目的:探讨环状RNA circ_100367在甲状腺癌（thyroid carcinoma，THCA）中的诊断价值及其与免疫相关因子的关系。方法:根据美国国家生物技术信息中心（National Center for Biotechnology Information，NCBI）网站提供的数据芯片分析THCA中差异表达的circRNAs，将circ_100367纳入本次研究。收集175例甲状腺癌患者血清与健康人血清，使用qRT-PCR检测血清样本中circ_100367及其线性转录本DCAF8 mRNA的表达水平，计算circ_100367与DCAF8的相关性。分析circ_100367的表达与患者临床病理特征、免疫浸润水平及免疫抑制因子PD-1的相关性。结果:与健康人血清相比（1.00±0.37），甲状腺癌患者血清中circ_100367的表达水平（1.37±0.41）显著升高（ t=8.80， P<0.001），DCAF8 mRNA表达差异无统计学意义（ t=1.67， P=0.095），但circ_100367与DCAF8 mRNA表达呈现正相关的关系（ r=0.17， P=0.028）。分析circ_100367表达与临床病理特征发现，较M0组患者（1.26±0.40），circ_100367在M1和Mx中（1.43±0.40）过表达（ t=2.63， P=0.009）；较N0期患者（1.24±0.36），circ_100367在N1和Nx期患者血清（1.45±0.42）中过表达（ t=3.48， P=0.001）；较淋巴结检测阴性患者的血清（1.28±0.36），circ_100367在阳性患者血清中过表达（1.42±0.43）（ t=2.14， P=0.034）；较T1+T2分期患者（1.30±0.37），T3+T4患者血清中circ_100367过表达（1.40±0.43）（ t=2.22， P=0.028）。分析circ_100367表达与免疫浸润水平发现，高表达的circ_100367与CD8+ T细胞（ r=0.25， P=0.024）、巨噬细胞（ r=0.22， P=0.038）、CD4+T细胞（ r=0.25， P=0.020）和B细胞（ r=0.23， P=0.033）水平具有显著正相关性。circ_100367表达与免疫抑制因子PD-1也呈正相关（ r=0.19， P=0.011）。 结论:circ_100367可作为甲状腺癌诊断的标志物且其表达与免疫相关因子具有较强关联。

目的:探讨微小RNA-519d-3p(miR-519d-3p)在结直肠癌(CRC)中的表达及对增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:体外培养人结直肠癌细胞系和人正常结肠上皮细胞。将miR-519d-3p模拟物(mimic)分别转染于RKO及SW620，同时设置mimic阴性对照(mimic NC)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-519d-3p表达及DCAF4L2 mRNA表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆实验检测细胞增殖活性。划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测DCAF4L2蛋白表达水平。符合正态分布的计量资料以均数±标准差( ± s)表示，采用两样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:miR-519d-3p在人结直肠癌细胞系中显著下降，其中RKO和SW620表达倍数明显低于NCM460[RKO：(0.311±0.165)倍比1.000倍， t＝7.783， P<0.05；SW620：(0.354±0.079)倍比1.000倍， t＝15.72， P<0.01]，差异有统计学意义。成功转染mimic过表达miR-519d-3p，过表达组表达倍数高于对照组 [RKO：(2.913±0.602)倍比1.000倍， t＝5.409， P<0.01；SW620：(3.194±0.427)倍比1.000倍， t＝8.765， P<0.001]，差异有统计学意义。通过生物学功能实验证实miR-519d-3p表达升高能显著抑制CRC细胞的增殖、迁移和侵袭能力。CCK-8检测结果示，过表达组24、48、72、96 h细胞吸光度值低于对照组(RKO：0.248±0.018比0.184±0.012、0.388±0.007比0.277±0.010、0.658±0.033比0.496±0.008、0.877±0.020比0.681±0.021， t＝3.064， P<0.01；SW620：0.213±0.018比0.181±0.050、0.375±0.008比0.274±0.014、0.720±0.009比0.482±0.006、0.978±0.115比0.721±0.032， t＝2.432， P<0.01)，差异有统计学意义。过表达组平板克隆集落形成个数显著低于对照组[RKO：(262.300±11.320)个比(181.700±2.333)个， t＝7.127， P<0.05；SW620：(448.000±33.260)个比(190.300±7.446)个， t＝9.387， P<0.05]，差异有统计学意义。过表达组划痕愈合率低于对照组[RKO：(39.040±0.812)%比(8.979±0.846)%， t＝394.900， P<0.01；SW620：(28.840±0.848)%比(5.576±1.435)%， t＝21.350， P<0.01]，差异有统计学意义。Transwell迁移和侵袭实验中过表达组穿透微孔膜的细胞个数明显低于对照组，迁移实验[RKO：(196.700±6.360)个比(93.330±4.096)个， t＝44.290， P<0.01；SW620：(198.300±4.485)个比(101.300±1.764)个， t＝16.090， P<0.01]，差异有统计学意义；侵袭实验[RKO：(274.700±3.844)个比(85.670±2.728)个， t＝33.950， P<0.01；SW620：(263.300±6.566)个比(70.330±4.256)个， t＝50.980， P<0.01]，差异有统计学意义。在线预测软件(miRWalk、StarBase 2.0和TCGA)预测，并通过qRT-PCR及Western blot验证结果显示，DCAF4L2作为miR-519d-3p靶基因调控CRC，过表达组DCAF4L2的mRNA表达及蛋白表达倍数明显低于对照组，mRNA表达倍数[RKO：(0.170±0.050)倍比1.000倍， t＝18.400， P<0.01; SW620：(0.256±0.069)倍比1.000倍， t＝26.800， P<0.01]，差异有统计学意义；蛋白倍数[RKO：(45.504±6.076)%比100.000%， t＝15.540， P<0.01；SW620：(43.567±3.760)%比100.000%， t＝26.000， P<0.01]，差异有统计学意义。 结论:结直肠癌细胞中miR-519d-3p表达显著下降，并通过调控DCAF4L2表达抑制结直肠癌增殖、迁移及侵袭能力。

