目的:探讨严重烧伤小鼠肠-胰岛轴功能的变化及其作用。方法:该研究为实验研究。将90只雄性8~10周龄C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为假伤组和烧伤组（每组45只小鼠），于烧伤组小鼠背部制备30%体表总面积Ⅲ度烫伤（以下称烧伤）创面，假伤组小鼠模拟致假伤。伤后24 h，检测空腹血糖（样本数为12）后，行腹腔糖耐量实验和口服糖耐量实验，并绘制血糖浓度-时间变化曲线，计算曲线下面积（样本数为6）；分别于腹腔注射或灌胃给予葡萄糖溶液前及腹腔注射或灌胃给予葡萄糖溶液后30、60、120 min从心脏取血，采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血浆胰岛素和胰高血糖素样肽1（GLP-1）水平（样本数为3）；取每组3只小鼠回肠组织，行免疫荧光染色及原位末端标记染色检测肠道L细胞GLP-1表达及凋亡水平；提取每组6只小鼠胰岛行葡萄糖刺激的胰岛素分泌实验，分别经低糖（2.8 mmol/L葡萄糖）和高糖（16.7 mmol/L葡萄糖）孵育后取上清液，采用ELISA法检测胰岛素水平。取36只雄性8~10周龄C57BL/6J小鼠，按随机数字表法分为假伤组、烧伤组和烧伤+艾塞那肽4（Ex-4）组（每组12只小鼠），对假伤组和烧伤组小鼠行同前对应处理，将烧伤+Ex-4组小鼠同烧伤组小鼠致伤后给予其GLP-1受体激动剂Ex-4。伤后24 h，提取小鼠胰岛，采用蛋白质印迹法检测重链结合蛋白（BIP）、蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、磷酸化PERK（p-PERK）、真核翻译起始因子2α（eIF2α）、磷酸化eIF2α（p-eIF2α）和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的蛋白表达并计算p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α比值（样本数为3），采用流式细胞术检测胰岛细胞凋亡率（样本数为3），同前行葡萄糖刺激的胰岛素分泌实验以检测上清液中胰岛素水平（样本数为6）。结果:伤后24 h，烧伤组小鼠空腹血糖为（7.3±1.0）mmol/L，显著高于假伤组的（5.1±0.6）mmol/L（ t=6.36， P<0.05）。伤后24 h，在腹腔糖耐量实验和口服糖耐量实验中，烧伤组小鼠血糖浓度-时间变化曲线下面积均显著大于假伤组（ t值分别为4.32、6.03， P<0.05）；与假伤组相比，烧伤组小鼠经腹腔注射给予葡萄糖溶液前血浆胰岛素水平及经腹腔注射或灌胃给予葡萄糖溶液前血浆GLP-1水平均显著降低（ P<0.05），经腹腔注射或灌胃给予葡萄糖溶液后30、60、120 min血浆胰岛素水平及经灌胃给予葡萄糖溶液后30、60 min血浆GLP-1水平均显著降低（ P<0.05）。伤后24 h，与假伤组相比，烧伤组小鼠肠道L细胞GLP-1表达水平显著降低（ t=7.74， P<0.05），凋亡水平显著升高（ t=14.28， P<0.05）。伤后24 h，烧伤组小鼠经高糖孵育的胰岛上清液中胰岛素水平为（8.5±0.4）ng/mg，显著低于假伤组的（15.7±0.3）ng/mg（ t=18.68， P<0.05）。伤后24 h，与假伤组相比，烧伤组小鼠胰岛中BIP、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α和CHOP的蛋白表达水平均显著升高（ P<0.05）；与烧伤组相比，烧伤+Ex-4组小鼠胰岛中BIP、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α和CHOP的蛋白表达水平均显著降低（ P<0.05）。伤后24 h，烧伤组小鼠胰岛细胞凋亡率为（32.0±3.0）%，显著高于假伤组的（10.3±2.5）%（ P<0.05）；烧伤+Ex-4组小鼠胰岛细胞凋亡率为（20.0±3.6）%，显著低于烧伤组（ P<0.05）。伤后24 h，烧伤组小鼠经高糖孵育的胰岛上清液中胰岛素水平显著低于假伤组（ P<0.05），烧伤+Ex-4组小鼠经高糖孵育的胰岛上清液中胰岛素水平显著高于烧伤组（ P<0.05）。 结论:严重烧伤后小鼠肠-胰岛轴功能障碍，肠道L细胞凋亡增多、GLP-1合成及分泌减少，胰岛细胞发生内质网应激、凋亡增多，葡萄糖刺激的胰岛素分泌减少；GLP-1受体激动剂Ex-4能保护严重烧伤小鼠胰岛细胞功能，可能通过减轻内质网应激降低胰岛细胞凋亡水平，促进胰岛素分泌。

