洁级C57BL/6近交系雄性小鼠随机分为2组,分别为对照(橄榄油)组和四氯化碳染毒组,每组24只.采用腹腔注射方式进行一次性染毒,染毒容量为10 ml/kg.检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活力,采用病理形态学方法观察肝组织损伤程度,采用免疫组织化学染色法及实时荧光定量PCR法分别检测肝组织激活素A(ActivinA)和其信号传导分子ActRⅡA蛋白的阳性表达强度及mRNA的表达水平.结果 四氯化碳染毒后7d内小鼠血清ALT、AST的活力和肝损伤面积百分比以及肝脏内Activin A和ActRⅡA蛋白的阳性表达强度和mRNA的表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);且四氯化碳一次性染毒后,随着时间的延长,小鼠血清ALT、AST的活力和肝损伤面积百分比以及肝脏内Activin A和ActRⅡA蛋白的阳性表达强度和mRNA的表达水平均呈下降趋势.结论 ActRⅡA作为激活素的主要受体,其表达升高是介导CCl4诱导急性肝损伤的重要致病因素,阻断其作用可能成为治疗急性肝损伤疾病的有效方法.

目的 探讨基因沉默小鼠Smad3对四氯化碳(CCl4)诱导急性肝损伤的保护作用及可能机制.方法 将36只小鼠随机平均分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组,向Ⅱ、Ⅳ组小鼠尾静脉注射Smad3 shRNA以抑制Smad3基因表达,Ⅰ、Ⅲ组注射空载体作为对照;向Ⅲ、Ⅳ组小鼠腹腔内注射CCl4橄榄油溶液诱导小鼠产生肝脏损伤,构建小鼠肝损伤模型,Ⅰ、Ⅱ组小鼠仅注射橄榄油作为对照;实时荧光定量 PCR(RT-PCR)法检测小鼠肝脏组织Smad3 mRNA的表达水平;采用赖氏法检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)水平;取小鼠肝脏组织切片进行苏木素-伊红(HE)染色,在显微镜下观察其病理改变.结果 Ⅳ组小鼠肝组织 Smad3 mRNA表达水平明显低于Ⅲ组(P<0.01);血清 ALT、AST水平明显低于Ⅲ组(P<0.01);显微镜下观察可见Ⅳ组小鼠肝组织细胞变性、坏死数明显少于Ⅲ组,肝组织损伤程度明显较轻.结论 基因沉默Smad3可减轻 CCl4对小鼠的肝脏损伤作用,其机制可能为Smad3基因沉默使小鼠体内自身产生Smad3蛋白减少,削弱了Smad3蛋白对激活素信号途径的调节作用,减轻激活素(ACT)A介导的肝损伤程度.

目的:以半乳糖基修饰的脂质(LAC)为肝靶向材料,制备载波棱芴酮肝靶向脂质体,考察其与波棱芴酮脂质体对CCl4致肝损伤小鼠保护作用的疗效差异.方法:采用薄膜分散法制备波棱芴酮半乳糖化脂质体、波棱芴酮脂质体,并对半乳糖化的波棱芴酮脂质体进行质量评价.体内药效实验,小鼠随机分为空白组、模型组、波棱芴酮单体组、波棱芴酮脂质体组、波棱芴酮半乳糖化脂质体组.每日给小鼠尾静脉注射生理盐水或单体、波棱芴酮脂质体、波棱芴酮半乳糖化脂质体1次,给药剂量20 mg/kg,共7天.实验末期,腹腔注射CCl4建立小鼠急性肝损伤模型.肝脏称重,计算肝脏系数,并测定各组小鼠天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等指标,HE染色对肝组织进行组织病理学检查.结果:制备的波棱芴酮半乳糖化脂质体平均粒径(128.9±1.8)nm,分散系数为0.172±0.006,给药剂量为20mg/kg的体内药效结果表明,与波棱芴酮脂质体组相比,半乳糖化的波棱芴酮脂质体组显著降低CCl4致急性肝损伤模型小鼠肝脏系数和血清ALT、AST水平,肝组织病理形态损伤减轻,肝脏SOD和GSH-Px活性升高,减少肝组织匀浆中MDA的含量.结论:经半乳糖基修饰的脂质体能够提高药物在肝脏的聚集,增强CCl4致化学性肝损伤小鼠的保护作用.

