目的:分析三亚市高风险人群地中海贫血（地贫）基因突变类型及其分布特征，并对血常规筛查效果进行评估，为三亚市制定地贫防治措施提供科学依据。方法:采用回顾性分析方法，收集三亚市妇幼保健院2019年1月至2021年8月进行地贫基因筛查的高风险人群的检测样本数据及临床资料，分析地贫基因突变类型及其分布特征，并根据地贫基因筛查结果评估血常规指标[平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白含量（MCH）]筛查的漏检率及灵敏度。结果:共纳入5 760例高风险人群的地贫基因筛查结果，检出地贫基因突变样本3 868例，检出率为67.15%。其中，α-地贫基因突变样本2 979例，检出率为51.72%，包括常见基因型样本2 966例（99.56%），以αα/-α 3.7基因型为主（20.14%，600/2 979）；罕见基因型样本共13例（0.44%），含αα/-- THAI 4例，α CD40（AAG>AA-）α/αα 3例，α PPα/αα 2例，Fusion gene/αα、Fusion gene/α WSα、α WSα/α PPα、α CD40（AAG>AA-）α/α WSα各1例。检出β-地贫基因突变样本340例，检出率为5.90%，包括常见基因型样本336例（98.82%），以β CD41/42/β N基因型为主（57.65%，196/340）；罕见基因型样本共4例（1.18%），含β CD5（-CT）/β N、β IVS-Ⅱ-2（-T）/β N、β IVS-Ⅱ-761（-T）/β N和β Initiation（ATG>AGG）/β N各1例。检出αβ-复合型地贫基因突变样本549例，检出率为9.53%，以α缺失型复合β CD41/42基因型为主（61.02%，335/549）。可回溯MCV、MCH的样本共4 226例，其中经地贫基因筛查检出地贫基因突变样本3 007例，MCV联合MCH指标异常2 584例，血常规筛查漏检样本423例，漏检率为14.07%（423/3 007）；漏检样本主要为α静止型，占总漏检样本的89.13%（377/423）。MCV联合MCH对α-、β-、αβ-复合型地贫的筛查灵敏度分别为82.65%、98.07%和98.15%。 结论:三亚市地贫基因突变类型复杂多样，MCV联合MCH的血常规筛查存在一定漏检。

目的:探讨环指蛋白43（RNF43）对黑色素瘤中CD8 + T细胞介导的抗肿瘤免疫反应的调节作用。 方法:利用慢病毒感染技术对小鼠黑色素瘤细胞株B16-OVA进行RNF43基因过表达与敲低；通过小鼠皮下成瘤实验检测Lv-Ctrl-OE组、Lv-RNF43-OE组、Lv-Ctrl-KD组和Lv-RNF43-KD组小鼠黑色素瘤细胞株B16-OVA体内增殖情况，通过流式细胞术检测黑色素瘤肿瘤免疫微环境中CD8 + T细胞穿孔素和γ干扰素（IFN-γ）的表达水平；采用实时荧光定量PCR实验检测细胞中β-catenin和程序性死亡受体配体1（PD-L1） mRNA的表达水平；通过双荧光素酶报告基因实验检测RNF43对PD-L1的转录调控作用。 结果:本研究成功构建RNF43稳定过表达与敲低的小鼠黑色素瘤细胞株Lv-RNF43-OE和Lv-RNF43-KD。小鼠皮下成瘤实验结果显示，Lv-RNF43-OE组瘤体质量为（0.08±0.06）g，明显小于Lv-Ctrl-OE组的（1.04±0.52）g，差异有统计学意义（ t=3.71， P=0.032）；Lv-RNF43-KD组瘤体质量为（1.94±0.29）g，与Lv-Ctrl-KD组的（1.15±0.74）g相比差异无统计学意义（ t=-1.70， P=0.164）。流式细胞术结果显示，Lv-RNF43-OE组CD8 + T细胞穿孔素荧光强度为9 034±2 628，明显高于Lv-Ctrl-OE组的3 847 ±1 637，差异有统计学意义（ t=-3.35， P=0.015）；Lv-RNF43-KD组CD8 + T细胞穿孔素荧光强度为966±247，明显低于Lv-Ctrl-KD组的2 226±646，差异有统计学意义（ t=3.16， P=0.034）；Lv-RNF43-OE组CD8 + T细胞IFN-γ荧光强度为2 422±429，明显高于Lv-Ctrl-OE组的1 688±324，差异有统计学意义（ t=-2.73， P=0.034）；Lv-RNF43-KD组CD8 +T细胞IFN-γ荧光强度为614（454，863），与Lv-Ctrl-KD组的1 159（1 152，2 068）相比差异有统计学意义（ Z=-1.96， P=0.050）。实时荧光定量PCR实验结果显示，Lv-RNF43-OE组β-catenin mRNA相对表达量为0.67±0.16，明显低于Lv-Ctrl-OE组的1.00±0.11，差异有统计学意义（ t=2.98， P=0.041）；Lv-RNF43-OE组PD-L1 mRNA相对表达量为0.32±0.09，明显低于Lv-Ctrl-OE组的1.00±0.09，差异有统计学意义（ t=9.13， P=0.001）。双荧光素酶报告基因实验结果显示，pCMV6-NC组、RNF43组、RNF43+β-catenin组和β-catenin组PD-L1启动子荧光素酶活性分别为1.00±0.00、0.84±0.00、1.49±0.00和1.57±0.03（ F=2 218.33， P<0.001），进一步两两比较发现，与pCMV6-NC组相比，RNF43组PD-L1启动子荧光素酶活性明显降低（ P<0.001），RNF43+β-catenin组和β-catenin组PD-L1启动子荧光素酶活性明显升高（ P<0.001； P=0.003）；与RNF43组相比，RNF43+β-catenin组PD-L1启动子荧光素酶活性明显升高（ P<0.001）。 结论:RNF43可能通过抑制β-catenin的表达降低黑色素瘤中PD-L1 mRNA的表达并促进CD8 + T细胞介导的抗肿瘤免疫反应。

