目的:探讨环状RNA Ras同源家族成员T1(circ-RHOT1)及微小RNA-204-5p (miR-204-5p)在乳腺癌中的表达及其对人类乳腺癌细胞株7(MCF-7)细胞增殖、克隆形成、侵袭、迁移、凋亡及上皮-间充质转化过程的影响。方法:定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测circRHOT1及miR-204-5P在乳腺癌细胞系(人源性)MCF-7以及正常乳腺上皮细胞(人源性)MCF-10A中的表达；双荧光素酶实验及qRT-PCR证明circRHOT1和mirR-20-5p的关系。采用噻唑蓝(MTT)实验，克隆形成实验，流式细胞实验，transwell侵袭实验，划痕实验，检测各组细胞的增殖、克隆形成、侵袭、迁移及凋亡能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞上皮间质标志物表皮钙黏蛋白(E-cadlherin)、波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达。采用 t检验或单因素方差分析进行统计分析。 结果:circRHOT1在乳腺癌细胞系MCF-7中的表达量显著高于乳腺正常上皮细胞MCF-10A(4.77±0.11比1.00±0.09， t＝45.940， P<0.01)。miR-204-p在乳腺癌细胞系MCF-7中的表达量显著低于乳腺正常上皮细胞(0.32±0.03比1.05±0.01， t＝10.330， P<0.01)。si-circROT1组的表达明显低于si-NC组(1.00±0.08比0.15±0.03， t＝17.230， P<0.01)。si-circRHOT1组细胞的体外增殖能力明显低于si-NC组(24 h：0.73±0.05比0.58±0.04， t＝43.517， P<0.05；48 h：1.15±0.10比0.82±0.06， t＝4.901， P<0.01；72 h：1.68±0.18比1.08±0.12， t＝5.003， P<0.01)、si-circRHOT1组细胞的集落形成能力明显低于si-NC组(77.69±13.54比27.82±5.76， t＝5.872， P<0.01)、si-circRHOT1组细胞的侵袭及迁移能力明显低于si-NC组[30.82±8.77比72.68±11.78， t＝4.935， P<0.01；(17.24±4.21)%比(67.77±8.02)%， t＝9.661， P<0.01]，si-circRHOT1组细胞的凋亡能力明显高于si-NC组(22.92±4.46比5.62±1.31， t＝6.448， P<0.01)。si-circRHOT1组细胞E-cadherin的表达高于对照组(6.84±0.56比0.96±0.24， t＝13.320， P<0.01)，si-circRHOT1组细胞N-cadherin，vimentin的表达低于si-NC组(0.34±0.07比1.06±0.35， t＝9.331， P<0.01；0.36±0.05比1.10±0.36， t＝8.645， P<0.01)。circRHOT1可充当miR-204-5P海绵，靶向抑制miR-204-5P表达；干扰miR-204-5P的表达可部分逆转circRHOT1介导的肿瘤抑制作用。 结论:circRHOT1通过充当miR-204-5P海绵，靶向调控miR-204-5p，增强乳腺癌MCF-7细胞增殖、集落形成、侵袭、迁移并减轻细胞凋亡能力。

