目的:探讨长链非编码RNA（lncRNA） DIO3OS对氯胺酮诱导的小鼠海马神经元细胞毒性的影响及其作用机制。方法:（1）分离并培养原代小鼠海马神经元，应用CCK-8法检测不同浓度（0、25、50、100、200 μmol/L）氯胺酮对细胞活力的影响，qPCR法检测 DIO3OS mRNA的表达。（2）将海马神经元分为对照组、氯胺酮组（50 μmol/L氯胺酮培养24 h）、氯胺酮+pc组（转染pcDNA3.1质粒48 h后加50 μmol/L氯胺酮培养24 h）、氯胺酮+DIO3OS组（转染pcDNA3.1-DIO3OS质粒48 h后加50 μmol/L氯胺酮培养24 h），应用CCK-8法检测各组细胞活力，乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性检测试剂盒检测LDH释放量，流式细胞术检测细胞凋亡情况，qPCR法检测 DIO3OS、脑源性神经营养因子（ BDNF） mRNA的表达，Western blotting实验检测多聚嘧啶区结合蛋白1（PTBP1）、BDNF蛋白的表达。（3）提取正常海马神经元的总蛋白，应用RNA沉降实验检测 DIO3OS mRNA及 BDNF mRNA与PTBP1蛋白的结合能力。（4）将海马神经元分为氯胺酮+DIO3OS+si-NC组（同时转染pcDNA3.1-DIO3OS和si-NC质粒48 h后加50 μmol/L氯胺酮培养24 h）、氯胺酮+DIO3OS+si-PTBP1组（同时转染pcDNA3.1-DIO3OS和si-PTBP1质粒48 h后加50 μmol/L氯胺酮培养24 h），应用qPCR法检测DIO3OS、 BDNF mRNA的表达，Western blotting实验检测PTBP1、BDNF蛋白的表达。（5）将海马神经元分为氯胺酮组（50 μmol/L氯胺酮培养24 h）、氯胺酮+si-DIO3OS组（转染si-DIO3OS质粒48 h后加50 μmol/L氯胺酮培养24 h）、氯胺酮+si-PTBP1组（转染si-PTBP1质粒48 h后加50 μmol/L氯胺酮培养24 h）、氯胺酮+si-DIO3OS+si-PTBP1组（同时转染si-DIO3OS和si-PTBP1质粒48 h后加50 μmol/L氯胺酮培养24 h），应用qPCR法检测 DIO3OS、 BDNF mRNA的表达，Western blotting实验检测BDNF蛋白的表达。（6）将海马神经元分为氯胺酮+DIO3OS+si-NC组（同时转染pcDNA3.1-DIO3OS和si-NC质粒48 h后加50 μmol/L氯胺酮培养24 h）、氯胺酮+DIO3OS+si-BDNF组（同时转染pcDNA3.1-DIO3OS和si-BDNF质粒48 h后加50 μmol/L氯胺酮培养24 h），应用CCK-8法检测细胞活力，LDH细胞毒性检测试剂盒检测LDH释放量，流式细胞术检测细胞凋亡情况。 结果:（1）25、50、100、200 μmol/L氯胺酮组海马神经元细胞活力、 DIO3OS mRNA表达均较0 μmol/L氯胺酮组明显降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。（2）与对照组相比，氯胺酮组海马神经元中 DIO3OS mRNA表达、细胞活力明显降低，LDH释放量明显增加，凋亡率明显增加，BDNF mRNA和蛋白表达明显降低，PTBP1蛋白表达明显降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）；与氯胺酮+pc组相比，氯胺酮+DIO3OS组海马神经元中 DIO3OS mRNA表达、细胞活力明显增加，LDH释放量明显降低，凋亡率明显降低，BDNF mRNA和蛋白表达明显增加，差异均有统计学意义（ P<0.05）。（3）RNA沉降实验显示生物素化标记的DIO3OS、BDNF均可吸附PTBP1蛋白，但生物素化标记的DIO3OS、BDNF反义链均不能吸附PTBP1蛋白。（4）与氯胺酮+DIO3OS+si-NC组相比，氯胺酮+DIO3OS+si-PTBP1组海马神经元中BDNF mRNA和蛋白表达均明显降低，PTBP1蛋白表达明显降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）；2组间 DIO3OS mRNA表达的差异无统计学意义（ P>0.05）。（5）与氯胺酮组相比，氯胺酮+si-DIO3OS组、氯胺酮+si-DIO3OS+si-PTBP1组海马神经元中 DIO3OS mRNA表达均明显降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）；与氯胺酮组相比，氯胺酮+si-DIO3OS组、氯胺酮+si-PTBP1组海马神经元中BDNF mRNA和蛋白表达均明显降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）；与氯胺酮+si-DIO3OS组、氯胺酮+si-PTBP1组相比，氯胺酮+si-DIO3OS+si-PTBP1组海马神经元中BDNF mRNA和蛋白表达均明显增加，差异均有统计学意义（ P<0.05）。（6）与氯胺酮+DIO3OS+si-NC组相比，氯胺酮+DIO3OS+si-BDNF组海马神经元的细胞活力明显降低，LDH释放量明显增加，凋亡率明显增加，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:LncRNA DIO3OS在氯胺酮诱导的原代小鼠海马神经元中表达降低，而过表达DIO3OS可通过结合PTBP1调控BDNF的表达来缓解氯胺酮诱导的神经元细胞毒性。