目的:探讨circ_DCAF6对结直肠癌顺铂(DDP)耐药细胞增殖、迁移和凋亡的影响及可能机制.方法:体外培养SW480及DDP耐药细胞SW480/DDP,RT-qPCR法检测细胞中circ_DCAF6和miR-485-3p表达,蛋白质印迹法检测FOXK1蛋白表达.分别转染si-NC、si-circ_DCAF6、miR-NC、miR-485-3p 及 si-circ_DCAF6 与 anti-miR-485-3p 至 SW480/DDP 细胞,CCK-8 法检测不同浓度(0、0.156、0.625、2.5、10、40、160 μg/mL)DDP作用转染后的细胞24 h的存活率,并计算半数抑制浓度(IC50值);检测细胞迁移、凋亡并验证circ_DCAF6、miR-485-3p和FOXK1调控关系.结果:与SW480细胞相比,SW480/DDP细胞中circ_DCAF6和FOXK1蛋白表达升高,miR-485-3p表达降低(P＜0.05).沉默circ_DCAF6或过表达miR-485-3p可抑制SW480/DDP细胞增殖、迁移和FOXK1蛋白表达,升高SW480/DDP细胞对DDP的敏感性,并促进细胞凋亡(P＜0.05);敲低miR-485-3p可减弱沉默circ_DCAF6对SW480/DDP细胞恶性表型的影响.circ_DCAF6可靶向结合miR-485-3p;FOXK1是miR-485-3p的靶基因.结论:沉默circ_DCAF6可抑制SW480/DDP细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,其作用机制与靶向调控miR-485-3p/FOXK1轴有关.

目的 采用蛋白质组学分析联合生物信息学技术,初步预测慢性阻塞性肺疾病(COPD)相关肺癌(COPD-LC)的生物学机制及其潜在的核心治疗靶点,并进行验证.方法 收集2018年12月至2021年8月新疆医科大学第四临床医学院门诊就诊的COPD、肺癌患者以及体检的健康人员的尿液标本,并进行高通量测序.筛选差异蛋白并构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络图,进行功能富集分析,进一步预测COPD-LC的关键靶点,最后采用基因表达数据库(GEO)对上述分子进行验证.结果 蛋白质组学结果显示,与正常对照组相比,COPD组存在157个差异蛋白,其中上调67个,下调90个;与正常对照组相比,肺癌组存在306个差异蛋白,其中上调132个,下调174个;此外,本研究基于相互作用基因检索工具(STRING)平台,将上述差异蛋白进行PPI分析.基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析结果显示,COPD-LC主要富集在细胞外区域、溶酶体、细胞外空间、淀粉酶活性、蛋白酶抑制剂活性、防御/免疫蛋白活性等方面.在GEO数据库中搜索关于COPD和肺癌患者微阵列数据,最终纳入GSE8581和GSE43346共2个数据集,在GSE8581数据集中共识别出13 605个差异基因,在GSE43346数据集中识别出 3 403个差异基因,进一步分析GSE8581、GSE43346数据集与COPD-LC中差异基因的重叠程度,发现潜在转化生长因子β结合蛋白(LTBP)4、N-乙酰α-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGLU)、泛素蛋白连接酶E3成分N-识别蛋白4(UBR4)、DNA损伤结合蛋白1-CULA相关因子(DCAF)5等4个重叠蛋白,最后在GEO数据集中获得验证.结论 本研究初步揭示了 LTBP4、NAGLU、UBR4、DCAF5等4个COPD-LC的潜在治疗靶点,其中靶点NAGLU、UBR4、DCAF5在COPD和肺癌中鲜有报道.上述蛋白在COPD和肺癌中均显著低表达,或可成为COPD-LC的重要诊断与治疗的生物标志物.