目的:研究环状RNA ras同源物基因家族成员T1(CircRHOT1)调节miR-187-3p/性别决定区Y框蛋白4(SOX4)轴对乳腺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响.方法:采用实时荧光定量PCR和Western blot检测体外培养的人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞MCF-7、Hs-578T、MDA-MB-231中CircRHOT1、miR-187-3p与SOX4表达;将体外培养的MCF-7细胞随机分为对照组、CircRHOT1敲低(转染CircRHOT1 siRNA质粒)组、miR-187-3p mimics(转染miR-187-3p mimics)组、共转染阴性对照(转染空载质粒和miR-187-3p inhibitor阴性对照)组、CircRHOT1敲低+miR-187-3p inhibitor(转染Cir-cRHOT1 siRNA质粒和miR-187-3p inhibitor)组,分组转染后,采用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测各组细胞CircRHOT1、miR-187-3p与SOX4表达;采用EdU染色和平板集落形成实验检测各组细胞增殖;采用流式细胞术检测各组细胞凋亡;采用免疫荧光染色检测各组细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达比值(Bax/Bcl-2).各组细胞与人外周血淋巴细胞共培养并分组转染后,采用流式细胞术检测各组人外周血淋巴细胞中活化CD8+T细胞比例;采用MTT法检测人外周血淋巴细胞对各组MCF-7细胞的杀伤率.采用双荧光素酶报告实验检测MCF-7细胞CircRHOT1对miR-187-3p、miR-187-3p对SOX4的靶向调控.结果:与人正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比,人乳腺癌MCF-7、Hs-578T、MDA-MB-231细胞CircRHOT1、SOX4蛋白与mRNA表达明显升高(P<0.05),miR-187-3p表达明显降低(P<0.05).与对照组相比,CircRHOT1敲低组、miR-187-3p mimics组细胞SOX4蛋白与mRNA表达、EdU阳性率、集落生成率降低(P<0.05),miR-187-3p表达、凋亡率、Bax/Bcl-2、人外周血淋巴细胞中活化CD8+T细胞比例及其对MCF-7细胞杀伤率升高(P<0.05).与CircRHOT1敲低组相比,CircRHOT1敲低+miR-187-3p inhibitor组细胞CircRHOT1表达差异无统计学意义(P>0.05),SOX4蛋白与mRNA表达、EdU阳性率、集落生成率升高(P<0.05),miR-187-3p表达、凋亡率、Bax/Bcl-2、人外周血淋巴细胞中活化CD8+T细胞比例及其对MCF-7细胞杀伤率降低(P<0.05);共转染阴性对照组细胞各指标差异无统计学意义(P>0.05).结论:敲低CircRHOT1可通过上调miR-187-3p而降低SOX4表达,从而减弱乳腺癌细胞增殖活性,并促进其凋亡,还可抑制CD8+T细胞活化并增强其癌细胞杀伤力,减弱乳腺癌细胞免疫逃逸.

目的 探讨肌层浸润性膀胱癌(MIBC)患者组织和血清中circRHOT1表达及临床意义.方法 选取2011年3月至2017年4月在我院泌尿外科接受根治性膀胱切除术的91例MIBC患者作为研究对象,另选取同期在本院体检健康且无膀胱癌病史的志愿者80例作为健康对照组.采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测组织和血清circRHOT1表达的关系.采用受试者特征工作曲线(ROC)评价血清circRHOT1表达诊断MIBC的效能.Spearman相关性分析分析组织和血清circRHOT1表达.Kaplan-meier法绘制总生存期(OS)、疾病特异性生存期(DSS)、无复发生存期(RFS)曲线.Cox风险比例回归模型分析影响MIBC预后的因素.结果 MIBC患者血清circRHOT1表达水平显著高于健康对照组[1.49(1.07,2.10)vs.1.00(0.82,1.26),P<0.001].血清circRHOT1水平诊断MIBC的ROC曲线下面积为0.774(95％CI:0.705～0.843).MIBC组织circRHOT1表达水平显著高于癌旁组织[1.83(1.45,2.62)vs.1.09(0.85,1.33),P<0.001].Spearman相关性分析结果显示,血清circRHOT1水平与组织circRHOT1表达呈正相关(r=0.388,P<0.001).MIBC患者血清和组织circRHOT1表达仅与Ki-67有关(P<0.05).组织circRHOT1低表达和高表达组患者中位OS分别为2.52年、1.90年(P=0.001),中位DSS为2.52年、1.90年(P=0.004),中位RFS为1.79年、1.16年(P=0.001).血清circRHOT1低水平和高水平组患者中位OS分别为2.09年、1.98年(P=0.006),中位DSS为2.09年、1.98年(P=0.019),中位RFS为1.61年、1.16年(P=0.003).经单因素和多因素Cox风险比例回归分析,血清circRHOT1表达影响MIBC患者术后OS、DSS和RFS的独立预后因素(P<0.05).结论 circRHOT1在MIBC组织和血清中高表达,且其高表达与复发及死亡高风险相关.血清circRHOT1水平可作为MIBC诊断生物标志物.