目的:研究重症流行性感冒（流感）患者外周血T淋巴细胞亚群的特点及与预后相关的因素。方法:本研究为单中心横断面研究，选取2017年8月至2018年4月于北京协和医院住院的流感患者。选取体检中心年龄匹配的108名健康体检者作为对照组。将流感患者按轻症、重症及重症存活、重症死亡分组，比较流感患者与健康对照及不同组流感患者的临床及淋巴细胞亚群特点。运用流式细胞仪检测外周血淋巴细胞亚群。结果:研究共纳入42例流感患者，其中重症24例（死亡6例），轻症18例。流感患者总体的外周血淋巴细胞[699（505,1 093）个/μl比1 963（1 603,2 394）个/μl]、B细胞[75（37,140）个/μl比179（119,239）个/μl]、自然杀伤（NK细胞）[64（37,133）个/μl比356（231,496）个/μl]、CD4 +T细胞[353（237,505）个μl比663（531,824）个/μl]及CD8 +T细胞[210（126,348）个/μl比481（341,693）个/μl]均显著低于健康对照组（ P值均<0.001）；且重症死亡组的T细胞总数和CD8 +T细胞计数显著少于存活组[T细胞总数370（260,537）个/μl比722（390,990）个/μl， P<0.05；CD8 +T细胞计数87（74,105）个/μl比222（154,404）个/μl， P值均 <0.01]。CD8 +T细胞激活指标CD8 +HLA-DR/CD8 +轻症组明显高于重症组[（53.7±19.2）%比（38.5±21.7）%， P<0.05]；重症存活组明显高于重症死亡组[（46.1±19.1）%比（18.2±14.6）%， P<0.01]；CD8 +CD38 +/CD8 +轻症组明显高于重症组[74.8%（64.1%,83.7%）比53.3%（45.3%,67.2%）， P<0.01]。回归分析显示CD8 +T细胞计数（ OR=0.952，95 %CI 0.910~0.997， P=0.035）及CD8 +HLA-DR/CD8 +T比例（ OR=0.916，95 %CI 0.850~0.987， P=0.022）与重症流感患者的病死率呈负相关。动态监测血常规可见轻症患者起病后1 d内外周血淋巴细胞计数大幅下降，平均降幅57.0%，但在病后1周即能基本回升至原先水平。 结论:流感患者病程中外周血淋巴细胞各亚群数量显著减低，重症患者CD8 +T细胞在外周血中的计数和激活水平与死亡风险呈负相关趋势，有望作为预估重症流感患者预后的指标。