目的:探讨甲基转移酶样蛋白14(METTL14)介导长链非编码RNA EIF3J反义RNA1(lnc EIF3J-AS1)异常表达对胆管癌细胞迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法:收集2017年9月至2018年12月间海军军医大学第一附属医院行手术切除并经病理学确诊的10例胆管癌组织及其相应癌旁正常组织，采用荧光定量PCR法检测胆管癌组织METTL14 mRNA和lnc EIF3J-AS1的表达，采用蛋白质免疫印迹法检测METTL14的蛋白表达。选取胆管癌细胞株HUCCT1和RBE，分为对照组和METTL14或lnc EIF3J-AS1敲低组，对照组分别转染相应的阴性对照的慢病毒，METTL14或lnc EIF3J-AS1敲低组分别转染干扰METTL14或lnc EIF3J-AS1表达的慢病毒。采用Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力，采用蛋白质免疫印迹法检测各组细胞表皮生长因子受体(EGFR)和AKT蛋白表达。结果:胆管癌组织METTL14 mRNA和lnc EIF3J-AS1表达量均显著高于癌旁正常组织(0.075±0.012比0.031±0.006，0.140±0.032比0.064±0.012)，且METTL14 mRNA与lnc EIF3J-AS1表达水平呈正相关( r＝0.883， P＝0.0007)。胆管癌组织METTL14蛋白表达量高于癌旁正常组织(0.354±0.131比0.187±0.183)。与对照组相比，胆管癌细胞株HUCCT1和RBE METTL14敲减组lnc EIF3J-AS1表达水平明显下降(0.217±0.020比1.000±0.052，0.149±0.066比1.000±0.045)。HUCCT1细胞和RBE细胞lnc EIF3J-AS1敲减组迁移和侵袭能力明显下降(5.00±0.58比23.33±0.33，20.33±0.67比70.67±0.33；12.00±0.58比25.00±2.52，22.33±0.89比43.67±0.33)，且EGFR与p-AKT/AKT蛋白表达水平也明显下降(0.109±0.015比1.000±0.018，0.226±0.036比1.000±0.051；0.118±0.052比1.000±0.069，0.132±0.098比1.000±0.023)。以上差异均有统计学意义( P值均<0.05)。 结论:METTL14介导胆管癌中lnc EIF3J-AS1异常表达可促进肿瘤细胞迁移和侵袭。

背景 目前对于微移植(microtransplantation,MST)后免疫细胞群的表型及分子特征、群体内部的异质性,乃至T细胞的演变过程仍不清楚.目的 应用单细胞测序方法解析微移植后小鼠 T细胞的早期变化特点及相应机制.方法 以 20只雌性CB6F1小鼠(H-2Kb/d)为受鼠,20只雄性C57BL/6J小鼠(H-2Kb/b)为供鼠,在无任何预处理和移植物抗宿主病(graft versus host disease,GVHD)预防情况下,向受鼠输注 6×107 个经G-CSF动员后的供鼠脾单个核细胞(G-CSF-mobilized donor spleen cells,GDSC),建立微移植小鼠模型.收集微移植后受鼠 0d、7d和 14d外周血的单个核细胞(0d取3只受鼠,7 d、14 d各取 6只受鼠).用流式分选仪分选CD3+细胞后合并每个样本的所有数据,基于高度可变的基因对数据进行无监督的聚类,并使用统一流形近似和投影在二维空间中投影细胞.利用已知的性别基因Ddx3y、Eif2s3y、Xist和Tsix来区分供受体.用单细胞转录组测序及无偏颇的生物信息学分析进行验证.结果 微移植后供体细胞以微量嵌合体的形式在受体内存活和增殖.来自scRNA-seq数据的差异基因表达将T细胞分为 6个亚群.CD4+ T细胞包括 3个亚群——CD4+幼稚、CD4+记忆、CD4+调节,CD8+T细胞也包括3个亚群——CD8+幼稚、CD8+记忆、CD8+效应.各亚群在14d内发生不同比例变化,幼稚群减少,调节群、效应群和记忆群比例增加,其中CD8+效应亚群的细胞毒因子(NKG7、GZMA、CTSW、GZMB、GZMK、KLRC1)表达量均升高,微移植前后表达量的差异有统计学意义(P＜0.05),提示微移植提高了受鼠的免疫杀伤功能,而调节T细胞亚群表达大量免疫抑制因子配体LGALS9、CD274、IL10、PDCD1LG2、CD48、IL2和CD200R1,与效应亚群的受体结合,负向调节细胞毒作用并最终达到免疫稳定状态.结论 无预处理条件下,单独输注供体GDSC可形成供体微嵌合,成功建立自然免疫状态下的小鼠微移植模型.微移植可引发受鼠体内早期T细胞,尤其是CD8+效应群和CD4+调节群的差异基因表达、信号通路富集等,提示了相应的细胞毒作用和免疫调节性反应;本研究为进一步揭示微移植的免疫和分子机制提供帮助,并为微移植的临床应用提供潜在的可能和思路.

