目的 探究泛素特异性蛋白酶7(USP7)抑制剂FT671在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的H9c2细胞肥大中的作用和潜在机制.方法 将H9c2细胞随机分为四组:对照组、FT671组、AngⅡ组、FT671+Ang Ⅱ组.利用α-actinin细胞免疫荧光染色检测心肌细胞表面积;Western blot检测心房钠尿肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)以及NADPH氧化酶4(Nox4)的蛋白表达水平;RT-PCR检测ANP、BNP、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、IL-6、MCP-1、TNF-α的mRNA表达;TUNEL染色检测细胞凋亡情况;细胞计数试剂8(CCK8)实验检测各组细胞活力;活性氧(ROS)染色检测细胞内氧化损伤水平.结果 与对照组相比,AngⅡ组USP7蛋白表达明显增加,而使用FT671后,USP7表达明显被抑制.与Ang Ⅱ组相比,FT671+Ang Ⅱ组心肌细胞面积减小;ANP、BNP、Bax的蛋白表达减少,ANP、BNP、β-MHC、Bax、IL-6、MCP-1以及TNF-α的mRNA表达减少;Bcl-2的蛋白和mRNA表达均增加.与AngⅡ组相比,FT671+Ang Ⅱ组TUNEL阳性细胞明显减少,心肌细胞活力增强,ROS生成减少,Nox4、NLRP3蛋白表达减少,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 FT671通过抑制Nox4/ROS/NLRP3炎症通路减轻AngⅡ诱导的心肌细胞中的氧化应激和炎症反应,从而减轻心肌细胞肥大.

The ubiquitin system is important for drug discovery,and the discovery of selective small-molecule inhibitors of deubiquitinating enzymes (DUBs) remains an active yet extremely challenging task.With a few exceptions,previously developed inhibitors have been found to bind the evolutionarily conserved catalytic centers of DUBs,resulting in poor selectivity.The small molecule IU1 was the first-ever specific inhibitor identified and exhibited surprisingly excellent selectivity for USP14 over other DUBs.However,the molecular mechanism for this selectivity was elusive.Herein,we report the high-resolution co-crystal structures of the catalytic domain of USP14 bound to IU1 and three IU1 derivatives.All the structures of these complexes indicate that IU1 and its analogs bind to a previously unknown steric binding site in USP14,thus blocking the access of the C-terminus of ubiquitin to the active site of USP14 and abrogating USP14 activity,importantly,this steric site in USP14 is very unique,as suggested by structural alignments of USP14 with several known DUB X-ray structures.These results,in conjunction with biochemical characterization,indicate a coherent steric blockade mechanism for USP14 inhibition by compounds of the IU series.In light of the recent report of steric blockade of USP7 by FT671,this work suggests a potential generally applicable allosteric mechanism for the regulation of DUBs via steric blockade,as showcased by our discovery of IU1-248 which is 10-fold more potent than IU1.

目的 通过筛查孕13～20周的妊娠妇女甲状腺功能,建立孕13～20周妊娠特异的甲状腺功能参考范围,初步探讨妊娠妇女甲状腺疾病的患病率,为妊娠期甲状腺疾病的早发现、诊断和治疗提供相关依据.方法 纳入2014年1月-2015年12月在南京医科大学附属苏州医院产科门诊进行初次产前检查的长期居住于苏州的妊娠妇女14 449例(孕13～20周),筛选符合美国国家临床生物化学学会推荐的妊娠期标准人群,并从中随机选取2 000例作为本研究标准人群,以标准人群促甲状腺激素(TSH)和游离甲状腺素(FT4)的第2.5,第97.5百分位数作为低值和高值,建立妊娠期特异的TSH和FT4正常值的参考范围.检测所有14 449例妊娠妇女的空腹血清甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、TSH、FT4,以上述妊娠期特异的TSH和FT4参考范围为标准,探讨全部妊娠妇女甲状腺功能异常的患病情况.结果 妊娠13～20周TSH参考值范围为0.07～3.62 mU/L,FT4参考值范围为11.47～18.57 pmoL/L.甲状腺功能异常总检出率为7.67％(1 109/14 449).其中亚临床甲状腺功能减退的检出率最高,为3.14％(453/14 449).2014年、2015年甲状腺功能异常的检出率分别为7.04％(439/6 238)、8.16％(670/8 211),差异有统计学意义(x2=6.301,P=0.012).TPOAb阳性总检出率为10.75％(1 553/14 449),2014年、2015年分别为10.76％(671/6 238)、10.74％(882/8 211).结论 妊娠期甲状腺功能有改变.以孕周特异的甲状腺功能参考范围为标准,妊娠期甲状腺功能异常中以亚临床甲状腺功能减退最为常见.