目的:探讨泛素化连接酶E3蛋白（Cullin3，CUL3）对三阴性乳腺癌（TNBC）细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法:基于生物信息学方法获取TNBC组织中CUL3基因和蛋白的表达数据，评估CUL3在TNBC患者肿瘤组织（ n=160）中和正常乳腺组织（NC）（ n=572）中的表达及其与临床预后的关系。通过CCK8细胞增殖实验、划痕实验、Transwell实验检测过表达CUL3对TNBC细胞体外增殖、迁移及侵袭能力的影响；通过免疫共沉淀（IP）联合质谱分析筛选出可能与CUL3相互作用的蛋白质，确定CUL3调控的底物蛋白为谷胱甘肽S-转移酶P1（GSTP1）；通过划痕实验、Transwell实验检测过表达GSTP1对TNBC细胞迁移及侵袭能力的影响，探索过表达CUL3是否可以逆转GSTP1对细胞迁移及侵袭能力的影响；通过Western 印迹和IP检测CUL3对GSTP1蛋白泛素化修饰的影响，验证CUL3调控GSTP1表达影响TNBC迁移和侵袭的分子机制。 结果:CUL3在TNBC中表达量显著增高（ P<0.000 1），CUL3高表达与TNBC患者预后不良相关，高表达CUL3的TNBC患者总生存期（OS）、无病生存期（RFS）均更短（OS， P=0.018；RFS， P=0.008）；过表达CUL3可显著增加TNBC细胞增殖（231细胞组 F=11.97， P=0.002；468细胞组 F=51.92， P<0.001）、迁移［231细胞系和468细胞系过表达组穿膜细胞数分别为（74.7±4.0）、（128.0±6.1）个，而空白对照（NC）组分别为（21.0±2.7）、（70.0±6.6）个，231和468细胞组 t分别为-19.24和-11.23， P均<0.001］和侵袭能力（231细胞系和468细胞系过表达组48 h细胞增殖率分别为56.6%±4.4%、51.6%±3.7%，而NC组分别为40.5%±2.9%、32.9%±4.8%，231细胞组 t=-5.26， P=0.006 3；468细胞组 t=-5.38， P=0.005 8）；GSTP1在TNBC表达中降低，上调GSTP1可抑制TNBC细胞迁移［231细胞系和468细胞系过表达组穿膜细胞数分别为（16.3±6.5）、（33.0±6.2）个，而NC组分别为（34.3±2.5）、（77.3±5.0）个，231细胞组 t=5.44， P=0.006；468细胞组 t=7.20， P=0.002］和侵袭（231细胞系和468细胞系过表达组48 h细胞增殖率分别为49.6%±1.7%、36.2%±1.4%，而NC组分别为59.4%±4.7%、53.0%±1.7%，231细胞组 t=3.42， P=0.027；468细胞组 t=13.18， P<0.001），而上调CUL3可逆转GSTP1对细胞迁移［231细胞系和468细胞系过表达组穿膜细胞数分别为（37.0±1.0）、（67.0±5.3）个，231细胞组 t=-3.97， P=0.017；468细胞组 t=-6.12， P=0.004］、侵袭（231细胞系和468细胞系过表达组48 h细胞增殖率分别为71.9%±3.6%、59.4%±2.1%，231和468细胞组 t值分别为-9.61和-16.01， P均<0.001）的抑制作用；CUL3通过增加GSTP1泛素化修饰，促进泛素-蛋白酶体系统降解GSTP1蛋白，从而降低GSTP1蛋白的稳定性。 结论:过表达CUL3通过促进GSTP1泛素化降解诱导细胞迁移和侵袭，从而促进TNBC发生发展。

