目的:评价LPS攻击大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)时血红素氧合酶-1/一氧化碳(HO-1/CO)信号通路与线粒体分裂的关系。方法:大鼠AECⅡ进行传代培养，待其分裂至合适浓度(约2×10 5个/ml)时接种于96孔板。采用随机数字表法将细胞分为7组( n＝12)：空白对照组(C组)继续培养，不做任何处理；LPS组(L组)采用10 μg/ml LPS孵育；一氧化碳释放分子-2(CORM-2)＋LPS组(CL组)、HO-1诱导剂Hemin＋LPS组(HL组)、HO-1抑制剂ZnPP-Ⅸ＋LPS组(ZL组)分别采用100 μmol/L CORM-2孵育1 h、20 μmol/L Hemin孵育1 h以及10 μmol/L ZnPP-Ⅸ孵育0.5 h，而后用10 μg/ml LPS孵育；CORM-2＋ZnPP-Ⅸ＋LPS组(CZL组)：采用100 μmol/L CORM-2孵育1 h，而后用10 μmol/L ZnPP-Ⅸ孵育0.5 h，最后用10 μg/ml LPS孵育；Hemin＋ ZnPP-Ⅸ＋LPS组(HZL组)采用20 μmol/L Hemin孵育1 h，而后用10 μmol/L ZnPP-Ⅸ孵育0.5 h，最后用10 μg/ml LPS孵育。各组于培养或LPS孵育48 h时采用MTT检测细胞活力，采用Western bolt法检测HO-1、线粒体动力相关蛋白1(Drp1)和线粒体分裂蛋白1(Fis1)的表达。 结果:与C组比较，其余6组细胞活力降低，HO-1、Drp1及Fis1表达上调( P<0.05)。与L组比较，CL组和HL组细胞活力升高，HO-1表达上调，Drp1及Fis1表达下调，ZL组细胞活力降低，HO-1表达下调，Drp1及Fis1表达上调( P<0.05)，CZL组和HZL组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)。与CL组和HL组比较，ZL组细胞活力降低，HO-1表达下调，Drp1及Fis1表达上调( P<0.05)。 结论:HO-1/CO信号通路可抑制线粒体分裂，在LPS诱导大鼠AECⅡ损伤时发挥内源性保护作用。

目的:选育综合性状优良的西红花新品种.方法:以建德西红花农家种辐射变异种质中优选出的 2012B为试验材料,经品系比较、区域试验,对其主要农艺性状、生育期、抗逆性、产量和品质等方面进行综合评价,最终选育出综合性状优良的西红花新品种'番红 2 号'.结果:'番红 2 号'在 2018～2020 年浙江省西红花品种区域试验中,平均球茎、鲜花丝产量分别为 7 367.93 kg/hm2 和 28.3 kg/hm2,分别比对照增产 14.3%和 32.1%,均达显著水平;其药材主要有效成分西红花苷Ⅰ、Ⅱ总量为 16.12%,苦番红花素含量为 9.92%;吸光度 0.586,吸光度比值0.898,均符合 2020 年版中国药典(一部)标准要求.结论:西红花新品种'番红 2 号'具有丰产性好、花丝产量高、品质优、抗病性强等特点,于 2022 年 4 月通过浙江省农作物品种认定委员会认定.