Objective::To analyze the proportion of peripheral regulatory T cells (Tregs) and the expression of the immune checkpoint molecules T-cell immunoglobulin and ITIM domain (TIGIT) and CD226 on Tregs in patients with recurrent spontaneous abortion (RSA).Methods::The proportion of CD3 +CD4 +CD25 +Foxp3 + Tregs and the expression levels of CD226 and TIGIT on Tregs in 30 normal pregnant women and 28 patients with RSA were determined via flow cytometry. Results::The proportion of Tregs in the RSA group (4.41 % ± 1.54%) was significantly lower than that in the control group (5.27% ± 1.52%, P = 0.0374). Compared with the normal pregnant women, patients with RSA showed decreased TIGIT expression (54.75 ± 9.70% vs. 63.07 ± 12.48%, P = 0.0066) and increased CD226 expression on Tregs (25.59% ± 8.22% vs. 20.46% ± 6.97%, P = 0.0168). The ratio of CD226 to TIGIT in the RSA group (0.48 ± 0.19) was higher than that in the control group (0.34 ± 0.15, P = 0.0027). The proportion of TIGIT +CD226 + Tregs was significantly lower in patients with RSA (9.30% ± 4.95% vs. 13.43% ± 4.72%, P = 0.0020) than in the controls. Conclusions::Patients with RSA show a reduced proportion of Tregs and an imbalance in the expression of TIGIT and CD226 on Tregs.

目的:探讨肺转移性肿瘤的临床病理特征及鉴别诊断方法。方法:收集中国医学科学院 北京协和医学院 北京协和医院病理科2014年1月至2018年12月诊断明确的肺转移性肿瘤226例的临床病理资料，观察病理形态学特点，并借助免疫组织化学染色进行鉴别诊断。结果:患者中男性84例，女性142例，年龄范围13~77岁，肺多发性结节者122例，单发性结节者104例。常见肺转移性肿瘤按照来源部位依次为结直肠59例，滋养细胞肿瘤44例，肾31例，乳腺20例，宫颈14例，尿路上皮8例。原发肿瘤距离转移时间、是否行手术治疗等因疾病而异。肺转移性肿瘤与原发肿瘤病理形态学有一定的重叠，阅片时应仔细寻找相对特异性的形态学特点及肿瘤周边有无原位癌区域等以资鉴别；肺转移性肿瘤免疫组织化学染色常甲状腺转录因子1（TTF1）阴性，与原发性肿瘤鉴别均需依据相对特异抗体：结直肠癌细胞角蛋白（CK）20、CDX2阳性，CK7阴性；恶性滋养细胞肿瘤人绒毛膜促性腺激素（HCG）阳性；肾透明细胞癌CD10、波形蛋白阳性，CK7阴性；乳腺癌GATA3、雌激素受体阳性；宫颈癌p16阳性；尿路上皮癌CK20、p63、GATA3阳性。结论:肺转移性肿瘤与原发性肿瘤在临床病理特征上有重叠，确诊需要紧密结合临床特征、病理学形态及免疫表型特征综合分析判断。