目的 探究泛素连接酶Cullin1和基质金属蛋白酶MT4-MMP在不同类型乳腺癌组织中表达情况及临床意义. 方法 2015年1月至8月,选择徐州市肿瘤医院80例乳腺癌组织及其对应的癌旁正常乳腺组织,应用免疫组织化学法和Western blotting法分别检测其中Cullin1和MT4-MMP的表达情况,并分析其相关性.结果 Cullin1、MT4-MMP蛋白在乳腺癌组织中的表达均高于癌旁正常乳腺组织,差异均有统计学意义(77.5% vs 28.8%,67.5% vs 17.5%,χ2=38.174、40.921,均P<0.01);在乳腺癌组织中,Cullin1及MT4-MMP蛋白的表达呈正相关(P<0.05).Cullin1及MT4-MMP在乳腺癌中的蛋白表达在分子分型、腋窝淋巴结是否转移及TNM分期组间差异有统计学意义(P<0.05);在患者年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、是否复发转移组间差异无统计学意义. 结论 Cullin1及MT4-MMP可能参与了乳腺癌的形成及发展过程,且两者在此过程中有一定协同作用.在分型差、分期晚的乳腺癌中, Cullin1及MT4-MMP更高的表达状态提示其可能成为新的乳腺癌恶性程度指标.

Cullin-RING E3泛素连接酶(CRL)是泛素蛋白酶体系统的重要组分,参与催化蛋白质的泛素化,促进随后的蛋白质降解,从而影响细胞周期、细胞凋亡、DNA复制、信号转导等多种细胞生理活动,且在多种肿瘤细胞中异常活化.以MLN4924为代表的拟素化抑制剂的成功研发有力地证实了CRL是可行的抗肿瘤靶点,具有很好的药物研发潜力.近年来,不断有新的研究通过高通量筛选、基于计算机辅助的虚拟筛选或基于结构的药物设计技术寻找特异的CRL抑制剂,但由于CRL复合物具有多种亚单位,呈蛋白蛋白相互作用和多变的蛋白构象,缺乏典型的小分子药物结合位点等特性,其相关药物研发仍面临巨大挑战.截至目前,CRL小分子抑制剂主要以研究最为透彻的SCF泛素连接酶复合体的底物识别亚基F-box蛋白家族为靶点.此外,也发现数个通过靶向UBE2 M-DCN1相互作用,特异性阻断CRL3/CRL1拟素化,从而抑制CRL3/CRL1泛素连接酶活性的小分子化合物.另一方面,也有CRL激动剂的报道,主要见于植物生长素吲哚乙酸和免疫调节性酰亚胺类药物.此外,靶蛋白水解嵌合体(PROTAC)是一项靶向蛋白蛋白相互作用的新技术,其通过特异性小分子抑制剂链接一个CRL E3泛素连接酶来精确降解特定促癌靶蛋白,已成为近年来利用E3泛素连接酶设计抗肿瘤靶向药物的热点.

类泛素化修饰neddylation是一种与泛素化类似的蛋白质翻译后修饰,这一过程通过一系列级联反应将标签分子NEDD8结合到靶蛋白上,从而影响被修饰蛋白质的结构功能.包括Cullin家族在内大多数的neddylation修饰底物同时也是泛素连接酶E3的底物或其组成部分,因而,neddylation修饰过程与泛素化一样广泛参与到细胞的生长代谢等生命活动中并对基因的表达调控起着重要的作用.该文着重对neddylation修饰过程与肿瘤相关信号通路和肿瘤微环境之间的联系以及靶向neddylation途径进行癌症治疗的相关研究进行综述.