目的 探讨血红素氧合酶-1/一氧化碳(HO-1/CO)通路对脂多糖(LPS)诱导大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)线粒体融合的影响.方法 体外培养大鼠AECⅡ细胞株RLE-6TN,待细胞融合度达到85%时传代培养,并随机分为7组(n=5):空白对照组细胞常规培养;LPS组加入10 mg/L的LPS制备内毒素攻击AECⅡ模型;外源性一氧化碳释放分子-2(CORM-2,体外CO释放剂)+LPS组(CL组)和氯高铁血红素(Hemin,HO-1诱导剂)+LPS组(HL组)分别加入100 μmol/L的CORM-2或20 μmol/L的Hemin预处理1 h,再加入10 mg/L LPS孵育;锌原卟啉-Ⅸ(ZnPP-Ⅸ,HO-1活性抑制剂)+ LPS组(ZL组)加入10 μmol/L的ZnPP-Ⅸ预处理0.5 h,然后加入10 mg/L的LPS孵育;CORM-2+ZnPP-Ⅸ+LPS组(CZL组)和Hemin+ZnPP-Ⅸ+LPS组(HZL组)先分别加入100 μmol/L的CORM-2或20 μmol/L的Hemin预处理1 h,其余处理同ZL组.LPS孵育24 h后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)测定HO-1、线粒体融合蛋白1和蛋白2(Mfn1、Mfn2)以及视神经萎缩蛋白1(OPA1)的蛋白表达.结果 与空白对照组比较,各处理组细胞上清液中IL-6和TNF-α含量升高,HO-1蛋白表达上调,线粒体融合相关蛋白Mfn1、Mfn2 和OPA1蛋白表达下调.与LPS组比较,给予CORM-2或Hemin预处理后,IL-6、TNF-α含量均明显降低〔IL-6(ng/L): 48.6±3.7、48.4±3.1比58.7±2.5, TNF-α(ng/L): 40.7±5.3、39.4±4.3比51.8±5.1〕,HO-1、Mfn1、Mfn2、OPA1蛋白表达均明显上调(HO-1蛋白:0.873±0.051、0.839±0.061比0.671±0.044,Mfn1蛋白:0.673±0.037、0.654±0.025比0.568±0.021,Mfn2蛋白:0.676±0.044、0.683±0.035比0.571±0.043,OPA1蛋白:0.648±0.031、0.632±0.031比0.554±0.032,均P<0.05);而给予ZnPP-Ⅸ预处理后,IL-6、TNF-α含量及HO-1、Mfn1、Mfn2、OPA1蛋白表达的变化趋势与CORM-2或Hemin预处理组相反,与LPS组比较差异均有统计学意义〔IL-6(ng/L):69.8±5.1比58.7±2.5, TNF-α(ng/L): 61.9±3.3比51.8±5.1,HO-1蛋白:0.545±0.023比0.671±0.044,Mfn1蛋白:0.406±0.051比0.568±0.021,Mfn2蛋白: 0.393±0.051比0.571±0.043,OPA1蛋白:0.372±0.050比0.554±0.032,均P<0.05〕.CL组与HL组间,LPS组、CZL组与HZL组间上述各指标比较差异均无统计学意义.结论 HO-1/CO通路可上调LPS诱导的大鼠AECⅡ细胞线粒体融合蛋白表达,促进线粒体融合,从而减轻细胞炎症反应.

目的 探讨外源性一氧化碳释放分子(Corm)Ⅱ对脓毒症时血小板α颗粒(PLT-α)释放的影响及作用机制.方法采集健康供血者空腹外周静脉血并分离血小板,通过脂多糖体外诱导建立脓毒症血小板异常活化模型.分为空白对照组、脂多糖组、无活性CormⅡ组、10 μmol/L和30 μmol/L CormⅡ组,另再设PKCδ抑制剂(LY317615)组(10 μmol/L脂多糖+100 nmol/L LY317615)、CormⅡ+LY317615组(10 μmol/L脂多糖+30 μmol/L CormⅡ+ 100 nmol/L LY317615).采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血小板衍生因子(PDGF)-bb、基质金属蛋白酶(MMP)-2含量,流式细胞术检测血小板P选择素表达;免疫荧光法检测PLT-α分布;Western印迹法检测血小板关键信号分子PKCδ、MUNC18a的表达.结果 脂多糖诱导后PLT-α释放的PDGF-bb、MMP-2及血小板P选择素表达水平均明显高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);无活性CormⅡ组PLT-α内容物释放及血小板P选择素表达水平与脂多糖组之间差异无统计学意义(P>0.05);CormⅡ诱导后,PLT-α释放的PDGF-bb、MMP-2明显减少,血小板P选择素表达水平明显降低且呈剂量依赖性.脂多糖诱导后中央区的PLT-α逐渐向血小板磷脂膜区转移,与磷脂膜融合后释放到血小板外;无活性CormⅡ组与脂多糖组PLT-α分布情况相似;CormⅡ诱导后血小板α颗向血小板膜汇聚明显减少.脂多糖诱导后血小板p-PKCδ、p-MUNC18a的相对表达量明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);LY317615组、CormⅡ组、CormⅡ+LY317615组板p-PKCδ、p-MUNC18a的相对表达量与脂多糖组和无活性CormⅡ组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 CormⅡ可通过释放的CO活化PKCδ/MUNC18a信号通路,抑制脓毒症时PLT-α的异常释放,减弱脓毒症损伤.

