目的:探讨微小RNA-519d-3p(miR-519d-3p)在结直肠癌(CRC)中的表达及对增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:体外培养人结直肠癌细胞系和人正常结肠上皮细胞。将miR-519d-3p模拟物(mimic)分别转染于RKO及SW620，同时设置mimic阴性对照(mimic NC)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-519d-3p表达及DCAF4L2 mRNA表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆实验检测细胞增殖活性。划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测DCAF4L2蛋白表达水平。符合正态分布的计量资料以均数±标准差( ± s)表示，采用两样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:miR-519d-3p在人结直肠癌细胞系中显著下降，其中RKO和SW620表达倍数明显低于NCM460[RKO：(0.311±0.165)倍比1.000倍， t＝7.783， P<0.05；SW620：(0.354±0.079)倍比1.000倍， t＝15.72， P<0.01]，差异有统计学意义。成功转染mimic过表达miR-519d-3p，过表达组表达倍数高于对照组 [RKO：(2.913±0.602)倍比1.000倍， t＝5.409， P<0.01；SW620：(3.194±0.427)倍比1.000倍， t＝8.765， P<0.001]，差异有统计学意义。通过生物学功能实验证实miR-519d-3p表达升高能显著抑制CRC细胞的增殖、迁移和侵袭能力。CCK-8检测结果示，过表达组24、48、72、96 h细胞吸光度值低于对照组(RKO：0.248±0.018比0.184±0.012、0.388±0.007比0.277±0.010、0.658±0.033比0.496±0.008、0.877±0.020比0.681±0.021， t＝3.064， P<0.01；SW620：0.213±0.018比0.181±0.050、0.375±0.008比0.274±0.014、0.720±0.009比0.482±0.006、0.978±0.115比0.721±0.032， t＝2.432， P<0.01)，差异有统计学意义。过表达组平板克隆集落形成个数显著低于对照组[RKO：(262.300±11.320)个比(181.700±2.333)个， t＝7.127， P<0.05；SW620：(448.000±33.260)个比(190.300±7.446)个， t＝9.387， P<0.05]，差异有统计学意义。过表达组划痕愈合率低于对照组[RKO：(39.040±0.812)%比(8.979±0.846)%， t＝394.900， P<0.01；SW620：(28.840±0.848)%比(5.576±1.435)%， t＝21.350， P<0.01]，差异有统计学意义。Transwell迁移和侵袭实验中过表达组穿透微孔膜的细胞个数明显低于对照组，迁移实验[RKO：(196.700±6.360)个比(93.330±4.096)个， t＝44.290， P<0.01；SW620：(198.300±4.485)个比(101.300±1.764)个， t＝16.090， P<0.01]，差异有统计学意义；侵袭实验[RKO：(274.700±3.844)个比(85.670±2.728)个， t＝33.950， P<0.01；SW620：(263.300±6.566)个比(70.330±4.256)个， t＝50.980， P<0.01]，差异有统计学意义。在线预测软件(miRWalk、StarBase 2.0和TCGA)预测，并通过qRT-PCR及Western blot验证结果显示，DCAF4L2作为miR-519d-3p靶基因调控CRC，过表达组DCAF4L2的mRNA表达及蛋白表达倍数明显低于对照组，mRNA表达倍数[RKO：(0.170±0.050)倍比1.000倍， t＝18.400， P<0.01; SW620：(0.256±0.069)倍比1.000倍， t＝26.800， P<0.01]，差异有统计学意义；蛋白倍数[RKO：(45.504±6.076)%比100.000%， t＝15.540， P<0.01；SW620：(43.567±3.760)%比100.000%， t＝26.000， P<0.01]，差异有统计学意义。 结论:结直肠癌细胞中miR-519d-3p表达显著下降，并通过调控DCAF4L2表达抑制结直肠癌增殖、迁移及侵袭能力。

