目的:探讨N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅴ和Ⅲ(GnT-Ⅴ和GnT-Ⅲ)在胰腺癌中的表达与胰腺癌侵袭和转移的关系。方法:采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法、蛋白质印迹法(Western blot)和实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)的方法检测2001年至2007年在天津市南开医院、天津市肿瘤医院手术切除的83例胰腺癌标本和10例正常胰腺组织中GnT-Ⅴ和GnT-Ⅲ基因的表达，并结合临床资料进行分析。采用两组独立样本 t检验或单因素方差分析法分析；非正态分布资料采用Wilcoxon秩和检验。定性资料采用 χ2检验。 结果:免疫组织化学结果显示胰腺癌组织GnT-Ⅴ的阳性表达率明显高于正常胰腺组( P<0.01)，而GnT-Ⅲ的阳性表达率则明显低于正常胰腺组( P<0.01)，GnT-Ⅴ和GnT-Ⅲ的表达均与淋巴结转移、胰腺癌分期显著相关( P<0.05)；Western blot和RT-qPCR结果表明胰腺癌的GnT-Ⅴ的蛋白和mRNA的相对表达量明显高于正常胰腺组( P<0.01)，而GnT-Ⅲ的蛋白和mRNA的相对表达量明显低于正常胰腺组( P<0.01)。 结论:GnT-Ⅴ和GnT-Ⅲ在胰腺癌的侵袭和转移过程中可能起着重要作用，可作为反映胰腺癌生物学行为的一个参考指标。

目的 探究N-乙酷氨基葡萄糖转移酶V(N-acetylglucosaminetransferase-V,GnT-V)对糖尿病心肌病小鼠心肌损伤的影响及潜在分子机制.方法 30只6～8周龄雄性C57BL/6小鼠,随机分为对照组(Con组)、糖尿病心肌病组(DCM组)和糖尿病心肌病+干扰GnT-V基因的腺相关病毒组(DCM+AAV-shGnT-V组),每组10只.DCM组小鼠腹腔注射50 mg/kg链脲佐菌素,连续5 d,诱导糖尿病模型(随机血糖≥16.7 mmol/L),继续普通饮食喂养12周诱导糖尿病心肌病模型;对照组小鼠腹腔注射相应剂量的的柠檬酸盐缓冲液;DCM+AAV-shGnT-V组在糖尿病模型诱导成功后4周,通过心肌注射40μL滴度为1 × 1010 PFU/mL的腺相关病毒(AAV)-shGnT-V以敲低GnT-V基因.超声心动图检测各组小鼠心脏功能,Masson染色观察各组小鼠心肌纤维化情况,TUNEL染色检测各组小鼠心肌细胞凋亡程度,免疫组化染色观察各组心肌组织中 GnT-V和Beclin1的表达情况,Western blot法检测自噬蛋白LC3、P62及PI3K/AKT通路的蛋白表达情况.结果 与Con组相比,DCM组小鼠心脏收缩功能显著降低(P＜0.05),心肌组织纤维化程度明显增加(P＜0.05),心肌细胞的凋亡率明显上升(P＜0.05),心肌组织中GnT-V、自噬蛋白Beclin1、LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ表达显著增加,P62的表达明显减少(P＜0.05),且PI3K和AKT磷酸化程度明显降低(P＜0.05).与DCM组相比,DCM+AAV-shGnT-V组小鼠心脏收缩功能明显改善(P＜0.05),心肌组织纤维化程度显著下降(P＜0.05),心肌细胞的凋亡率明显降低(P＜0.05),GnT-V、Beclin1及LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ表达显著下调,P62的表达明显增加(P＜0.05),且PI3K和AKT磷酸化程度明显增强(P＜0.05).结论 敲低GnT-V基因可以显著改善糖尿病心肌病小鼠的心肌组织纤维化进展和心肌细胞凋亡程度,其作用可能与激活PI3K/AKT信号通路,进而抑制心肌自噬有关.

目的 探究N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V(N-acetylglucosamine transferase V,GnT-V)介导糖尿病小鼠心肌损伤的作用及其机制.方法 6～8周龄雄性C57BL/6小鼠30只,随机分为正常对照组(Ctrl组)、糖尿病组(DM组)和糖尿病+干扰GnT-V基因的腺相关病毒组(DM+shGnT-V组),每组10只.采用超声心动图检测各组小鼠心功能及左室质量,HE染色观察各组小鼠心肌组织病理变化,实时定量PCR检测心肌组织中心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)和B型钠尿肽(B-type natriuretic peptide,BNP)的表达,免疫印迹方法检测心肌组织中GnT-V、转化生长因子-β激活激酶1(transforming growth factor-β-activated kinase 1,TAK1)蛋白表达.体外培养原代心肌细胞,分为正常葡萄糖组(NG组)、高糖组(HG组)、高糖+干扰GnT-V基因的腺病毒组(HG+Ad-shGnT-V组)和高糖+干扰GnT-V基因的腺病毒+过表达TAK1基因的腺病毒组(HG+Ad-shGnT-V+Ad-TAK1组).免疫印迹方法检测原代心肌细胞中GnT-V、TAK1蛋白表达,免疫荧光检测α-辅肌动蛋白(α-actinin)表达水平.结果 与Ctrl组相比,DM组小鼠心脏收缩功能显著下降(P＜0.001),左室质量明显增加(P＜0.001),心肌细胞肥大(P＜0.001),GnT-V和TAK1表达水平明显升高及ANP和BNP在mRNA水平表达显著增加(P＜0.01).与DM组相比,DM+shGnT-V组小鼠心脏功能明显改善(P＜0.01),左室质量明显降低(P＜0.01),心肌肥大症状明显减轻(P＜0.001),GnT-V、TAK1、ANP及BNP表达明显减少(P＜0.05).与NG组相比,HG组原代心肌细胞α-actinin免疫荧光强度增强,GnT-V和TAK1的表达显著增加(P＜0.05);与HG组相比,HG+Ad-shGnT-V组GnT-V、TAK的表达显著减少(P＜0.05),α-actinin免疫荧光强度减弱;与HG+Ad-shGnT-V组相比,HG+Ad-shGnT-V+Ad-TAK1组GnT-V表达未见明显变化,TAK1的表达明显增加(P＜0.05),心肌细胞α-actinin免疫荧光强度增强.结论 GnT-V可能通过激活TAK1调控糖尿病小鼠的心肌损伤.