目的:探讨地锦草乙醇提取物(EEEH)对人结直肠癌SW480细胞生物学行为的影响及其分子机制.方法:体外培养SW480细胞,实验分为Con组、EEEH-L组、EEEH-M组、EEEH-H组、si-NC组、si-circRHOT1组、EEEH-H+pcDNA组、EEEH-H+pcDNA-circRHOT1组,分别以si-NC、si-circRHOT1、pcDNA、pcDNA-circRHOT1转染SW480细胞,采用CCK-8法、细胞克隆形成实验、Transwell实验分别检测转染后各组细胞的增殖、迁移及侵袭能力,qPCR法检测转染后各组SW480细胞circRHOT1和miR-29a-3p的表达,WB法检测各组细胞中MMP-2、MMP-9蛋白的表达.双荧光素酶报告基因实验检测circRHOT1与miR-29a-3p之间的靶向关系.结果:与Con组比较,EEEH-L组、EEEH-M组、EEEH-H组SW480细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达均明显降低(均P<0.05),circRHOT1的表达均降低(均P<0.05)而miR-29a-3p的表达均升高(均P<0.05)且呈剂量依赖性;细胞的存活率、细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数均减少(均P<0.05).circRHOT1可靶向负调控miR-29a-3p的表达.敲减circRHOT1可抑制SW480细胞的增殖、迁移及侵袭能力,而过表达circRHOT1则可减弱EEEH对SW480细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用.结论:EEEH可通过调控circRHOT1/miR-29a-3p轴而抑制结直肠癌SW480细胞的增殖、迁移及侵袭能力.

目的 探讨环状RNA RHOT1(circRHOT1)对微小RNA-29b-3p(miR-29b-3p)/赖氨酸去甲基化酶2A(KDM2A)轴的调控作用及对膀胱癌(BCa)细胞增殖和迁移的影响.方法 取人输尿管上皮永生化细胞(SV-HUC-1)和BCa细胞(5637、TCCSUP、T24和UM-UC-3),实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中circRHOT1、miR-29b-3p和KDM2A mRNA表达.取T24细胞,分为对照组、si-NC组、si-circ-RHOT1组、si-circRHOT1+anti-NC组、si-circRHOT1+anti-miR-29b-3p组.采用RT-qPCR检测各组细胞中circRHOT1、miR-29b-3p和KDM2A mRNA表达水平;CCK-8法检测各组细胞的增殖活性;Tran-swell小室法检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测KDM2A和上皮-间质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达;双荧光素酶报告基因和RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)验证T24细胞中circRHOT1、miR-29b-3p和KDM2A的靶向关系.结果 与SV-HUC-1细胞相比,BCa细胞(T24、5637、TCCSUP和UM-UC-3)中circRHOT1、KDM2A mRNA水平显著升高,miR-29b-3p水平显著降低(P<0.05).敲低circRHOT1后,与对照组、si-NC组相比,si-circRHOT1组KDM2A的mRNA和蛋白水平、细胞活力、迁移和侵袭能力、N-cadherin、Vimentin水平均降低,miR-29b-3p、E-cadherin水平升高(P<0.05);抑制miR-29b-3p表达可升高KDM2A表达,并减弱敲低circRHOT1对增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05).双荧光素酶报告基因和RIP实验证实circRHOT1可靶向负调控miR-29b-3p表达,KDM2A是miR-29b-3p的靶标.结论 敲低circRHOT1可能通过靶向上调miR-29b-3p来抑制KDM2A表达,进而抑制BCa细胞增殖、迁移和侵袭.

目的:分析circRHOT1、miR-144-3p在喉癌组织中的表达水平,探讨circRHOT1靶向miR-144-3p对喉癌细胞生物学行为的影响.方法:RT-qPCR检测circRHOT1、miR-144-3p在32例喉癌组织标本和15例声带息肉组织标本中表达情况.Pearson相关分析确定喉癌组织中circRHOT1、miR-144-3p表达关系.将si-NC、si-circRHOT1、miR-NC、miR-144-3p mimics、si-circRHOT1+anti-miR-NC、si-circRHOT1+anti-miR-144-3p分别转染TU686细胞,采用CCK-8法、划痕愈合实验、流式细胞术分析TU686细胞的体外增殖、迁移能力和凋亡情况.双荧光素酶报告实验用于分析circRHOT1、miR-144-3p的靶向关系.结果:喉癌组织中circRHOT1表达水平较声带息肉组织显著升高,miR-144-3p表达水平较声带息肉组织显著降低.喉癌组织中circRHOT1、miR-144-3p表达呈负相关关系.下调circRHOT1表达后TU686细胞抑制率、凋亡率、miR-144-3p表达水平显著升高,划痕愈合率显著降低.过表达miR-144-3p后TU686细胞抑制率、凋亡率显著升高,划痕愈合率显著降低.miR-144-3p是circRHOT1的直接靶点.抑制miR-144-3p表达可减弱下调circRHOT1对TU686细胞增殖、凋亡和迁移的影响.结论:下调circRHOT1通过靶向上调miR-144-3p表达可诱导喉癌细胞凋亡,抑制其增殖和迁移.