目的 观察微小RNA-519d-3p(miR-519d-3p)对前列腺癌细胞增殖的影响,并探讨可能的分子机制.方法 通过荧光实时定量PCR检测PC-3、DU-145、22RV1、PC-3M、LNCaP人前列腺癌细胞和RWPE-I人正常前列腺上皮细胞中miR-519d-3p的表达水平.以miR-519d-3p表达水平最低的DU-145前列腺癌细胞为转染对象,转染miR-519d-3p模拟物或阴性对照微小RNA (miR-NC)并验证转染效率.采用流式细胞术检测miR-519d-3p对前列腺癌细胞细胞周期的影响,MIT法检测前列腺癌细胞的增殖能力.生物信息学软件预测并应用双荧光素酶报告基因实验验证miR-519d-3p的靶基因.荧光实时定量PCR检测miR-519d-3p靶基因的表达水平,Western blot法检测靶基因蛋白及下游转化生长因子β(TGF-β3)信号通路蛋白表达水平.结果 与正常前列腺上皮细胞相比,miR-519d-3p在前列腺癌细胞的表达水平显著降低,DU-145细胞表达水平最低.DU-145细胞转染miR-519d-3p模拟物后,细胞miR-519d-3p的表达水平显著增加.过表达miR-519d-3p将前列腺癌细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期并降低细胞的增殖能力.生物信息学预测及双荧光素酶报告基因证明肿瘤坏死因子受体相关因子4(TRAF4)为miR-519d-3p的靶基因.过表达miR-519d-3p可明显降低前列腺癌细胞中TRAF4基因及下游TGF-β信号通路蛋白的表达水平.结论 miR-519d-3p在前列腺癌细胞中低表达,过表达rniR-519d-3p通过抑制TRAF4的表达抑制DU-145前列腺癌细胞的增殖.

目的 探讨微小RNA(miR)-519d-3p对核转运蛋白α-2(KPNA2)的靶向作用及其对胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能作用机制.方法 体外培养胶质瘤细胞株U251、U87、T98G与正常胶质细胞株SVGp12,采用qRT-PCR与Western印迹法检测细胞中miR-519d-3p与KPNA2的mRNA及蛋白表达.脂质体将miR-519d-3p mimics、si-KPNA2及其各自阴性对照转染入胶质瘤U251细胞;共转染分组:miR-519d-3p+pcDNA组(miR-519d-3p mimics与pcDNA共转染胶质瘤U251细胞),miR-519d-3p+pcDNA-KPNA2组(miR-519d-3p mimics与pcDNA-KPNA2共转染胶质瘤U251细胞).MTT实验与Tran-swell小室检测各组胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭.运用生物信息学方法预测miR-519d-3p与KPNA2的靶向配对关系,采用双荧光素酶报告实验验证miR-519d-3p与KPNA2的作用关系.Western印迹检测CyclinD1、p21、p27、MMP-2、MMP-9、MMP-14蛋白表达.结果 与正常胶质细胞株SVGp12比较,胶质瘤细胞株U251、U87、T98G中miR-519d-3p的表达水平均显著降低(P<0.05),而KPNA2 mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);miR-519d-3p过表达后胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力均明显减弱,促进p21、p27表达,而抑制CyclinD1、MMP-2、MMP-9、MMP-14表达;抑制KPNA2表达后胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力均明显减弱,促进p21表达,而抑制CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达;miR-519d-3p过表达同时上调KPNA2表达后部分逆转miR-519d-3p过表达对胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用.结论 miR-519d-3p可通过负向调控KPNA2表达而抑制胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭.

目的:观察肺腺癌组织中长链非编码RNA(lncRNA)TTN反义RNA 1(TTN-AS1)的表达情况,以及沉默TTN-AS1表达对肺腺癌A549细胞活力和侵袭的影响.方法:RT-qPCR法检测32例肺腺癌和癌旁正常组织中TTN-AS1、微小RNA-519d-3p(miR-519d-3p)和基质金属蛋白酶2(MMP2)的mRNA表达水平.将未转染的A549细胞设为空白组,转染si-NC的为si-NC对照组,转染沉默TTN-AS1表达的siRNA为si-lncRNA组(n=5),采用CCK8和Transwell方法检测沉默TTN-AS1表达对A549细胞活力和侵袭的影响.使用双萤光素酶报告基因实验、RNA免疫沉淀实验、RT-qPCR和Western blot测定TTN-AS1对miR-519d-3p和miR-519d-3p对MMP2的靶向调控作用.结果:32例肺腺癌组织中TTN-AS1的表达水平显著高于对应癌旁正常组织(P<0.05).沉默A549细胞中TTN-AS1的表达可抑制细胞的活力和侵袭.TTN-AS1可通过海绵吸附的方式负调控miR-519d-3p的表达;MMP2是miR-519d-3p的靶基因,受其负调控.过表达MMP2可部分逆转沉默TTN-AS1和过表达miR-519d-3p对A549细胞侵袭的抑制作用.结论:肺腺癌组织中lncRNA TTN-AS1呈现高表达情况,它可能通过miR-519d-3p/MMP2调控肺腺癌A549细胞的活力和侵袭能力.