目的 评价内毒素攻击大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞时磷酯酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路在线粒体分裂中的作用.方法 将肺泡Ⅱ型上皮细胞以密度2×105/ml接种于6孔板,采用随机数字表法将其分为6组(n=10):空白对照组(C组)、LPS组(L组)、LPS+CORM-2组(L+CO组)、LPS+ LY294002组(L+LY组)、LPS+无活性的CORM-2(iCORM-2)组(L+iCO组)、LPS+二甲基亚砜组(L+D组).L组、L+CO组、L+LY组、L+iCO组和L+D组采用10 μg/ml LPS孵育24h;于LPS孵育前lh时,L+CO组、L+LY组、LPS+iCO组分别加入CORM-2 100 μmol、LY294002 25μg、iCORM-2 100 μmol;L+D组于LPS孵育前1h加入0.1％二甲基亚砜100 μmol.细胞孵育结束后,采用ELISA法测定培养液TNF-α和IL-6浓度.采用Western bolt法测定细胞磷酸化Akt(p-Akt).血红素加氧酶-1(HO-1)、线粒体动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体分裂相关蛋白1(Fis1)的表达.结果 与C组比较,L组、L+CO组、L+LY组、L+iCO组和L+D组培养液TNF-α和IL-6浓度升高,p-Akt、HO-1、Drp1和Fis1表达上调(P＜0.05).与L组比较,L+CO组TNF-α和IL-6浓度降低,p-Akt和HO-1表达上调,Drp1和Fis1表达下调,L+LY组TNF-α和IL-6浓度升高,p-Akt和HO-1表达下调,Drp1和Fis1表达上调(P＜0.05).结论 内毒素攻击大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞时PI3K/Akt信号通路激活可抑制线粒体分裂.

目的 探讨外源性一氧化碳(CO)通过抑制星形胶质细胞过度自噬改善老龄大鼠围术期应激后焦虑样行为的作用.方法 清洁级健康雄性SD大鼠36只,分为3组(n=12):假手术组(S组)、腹腔探查组(P组)、腹腔探查+一氧化碳释放分子-3(carbon monoxide-releasing molecule 3,CORM-3)组(PC组).PC组大鼠在手术结束后即刻、24、48h经尾缘静脉注射外源性CORM-3(4mg/kg).术后第7天采用行为学评估大鼠焦虑样行为;采用免疫荧光法评估杏仁核区神经元数量及星形胶质细胞、小胶质细胞和神经元内自噬相关蛋白B细胞淋巴瘤-2相互作用蛋白1(Bcl-2 interacting protein 1,Beclin1)和泛素(ubiquitin,Ub)的表达情况,采用Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的表达;采用透射电镜法检测杏仁核区自噬小体的数量.结果 旷场试验结果显示,与S组比较,P组和PC组大鼠中央区停留时间百分比明显下降,焦虑样行为增加(P＜0.05);高架十字迷宫试验表明,与S组比较,P组和PC组大鼠开放臂停留时间百分比及开放臂进入次数百分比显著下降,焦虑样行为增加(P＜0.05);组织病理学结果显示,与S组比较,P组和PC组大鼠杏仁核区NeuN阳性细胞数降低(P＜0.05),星形胶质细胞内Beclin1、Ub表达上调(P＜0.05);Western blot检测结果显示,与S组比较,P组和PC组大鼠LC3 Ⅱ/Ⅰ的比值上调(P＜0.05);透射电镜下观察,S组大鼠星形胶质细胞内未见自噬小体,P组和PC组大鼠星形胶质细胞内可见自噬小体;与P组比较,PC组大鼠上述各项指标均明显改善(P＜0.05).结论 外源性CO能够改善老龄大鼠围术期应激后的焦虑样行为,其机制可能与抑制杏仁核区星形胶质细胞过度自噬相关.