目的:探讨2型糖尿病（T2DM）患者早期糖尿病肾脏病（DKD）与肾脏异位脂肪沉积的关系。方法:本研究为横断面研究。收集2021年7月至2023年7月于天津医科大学朱宪彝纪念医院住院且资料完整的375例T2DM患者作为研究对象，其中男性226例，女性149例。将所有研究对象分为早期DKD组（129例）和正常白蛋白尿组（246例）。检测糖化血红蛋白（HbA 1c）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、极低密度脂蛋白胆固醇（VLDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、可溶性CD36（sCD36）等生化指标及视黄醇结合蛋白（RBP）、β 2-微球蛋白（β 2-MG）、N-乙酰氨基葡萄苷酶（NAG）等肾小管功能指标，并计算稳态模型评估胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）和动脉硬化指数（AI）。按照随机数字表法每组选取20例患者，应用MR mDixon-Quant技术检测肾脏脂肪含量，计算肾脏脂肪分数（RFF）。采用独立样本 t检验或 χ2检验进行组间比较，采用二元logistic回归分析法分析早期DKD的影响因素。 结果:早期DKD组HbA 1c、HOMA-IR明显高于正常白蛋白尿组［分别为（8.1±2.0）%和（7.7±1.7）%、4.0±1.1和3.1±1.0， t=2.03、7.99，均 P<0.05］。早期DKD组TG、LDL-C、VLDL-C、sCD36、AI均高于正常白蛋白尿组（ t=3.14、2.20、3.07、18.39、2.50，均 P<0.05），HDL-C低于正常白蛋白尿组（ t=2.72， P<0.05）。早期DKD组RFF为（3.8±0.7）%，高于正常白蛋白尿组的（3.1±0.5）%（ t=10.09， P<0.05）。早期DKD组RBP、β 2-MG、NAG均高于正常白蛋白尿组（ t=24.66、25.50、4.09，均 P<0.05），且肾小管功能指标2项异常和3项异常的比例高于正常白蛋白尿组（ χ 2=22.27、8.42，均 P<0.05）。二元logistic回归分析结果显示，早期DKD与HbA 1c、sCD36、LDL-C、RFF有关（OR=1.241、1.006、1.005、5.035，均 P<0.05）。 结论:T2DM患者早期DKD与血脂异常和肾脏异位脂肪沉积可能有关。

目的:构建一种靶向CD52的嵌合抗原受体T细胞（CD52 CAR-T），探索其对CD52 +白血病的治疗效果。 方法:应用分子克隆技术构建以CD52为抗原结合区的CD52 scFv、4-1BB为共刺激分子的二代CAR-T细胞。慢病毒载体包装后感染T细胞，制备CD52 CAR-T细胞，通过流式细胞术检测CD52 CAR-T细胞CD4、CD8细胞亚群及其分化状态。通过体外杀伤实验、脱颗粒实验及细胞因子的释放等功能实验，观察CD52 CAR-T细胞对CD52 +白血病细胞的特异性细胞毒作用。 结果:①成功构建了pCDH-CD52 scFv-CD8α-4-1BB-CD3ζ-GFP表达载体，感染人T细胞，获得靶向CD52的CAR-T细胞。②感染CD52 CAR表达载体的第6天，T细胞中表达CD52的细胞可被清除[CD52 CAR-T组CD52 + T细胞为（4.48±4.99）%，Vector-T组为（56.58±19.8）%， P=0.011]。③CD52 CAR-T的自我杀伤不会影响T细胞的增殖，培养后期CD52 CAR-T组的增殖速度高于Vector-T组。④T细胞表型检测发现CD52 CAR可以促进CAR-T细胞向中心记忆T细胞及效应记忆T细胞分化，减少CAR-T细胞向终末效应细胞分化。⑤CD52 CAR-T细胞与HuT78-19t及MOLT4-19t靶细胞以效靶比1∶1共培养24 h，HuT78-19t细胞可被清除，而对MOLT4-19t细胞无明显杀伤作用[（2.66±1.60）%对（56.66%±5.74）%， P<0.001]。⑥脱颗粒实验显示，HuT78-19t细胞对CD52 CAR-T细胞的激活作用显著高于MOLT4-19t细胞[（57.34±11.25）%对（13.06±4.23）%， P<0.001]。⑦CD52 CAR-T与HuT78-19t细胞共培养48 h上清中细胞因子分泌水平[IFN-γ（3706±226）pg/ml、TNF-α（1732±560）pg/ml]远高于MOLT4-19t细胞组[IFN-γ（1577±846）pg/ml、TNF-α（74±12）pg/ml]（ P值均<0.01）。 结论:该研究成功制备了具有抗白血病作用的CD52 CAR-T细胞，为进一步的靶向CD52的免疫治疗奠定了基础。