探讨过墙风总黄酮(CPTF)对四氯化碳(CCl4)致急性肝损伤小鼠的保护作用及作用机制.将60只小鼠随机分为正常组、模型组、水飞蓟素组(150 mg/kg)、CPTF高、中、低剂量组(200、100、50 mg/kg),每组10只.各给药组每天灌胃对应剂量的药物(25 mL/kg),正常组与模型组每天灌胃等体积蒸馏水,连续灌胃10 d.末次给药2h后,除正常组腹腔注射花生油外,其余各组均腹腔注射0.1％的CCl4花生油溶液(10 mL/kg).禁食不禁水16 h后,眼球取血,处死后收集肝脏.生化法检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)在肝组织中的含量.蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测肝组织中酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)、磷酸化JAK2(p-JAK2)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)和磷酸化STAT3(p-STAT3)含量,HE染色观察肝组织病理学变化.结果显示,与模型组比较,CPTF可显著改善肝组织病变,降低血清中AST、ALT和MDA含量(P＜0.05),提高T-SOD和GSH-PX活性(P＜0.05),下调肝组织中TNF-α、IL-1β和IL-6表达(P＜0.05),并抑制p-JAK2和p-STAT3水平(P＜0.05).综上所述,CPTF对CCl4致急性肝损伤小鼠具有保护作用,可减轻肝组织损伤程度,其作用机制可能与抗氧化、抑制炎症反应,并调控JAK2/STAT3信号通路有关.

目的 基于NF-κB通路探讨延龄草醇提取物对CCl4所致大鼠急性肝损伤的保护作用及机制.方法 把48只SD大鼠,随机分为空白对照组、模型组、联苯双酯组(200 mg·kg-1)、延龄草醇提取物低、中、高剂量组(100,500,1 000 mg·kg-1)6组.以CCl4诱导急性肝损伤模型,造模后灌胃给药,治疗持续一段时间后取材.称重后计算大鼠肝脏脏器系数;检测各组大鼠血清中ALT、AST的活性;利用HE染色切片观察各组肝组织形态学的变化;以RT-PCR法检测各组大鼠肝组织中TNF-α、IL-1β,IL-6的基因表达;通过Western blot检测各组肝组织中NF-κB的表达量.结果 与模型组相比,延龄草醇提物各治疗组可降低肝脏脏器系数,高剂量组肝小叶结构完整,肝细胞排列规则,大小均匀;RT-PCR结果显示,延龄草醇提取物能够显著降低TNF-α、IL-1β、IL-6的表达.Western blot结果显示,延龄草醇提物显著地降低了NF-KB的表达.结论 延龄草醇提取物能够通过抑制NF-κB的表达,保护CC14诱导的大鼠急性肝损伤.

目的 研究睡莲花isostrictiniin的体外抗氧化能力和对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝损伤的防治作用.方法 采用总抗氧化能力测定(FRAP法)、DPPH·清除实验和还原能力测定探讨睡莲花isostrictiniin的抗氧化活性.通过CCl4所致小鼠急性肝损伤模型评价isostrictiniin的肝保护作用,将60只健康昆明种小鼠随机分为6个组:空白组、模型组、联苯双酯组(150mg/kg体质量)、isostrictiniin低、中、高剂量组(25、50、100mg/kg体质量),连续灌胃7d.最后次给药lh后,除空白组腹腔注射花生油溶液(0.1 mL/10 g体质量),其它各组小鼠腹腔注射0.10％的CCl4花生油溶液按(0.1 mL/10 g体质量).结果 睡莲花isostrictiniin具有较好的总抗氧化能力,浓度范围在10～50 μg/mL其FRAP值大于同浓度下Vc的FRAP值;且该化合物具有较强还原能力,随着浓度的增大,吸光值也增大.Isostrictiniin对DPPH·清除能力的IC50值为8.95 μg/mL,接近于Vc(IC506.33 μg/mL)的清除能力.与模型组比较,isostrictiniin中、高剂量组(50、100 mg/kg)血清ALT、AST水平及肝脾脏指数降低,差异有统计学意义(P＜0.01);肝组织匀浆中MDA和NO的含量降低,SOD和GSH的活性升高,差异有统计学意义(P＜0.01).病理组织学检查结果可知isostrictiniin中、高(50、100 mg/kg)剂量可以降低CCl4对小鼠肝脏组织的病理损伤.结论 睡莲花isostrictiniin有较好的抗氧化活性,对CCl4所致小鼠急性化学性肝损伤具有良好的防治作用.