目的:分析凝血指标对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)脑转移患者立体定向放射外科(stereotactic ra-dio surgery,SRS)治疗预后的预测价值.方法:回顾性收集 2015年 10月至 2018年 9月在天津市环湖医院确诊为NSCLC脑转移并行SRS治疗的 512例患者临床资料,分析总体生存(overall survival,OS)率与无进展生存(progression-free survival,PFS)率,运用Cox多因素分析影响预后相关因素,并基于Cox多因素分析绘制工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线,运用曲线下面积(area under the ROC curve,AUC)分析凝血指标对NSCLC脑转移行SRS治疗患者预后的预测价值.结果:1、2、3、4年的PFS分别为79.9%、69.9%、56.6%、43.2%,OS分别为93.4%、83.2%、69.9%、57.6%.吸烟、纤维蛋白原(fibrinogen,Fib)<3.22 g/L、凝血酶原时间(prothrombin time,PT)<11.69 s、D-二聚体(D-dimer,D-D)<0.51 μg/L与较长的PFS率相关(P<0.05);活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)<21.05 s、Fib<3.22 g/L、D-D<0.51 μg/mL与较长的OS率相关(P<0.05).吸烟、Fib<3.22 g/L、D-D<0.51 μg/mL与较长的PFS率显著相关(P<0.05);Fib<3.22 g/L、D-D<0.51 μg/mL与较长的OS率显著相关(P<0.05).Fib与D-D联合检测预测NSCLC脑转移患者SRS治疗预后的AUC显著高于Fib与D-D单独检测(P<0.05).结论:凝血指标与SRS治疗的NSCLC脑转移患者预后有一定相关性,Fib与D-D为患者预后独立危险因素,可用于评估其预后,两组指标联合评估价值可能更优,具有进一步深入研究的价值.

目的:探讨肾透明细胞癌(简称肾癌)患者血浆中伪基因和长链非编码RNA(lncRNA)的表达及临床价值.方法:收集50例肾癌患者和26例体检健康者的血浆样本,采用qRT-PCR检测血浆样本中伪基因和lncRNA的表达水平;运用cBioPortal、GEPIA、oncolnc、UALCAN、Kaplan-Meier plotter等数据库分析差异表达的伪基因和ln-cRNA与患者预后的关系;应用MPH-dCase9介导转录调控上调目的基因在肾癌细胞系786-O中的表达,qRT-PCR验证其表达水平,CCK-8检测目的基因上调后细胞增殖活性;运用StarBase数据库预测目的基因的miRNA靶标并分析其在肾癌中的表达,通过Kaplan-Meier plotter数据库分析miRNA靶标与患者预后的关系.结果:伪基因PLE-KHA8P1、CXCR2P1、KLRAP1、FER1L4、PDXDC2P和lncRNA TLX1NB、DIO3OS在肾癌患者血浆中的表达水平均明显高于体检健康者,而LINC00482的表达明显低于体检健康者.伪基因PLEKHA8P1、CXCR2P1、FER1L4和lncRNA TLX1NB、LINC00482、DIO3OS在肾癌患者中发生不同频率的突变,且与患者总体生存期相关,其中,CXCR2P1、FER1L4和TLX1NB还与患者无病生存期相关;另外,PLEKHA8P1、KLRAP1、PDXDC2P、FER1L4和DIO3OS高表达与患者不良预后相关,而LINC00482表达与患者总体生存期无关,TLX1NB低表达与不良预后相关,与预期相反.对TCGA数据库的肾癌样本进行分析发现,与正常组织比较,FER1L4和DIO3OS在肾癌组织中高表达,体外实验结果表明FER1L4和DIO3OS上调可促进786-O细胞增殖.通过StarBase数据库预测,分别获得24、13个FER1L4和DIO3OS的miRNA靶标,其中hsa-miR-556-5p和hsa-miR-660-5p在肾癌中的表达分别与FER1L4和DIO3OS表达呈负相关,并与肾癌患者不良预后相关.结论:伪基因PLEKHA8P1、CXCR2P1、KLRAP1、FER1L4、PDXDC2P和lncRNA DIO3OS可作为肾癌潜在的早期诊断及预后生物标志物,其中FER1L4和DIO3OS可能通过调节hsa-miR-556-5p和hsa-miR-660-5p参与肾癌发展.

目的 从TCGA和GTEX数据库分析卵巢癌中的异常表达及与预后相关的基因.方法 利用GEPIA生物信息学分析平台对TCGA数据库和GTEX数据库中卵巢癌与正常组织的关键差异mRNA进行分析.利用R软件进行基因本体富集分析和通路分析,筛选异常表达和与预后相关的基因.结果 共鉴定出差异表达基因7638个,其中上调基因2622个,下调基因5016个.前10位上调的基因包括CLDN3、WFDC2、SLPI、FOLR1、MSLN、CD24、S100A1、CLDN4、LCN2和KRT7,前10位下调的基因包括AL162151.3、STAR、MEG3、DLK1、PROK1、C7、WFIKKN2、DIO3OS、MIR202HG和PLA2G2A.在100个与卵巢癌总生存时间最相关的基因中,PI3、CACNA1C、RPS6KA2、RIPK4、TPT1、SORCS2、CXCL11、CXCL13、SELL、ADAMDEC1的表达存在显著差异.其中PI3和RIPK4 mRNA在卵巢癌中高表达,生存分析提示高表达与预后不良有关.结论 PI3和RIPK4 mRNA在卵巢癌中高表达,与卵巢癌的预后密切相关.它们有可能成为卵巢癌诊断的生物标志物或治疗靶点.