目的:研究外周血自然杀伤T细胞样（NKT-like）细胞在SSc患者中的表达，探索NKT-like细胞与SSc实验室指标和临床指标之间的相关性，进而探讨NKT-like细胞在SSc发生发展中的作用。方法:选取2018年12月至2019年12月在北京大学人民医院风湿免疫科门诊和住院就诊的46例SSc患者（SSc组），年龄及性别与之匹配的30名健康体检者，作为健康对照组（HC组）。采用流式细胞术收集SSc组和HC组外周血NKT-like细胞和其他淋巴细胞亚群的细胞数量和百分比。同时采用多种实验方法测定其他实验室指标。相关性分析采用Pearson或Spearman分析，2组间差异采用Mann-Whitney U检验，或采用Fisher确切概率法，对NKT-like细胞和其他临床及实验室指标进行相关统计学分析。 结果:与HC组[165（72，226）个/μl]相比，SSc组外周血中NKT-like细胞数量[30（19，58）个/μl]及比例明显降低，差异具有统计学意义（ Z=-5.69， P<0.001）。相关性分析可见，NKT-like细胞数量与总T细胞（ r=0.56， P<0.001）、CD4 +T细胞（ r=0.42， P=0.004）、CD8 +T细胞（ r=0.60， P<0.001）、B细胞（ r=0.50， P<0.001）及NK细胞（ r=0.33， P=0.024）呈正相关；NKT-like细胞所占淋巴细胞百分比与CD8 +T细胞所占百分比呈正相关（ r=0.34， P=0.020），与其他淋巴细胞百分比无相关性（ P>0.05）。NKT-like细胞降低组ESR较NKT-like细胞正常组显著升高[15（9，28）mm/1 h与8（4，16）mm/1 h， Z=-2.04， P=0.042]。NKT-like细胞数量与ESR呈负相关（ r=-0.34， P=0.019）。 结论:SSc患者外周血NKT-like细胞存在数量和比例明显降低，NKT-like细胞不仅与多种淋巴细胞亚群呈正相关，而且与反映疾病活动度的ESR呈负相关。NKT-like细胞可作为监测SSc疾病活动的一种指标。

T细胞免疫球蛋白和免疫受体抑制性基序(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif，ITIM)结构域(T cell immunoglobulin and ITIM domain, TIGIT)是脊髓灰质炎病毒受体家族中的一种抑制性受体，高表达于自然杀伤细胞、调节性T细胞和滤泡辅助T细胞，通过与CD226分子竞争性结合CD155及CD112发挥其抑制作用。最新研究显示，TIGIT高表达与移植物抗宿主病(graft-versus-host disease, GVHD)的低发生率密切相关，因此进一步研究TIGIT分子发挥抑制作用的具体机制，对GVHD的免疫治疗具有重大意义。文章介绍了TIGIT分子的结构及抑制功能，并对TIGIT分子在GVHD中作用的最新研究进展进行综述，旨在为TIGIT在GVHD中的应用提供一定的理论依据。

目的:了解克罗恩病（CD）肛瘘患者的生活质量现状，分析自我隐瞒与应对方式在CD肛瘘患者病耻感和生活质量间的链式中介效应，以期为CD肛瘘患者实施有效的护理干预提供参考。方法:采用便利抽样法，选取2018年11月—2021年10月北京市肛肠医院收治的226例CD肛瘘患者为研究对象，采用一般资料调查表、自我隐瞒量表（SCS）、医学应对方式问卷（MCMQ）、社会影响量表（SIS）和Spitzer生活质量指数（SQLI）对其进行调查。采用Amos 21.0软件建立结构方程模型并进行中介效应检验。本研究共发放问卷226份，回收有效问卷212份，有效回收率为93.81%。结果:212例CD肛瘘患者SQLI总分为（5.24±0.48）分，SIS总分为（63.91±7.56）分，MCMQ总分为（54.86±6.87）分，SCS总分为（30.59±4.32）分。自我隐瞒与应对方式在CD肛瘘患者病耻感与生活质量间的链式中介效应成立，总中介效应占总效应的49.40%，其中自我隐瞒的特定中介效应占25.30%，应对方式的特定中介效应占16.87%，自我隐瞒与应对方式在病耻感和生活质量间的链式中介效应占7.23%。结论:CD肛瘘患者的生活质量处于中等水平，自我隐瞒与应对方式在CD肛瘘患者病耻感和生活质量间起链式中介作用。护理人员可通干预病耻感来降低患者自我隐瞒倾向进而调节其应对方式，最终提高患者的生活质量。