目的 探讨微小RNA-194-5p(miR-194-5p)与泛素连接酶cullin4A(CUL4A)在肺结核病人中的表达及其意义.方法 选取2016年12月至2018年12月中国平煤神马集团职业病防治院结核病病人为研究对象,确诊为肺结核病人50例作为肺结核组,潜伏结核感染病人50例作为潜伏结核感染组,同期该院体检健康者50例作为对照组.实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-194-5p、CUL4A mRNA、鸟苷酸结合蛋白5(GBP5)mRNA的表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测可溶性Tim-3(sTim-3)、可溶性Gal-9(sGal-9)水平;采用Pearson相关性分析检验肺结核病人miR-194-5p、CUL4A表达量与GBP5、sTim-3、sGal-9的相关性.结核分枝杆菌(Mtb)感染人巨噬细胞系U937,ELISA检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平.蛋白质印迹法(Western blotting)检测Wnt/β-连环素(Wnt/β-catenin)信号通路相关蛋白T细胞因子(TCF)、糖原合成酶激酶-3(GSK-3β)、β-catenin表达量.结果 与对照组相比,潜伏结核感染组与肺结核组病人血清miR-194-5p、GBP5 mRNA的表达水平升高(P<0.05),其中miR-194-5p:(1.01±0.23)比(2.32±0.53)比(3.35±0.20),sTim-3、sGal-9水平升高(P<0.05),CUL4A mRNA的表达水平显著降低[(1.03±0.11)比(0.73±0.12)比(0.41±0.15),P<0.05],潜伏结核感染组与肺结核组各指标间相比差异有统计学意义(P<0.05);miR-194-5p与CUL4A呈负相关(r=-0.421,P<0.001),miR-194-5p与GBP5、sTim-3、sGal-9呈正相关(P<0.05);Mtb感染细胞后,IL-6、TNF-α的表达水平升高(P<0.05),TCF、GSK-3β、β-catenin表达量升高(P<0.05).结论 miR-194-5p在肺结核病人中表达上调,CUL4A表达下调,二者可能参与肺结核发生及发展过程.

泛素化是蛋白质翻译后调控的重要途径.作为体内最大的E3泛素连接酶家族,Cullin-Ring类E3泛素连接酶广泛参与调控机体内细胞周期蛋白和转录因子的降解.其中,CUL2作为骨架分子形成CUL2泛素连接酶复合物,在希佩尔-林道(von Hippel-Lindau,VHL)肿瘤抑制因子相关受体底物的泛素化降解中发挥重要的作用.目前,研究发现CUL2普遍参与肿瘤血管生成、细胞动力、免疫逃逸、细胞增殖及等肿瘤恶变机制的调控.综述CUL2在肿瘤发生中的作用机制及其与宫颈癌的关系,旨在为宫颈癌的诊断和治疗提供新的作用靶点.

蛋白质拟素化是一种类似于泛素化的翻译后修饰,由NEDD8活化酶E1(NAE)、NEDD8耦联酶E2(UBE2M或UBE2F)和NEDD8连接酶E3三种酶催化组成的级联反应.Cullin家族蛋白是拟素化修饰的生理性底物,Cullin的拟素化修饰激活Cullin-RING连接酶(CRLs),CRLs是最大一类E3泛素连接酶家族,介导了其中约20％蛋白质的泛素化降解来调节许多生物过程,包括细胞周期调控、DNA损伤修复、细胞生长、代谢、存活、自噬、迁移和免疫逃逸等.去拟素化过程则是通过特异性的去拟素化酶将拟素分子NEDD8从底物蛋白上水解并移除,释放至细胞中以维持拟素化的动态平衡.NEDD8和拟素化修饰的催化酶在多种癌症中高表达或活性上调,导致CRLs的过度激活,催化许多抑癌蛋白质的降解,从而促进肺癌细胞的增殖与存活以及肺肿瘤的发生发展.蛋白质拟素化修饰已被证实是有希望的癌症靶点.同样地,多种去拟素化酶在肺癌中高表达,其改变也与多种恶性肿瘤的发生发展密切相关,亦是潜在的肿瘤治疗重要靶点.本综述主要聚焦于拟素化及去拟素化通路在肺癌细胞中表达水平的改变,如何调节肺癌细胞的生长、存活和肺癌微环境和炎症免疫反应以及在肺癌发生发展中的作用.了解驱动癌症发生、发展和转移的关键分子机制,提出通过靶向拟素化和去拟素化修饰各重要组件来作为肺癌治疗手段,为临床肺癌的治疗提供新的思路.