目的 探讨丹参多酚酸对PAP小鼠脑海马组织内质网应激(ERS)通路的影响.方法 选择PAP双转基因雄性小鼠20只,按随机数字表法分为PAP小鼠模型组和丹参多酚酸给药组,每组10只;另选择SPF级C57BL/6J雄性小鼠10只作为正常对照组.丹参多酚酸给药组经尾静脉注射丹参多酚酸0.9%生理盐水溶液(400 g/L),剂量21 mg·kg-1·d-1 ;PAP小鼠模型组和正常对照组给予等量生理盐水,3组均持续给药4周.在第4周末进行Morris水迷宫实验,观察各组小鼠逃避潜伏期、第三象限停留时间(RTQ)、入水朝向角度和跨越平台次数的变化;并检测各组小鼠大脑海马组织淀粉样前体蛋白(APP)阳性细胞、双链RNA样内质网激酶(PERK)-真核起始因子2α-增强子结合同源蛋白(PERK-eIF2α-CHOP)通路相关蛋白的表达水平.结果 PAP小鼠模型组第1～5天逃避潜伏期均较正常对照组明显延长,第5天时有下降趋势,但仍明显高于正常对照组(s :58.41±2.36比28.6±10.15);丹参多酚酸给药组各时间点逃避潜伏期均较PAP小鼠模型组明显缩短,第5天时达到最低水平(s :31.97±8.36比58.41±2.36).PAP小鼠模型组RTQ、跨越平台次数均较正常对照组明显降低〔RTQ(s):8.27±2.95比15.97±7.33,跨越平台次数(次/90 s):0.70±0.47比2.70±0.48〕,而入水朝向角度较正常对照组明显增大〔(47.94±4.68)°比(32.66±2.55)°,P＜0.05〕.丹参多酚酸给药组RTQ、跨越平台次数均较PAP小鼠模型组明显增加〔RTQ(s):13.57±1.86比8.27±2.95,跨越平台次数(次/90 s):1.60±0.97比0.70±0.47〕,而入水朝向角度较PAP小鼠模型组明显减小〔(35.46±6.79)°比(47.94±4.68)°,P＜0.05).PAP小鼠模型组APP阳性表达率和CHOP、p-eIF2α蛋白表达均较正常对照组明显增多〔APP阳性表达率:(60.44±6.19)%比(21.05±5.87)%,CHOP蛋白表达(灰度值):3.09±0.07比1.46±0.09,p-eIF2α蛋白表达(灰度值):0.98±0.09比0.47±0.06,均P＜0.01〕,PERK、p-PERK蛋白表达均较正常对照组减少〔PERK蛋白表达(灰度值):0.42±0.06比0.82±0.11,p-PERK蛋白表达(灰度值):0.98±0.09比0.64±0.10,均P＜0.01〕;丹参多酚酸给药组APP阳性表达率和CHOP、p-eIF2α蛋白表达水平均较PAP小鼠模型组明显著减少〔APP阳性表达率:(33.09±10.33)%比(60.44±6.19)%,CHOP蛋白表达(灰度值):1.57±0.12比3.09±0.07,p-eIF2α蛋白表达(灰度值):0.80±0.07比0.98±0.09,均P＜0.01〕,PERK、p-PERK蛋白表达较PAP小鼠模型组明显增加〔PERK蛋白表达(灰度值):0.89±0.12比0.42±0.06,p-PERK蛋白表达(灰度值):0.78±0.08比0.98±0.09,均P＜0.01〕.结论 丹参多酚酸可能通过PERK-eIF2α-CHOP通路减少PAP双转基因小鼠海马组织APP的蓄积,从而改善PAP双转基因小鼠的学习能力,延缓脑损伤的进程.