目的 研究天津某电子垃圾拆解区男性从业人员外周血多氯联苯(PCB)暴露和DNA甲基化的情况.方法 2016年,选取天津某电子垃圾拆解区和距离电子垃圾拆解区50 km的地区(其附近没有电子垃圾废物或其他化学、工业和农业污染)为研究区和对照区,采用方便抽样的方法,分别选取研究区的男性居民和对照区的种植蔬菜、水果和农作物的男性农民为暴露组和参照组.共纳入60名研究对象(暴露组和参照组对象各30名).采集研究对象的外周血5 ml,检测PCB质量浓度;采用随机数字表法随机选取暴露组和参照组对象中各8名研究对象,检测所有基因位点启动子区的甲基化水平,分析甲基化位点的差异性和差异甲基化基因的mRNA转录水平.结果 暴露组对象外周血的PCB浓度均高于参照组,差异具有统计学意义(P值均＜0.001).暴露组与参照组对象基因启动子区的甲基化水平呈现出明显的分群,994个基因位点具有不同程度的甲基化;与参照组相比,暴露组对象有391个低甲基化位点和553个高甲基化位点,甲基化位点位于高CpG富集区域的比例分别为59.2％和48.1％.暴露组对象低甲基化基因的mRNA转录水平较高(分别为基因FAM131A、HBM),高甲基化基因的转录水平较低(分别为基因CAPN5、NFIC、SHISA5、FGF 13、GRAMD 1A、CLEC3B、LILRB2和DCAF7);暴露组和参照组对象上述10个基因的mRNA转录水平差异均具有统计学意义(P＜0.001).结论 电子垃圾暴露人群外周血PCB浓度较高,PCB暴露改变了特定基因的甲基化水平,并影响了部分基因的mRNA转录水平.

Cullin-RING E3 ubiquitin ligase (CRL)-4 is a member of the large CRL family in eukaryotes.It plays important roles in a wide range of cellular processes,organismal development,and physiological and pathological conditions.DDB1-and CUL4-associated factor 8 (DCAF8) is a WD40 repeat-containing protein,which serves as a substrate receptor for CRL4.The physiological role of DCAF8 is unknown.In this study,we constructed Dcaf8 knockout mice.Homozygous mice were viable with no noticeable abnormalities.However,the fertility of Dcaf8-deficient male mice was markedly impaired,consistent with the high expression of DCAF8 in adult mouse testis.Sperm movement characteristics,including progressive motility,path velocity,progressive velocity,and track speed,were significantly lower in Dcaf8 knockout mice than in wild-type (WT) mice.However,the total motility was similar between WT and Dcaf8 knockout sperm.More than 40％ of spermatids in Dcaf8 knockout mice showed pronounced morphological abnormalities with typical bent head malformation.The acrosome and nucleus of Dcaf8 knockout sperm looked similar to those of WT sperm.In vitro tests showed that the fertilization rate of Dcaf8 knockout mice was significantly reduced.The results demonstrated that DCAF8 plays a critical role in spermatogenesis,and DCAF8 is a key component of CRL4 function in the reproductive system.

目的:寻找多发性骨髓瘤(MM)基因芯片数据集中的潜在致病基因、疾病诊断和预后相关因子并阐明其作用机制.方法:获取基因芯片数据集GSE13591和Zhan Myeloma,使用R语言进行基因差异表达分析.对共同高表达基因进行Meta分析,得到P值中位秩次TOP10基因.CCLE数据库分析TOP10基因在各肿瘤细胞系中的mRNA表达情况,筛选出蛋白酶体通路相关基因8(DCAF8).cBioPortal数据库中分析DCAF8基因在各肿瘤细胞系的突变率.WB检测DCAF8蛋白在骨髓瘤细胞系中的表达情况.SPSS和Graph Pad软件分析DCAF8表达量和MM患者临床特征之间的相关性,进行受试者工作特征曲线(ROC曲线)绘制和生存分析.R语言Custer Profiler Package和Metascape数据库对DCAF8互作蛋白基因和共表达基因进行GO和KEGG功能富集分析.结果:数据集GSE13591和Zhan Myeloma的上调基因取交集得到477个共同高表达基因.在合并数据集中对上述基因进行Meta分析,得到P值中位秩次TOP10基因,DCAF8在MM细胞系中的平均表达水平最高.DCAF8基因在浆细胞骨髓瘤中的突变率位于各肿瘤细胞系的第一位.DCAF8蛋白在多种MM细胞系中的表达量显著升高(P＜0.01).DCAF8表达量与MM患者的肿瘤负荷显著正相关,1q21扩增阳性组的DCAF8的表达量显著高于1q21阴性组.ROC曲线显示DCAF8的表达水平可以很好地区分MM患者和正常人(P＜0.01).DCAF8高表达组比DCAF8低表达组中位生存时间显著缩短.蛋白互作网络显示DCAF8可与XPO1蛋白直接相互作用.GO和KEGG功能富集分析结果表明,DCAF8与蛋白酶体功能、剪切体活性、组蛋白乙酰化酶活性、RNA转运等功能相关.结论:DCAF8在MM中显著高表达,其表达水平可以很好地区分MM患者和正常人;其高表达与MM患者的生存预后显著负相关,且与1q21扩增和XPO1蛋白相关.