目的 探讨微小RNA-519d-3p(microRNA-519d-3p)对LX-2(人肝星状细胞株)活化及凋亡的影响.方法 将miR-519d-3p分子模拟剂(miR-519d-3p mimics组)、抑制剂(miR-519d-3p inhibitor组)及其阴性对照物(mimics NC、inhibitor NC)转染LX-2细胞,利用实时定量PCR检测miRNA-519d-3p在转染后LX-2细胞中的相对表达量,利用实时定量PCR和West ern blot检测转染后LX-2中活化标志物α平滑肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)的mRNA和蛋白的表达水平,分析miR-519d-3p对LX-2细胞活化的影响;用流式细胞术检测转染后LX-2的凋亡率,分析miR-519d-3p对LX-2细胞凋亡的影响.结果 miR-519d-3p mimics组与其阴性对照组相比,α-SMA和Collagen I mRNA与蛋白表达水平均降低(P均<0.01);miR-519d-3p inhibitor组与其阴性对照组相比,α-SMA和Collagen I mRNA及蛋白表达水平均增高(P均<0.01);流式细胞术结果表明,miR-519d-3p mimics组可以促进细胞凋亡(P<0.01);miR-519d-3p inhibitor组可以抑制细胞凋亡,与阴性对照组相比差异均有统计学意义(P均<0.01).结论 miR-519d-3p具有抑制肝星状细胞活化,促进肝星状细胞凋亡,抑制肝纤维的作用.

目的:探究微小RNA-519d-3p(miR-519d-3p)是否靶向肌钙蛋白相关蛋白(TROAP)调节Wnt/β-Catenin信号通路影响非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭.方法:RT-qPCR评估miR-519d-3p和TROAP mRNA表达;双荧光素酶分析miR-519d-3p与TROAP之间的靶向关系;Western blotting检测TROAP、β-Catenin、Axin2、C-myc的蛋白表达;集落形成实验、流式细胞术和Transwell法检测A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭;BABL/c裸鼠建立移植瘤模型,检测miR-519d-3p对体内肿瘤生长的影响.结果:miR-519d-3p与TROAP存在靶向关系(P＜0.05);在体外,miR-519d-3p过表达可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡.此外,miR-519d-3p过表达可下调TROAP表达并降低β-Catenin、Axin2、C-myc蛋白水平(P＜0.05);TROAP过表达对A549细胞的作用与之相反(P＜0.05).同时,过表达TROAP可部分逆转miR-519d-3p过表达对A549细胞恶性行为的影响(P＜0.05).在体内,miR-519d-3p过表达可减小肿瘤体积和肿瘤重量,且显著下调Ki67和N-cadherin表达(P＜0.05).结论:miR-519d-3p靶向TROAP抑制Wnt/β-Catenin信号通路,抑制NSCLC恶性生物学行为.

目的 探讨通过微小RNA-519d-3p(miR-519d-3p)调控Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路对前列腺癌细胞的机制研究.方法 于2021年6月购买前列腺癌细胞株PC3,培养至对数时期,随机分为对照组、下调miR-519d-3p组、上调miR-519d-3p组.采用聚合酶链反应检测miR-519d-3p表达情况,对比干预24h、48h、72h细胞增殖、细胞迁移、侵袭率;检测细胞TLR4/NF-κB信号通路蛋白表达状况.结果 与对照组相比,下调miR-519d-3p组细胞增殖率、细胞侵袭数、迁移数、miR-519d-3p表达量、B淋巴细胞瘤-2基因/Bcl-2相关X基因(Bcl-2/Bax)、TLR4/β-actin、NF-κB/β-actin蛋白表达量上升,细胞凋亡率下降(P＜0.05);与下调miR-519d-3p组相比,上调miR-519d-3p组细胞增殖率、细胞侵袭数、迁移数、miR-519d-3p表达量、Bcl-2/Bax、TLR4/β-actin、NF-κB/β-actin蛋白表达量降低,细胞凋亡率升高(P＜0.05).结论 上调miR-519d-3p可抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭,其作用机制可能与TLR4/NF-κB信号通路相关.