目的 长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)的异常表达与肝癌的发生有密切关系.本研究的目的 是探讨lncRNAEIF3J-AS1通过上调肌动蛋白结合蛋白(ANLN)表达促进肝细胞癌(HCC)细胞侵袭和转移中的作用机制.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reac-tion,RTFQ-PCR)检测lncRNA EIF3J AS1在肝癌组织中的表达情况,分析其与患者临床病理特征的相关性,利用多因素Cox比例风险模型分析影响患者总生存的独立预测因子,利用Kaplan-Meier生存分析方法估计lncRNA EIF3J AS1高表达组和低表达组患者的总生存期,并使用Log rank检验方法进行显著性检验.采用transwell实验检测lncRNA EIF3J AS1对人Huh7和MHCC 97H肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响.采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测lncRNA EIF3J-AS1对ANLN蛋白表达的影响.结果 RTFQ-PCR结果提示,lncRNA EIF3J-AS1在肝癌组织中显著上调表达.EIF3J-AS1高表达与肿瘤癌栓(P=0.022)、肿瘤大小(P =0.016)显著相关.多因素Cox比例风险模型分析显示lncRNA EIF3J-AS1表达量(P=0.038)是影响患者总生存的独立预测因子.Ka-plan-Meier生存分析显示lncRNA EIF3J-AS1高表达组患者的总生存显著差于低表达组患者(P=0.007).体外功能实验结果提示,敲减EIF3J-AS1或ANLN抑制人Huh7和MHCC-97H肝癌细胞迁移和侵袭能力.机制研究实验结果提示,在线数据库GEPIA提示EIF3J-AS1与ANLN在肝癌组织中表达正相关(r=0.31,P=1.2 e-0.9),抑制EIF3J-AS1降低了ANLN的mRNA和蛋白表达.结论 Lnc EIF3J-AS1通过调控ANLN蛋白表达在肝癌进展中发挥肿瘤促进作用,Lnc EIF3J AS1有望成为临床肝癌治疗的新靶点.

目的 探讨LncRNA EIF3J-AS1靶向miR-597-5p对胃癌细胞增殖、周期分布和凋亡的影响.方法 RT-qPCR分析LncRNA EIF3J-AS1和miR-597-5p在胃癌组织、癌旁组织、胃癌细胞(SNU-1、AGS、HS-746T)以及人胃黏膜细胞GES1中的表达.将si-LncRNA EIF3J-AS1、si-NC、miR-NC、miR-597-5p mimics、pcDNA、pcDNA-LncRNA EIF3J-AS1、si-LncRNA EIF3J-AS1与anti-miR-NC、si-LncRNA EIF3J-AS1与anti-miR-597-5p分别转染SNU-1细胞,流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡率.CCK-8法检测细胞活力.LncRNA EIF3J-AS1和miR-597-5p的靶向关系通过双荧光素酶报告实验来证实.结果 胃癌组织中LncRNA EIF3J-AS1表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05),miR-597-5p表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05).胃癌细胞中LncRNA EIF3J-AS1表达水平显著高于GES1细胞(P<0.05),miR-597-5p表达水平显著低于GES1细胞(P<0.05).沉默LncRNA EIF3J-AS1表达显著降低细胞活力、S期细胞比例(P<0.05),增加凋亡率和G0/G1期细胞比例(P<0.05),上调miR-597-5p表达水平(P<0.05).过表达miR-597-5p显著降低细胞活力、S期细胞比例(P<0.05),增加凋亡率和G0/G1期细胞比例(P<0.05).过表达LncRNA EIF3J-AS1显著降低miR-597-5p表达水平(P<0.05).LncRNA EIF3J-AS1与miR-597-5p直接特异性结合.抑制miR-597-5p表达显著削弱沉默LncRNA EIF3J-AS1对SNU-1细胞活力、周期分布和凋亡的影响(P<0.05).结论 沉默LncRNA EIF3J-AS1通过靶向上调miR-597-5p可抑制胃癌细胞增殖,阻碍周期进展,并诱导细胞凋亡.