Objective:Xiaotan Sanjie recipe(XTSJ),a Chinese herbal compound medicine,exerts a significant inhibi-tory effect on gastric cancer(GC)metastasis.This work investigated the mechanism underlying the XTSJ-mediated inhibition of GC metastasis.Methods:The effect of XTSJ on GC metastasis and the associated mechanism were investigated in vitro,using GC cell lines,and in vivo,using a GC mouse model,by focusing on the expression of Glc-N-Ac-transferase V(GnT-V;encoded by MGAT5).Results:The migration and invasion ability of GC cells decreased significantly after XTSJ administration,which confirmed the efficacy of XTSJ in treating GC in vitro.XTSJ increased the accumulation of E-cadherin at junctions between GC cells,which was reversed by MGAT5 overexpression.XTSJ administra-tion and MGAT5 knockdown alleviated the structural abnormality of the cell-cell junctions,while MGAT5 overexpression had the opposite effect.MGAT5 knockdown and XTSJ treatment also significantly increased the accumulation of proteins associated with the E-cadherin-mediated adherens junction com-plex.Furthermore,the expression of MGAT5 was significantly lower in the lungs of BGC-823-MGAT5+XTSJ mice than in those of BGC-823-MGAT5+solvent mice,indicating that the ability of gastric tumors to metastasize to the lung was decreased in vivo following XTSJ treatment.Conclusion:XTSJ prevented GC metastasis by inhibiting the GnT-V-mediated E-cadherin glycosylation and promoting the E-cadherin accumulation at cell-cell junctions.

寡糖需要N-乙酰氨基葡萄糖转移酶-V(GnT-V)的修饰.GnT-V是由Mgat5编码的糖基转移酶催化N-乙酰氨基葡萄糖的 β1、6 N-聚糖支链形成,被认为与癌生长和转移有关.本文总结了GnT-V在小鼠皮肤和肝细胞中的功能,以及GnT-V在小鼠中的生理作用.

目的:探讨N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V(GnT-V)介导的N-糖基化修饰在胶质瘤细胞放射敏感性中的作用及调控机制.方法:采用RT-PCR和Western blot技术筛选GnT-V高表达的胶质瘤细胞;运用RNA干扰技术抑制GnT-V基因和蛋白表达,流式细胞术和荧光显微镜观察细胞N-糖基化修饰改变;4 Gy X-射线处理后分析细胞放射敏感性差异.结果:成功筛选GnT-V高表达的U251细胞;下调U251细胞中GnT-V的表达,可阻断N-糖链合成,逆转X-射线诱导的G2/M期阻滞,促进细胞凋亡.结论:抑制GnT-V的表达可通过阻断N-糖基化修饰增强胶质瘤细胞的放射敏感性.

目的 本研究通过对HBV相关肝细胞癌(HCC)患者血清N-聚糖检测及肝癌组织与癌旁组织中糖基转移酶基因表达水平比较分析,探索HCC患者血清N-聚糖变化的可能机制.方法 收集解放军总医院2018年—2019年HBV相关HCC手术患者(34例)的肝癌和癌旁组织及正常肝组织标本,同时采集血清标本.从34例HCC患者中随机选择8例HCC患者血清标本作为HCC试验组,20例健康成年人血清标本作为对照组.应用DSA-FACE法分析HCC试验组与对照组血清N-聚糖图谱.采用荧光定量PCR法检测34例HBV相关HCC患者癌组织和癌旁组织中8种糖基转移酶基因(FUT3、FUT4、FUT6、FUT7、FUT8、Gn-TⅢ、Gn-TⅣa和Gn-TⅤ)mRNA表达水平,并应用蛋白印迹法检测相应蛋白表达水平.计量资料两组间比较采用独立样本t检验.结果 与对照相比,8例HCC患者血清中N-聚糖峰9(peak9,NA3Fb)的丰度明显升高(t=-2.514,P<0.05).糖基转移酶FUT8、Gn-TⅣa和Gn-TⅤ基因mRNA表达水平在癌组织和癌旁组织间有差异,其中癌组织中FUT8和Gn-TⅤ基因的mRNA与蛋白表达水平显著高于癌旁组织(mRNA:1.50±0.34 vs 0.65±0.11,t=-2.354,P=0.022;3.57±0.64 vs 1.33±0.16,t=-3.384,P=0.001)(蛋白:0.70±0.11 vs0.083±0.017,t=9.555,P=0.001;1.33±0.19 vs0.60±0.15,t=5.097,P=0.007);癌组织中Gn-TⅣa基因的mRNA表达水平显著高于癌旁组织(mRNA:2.90±0.47 vs 1.68±0.19,t=-2.403,P=0.019),蛋白表达水平与癌旁组织无显著差异(蛋白:0.52±0.24 vs 0.24±0.11,t=1.833,P=0.141).癌组织中这些糖基转移酶表达改变与血清中N-聚糖丰度变化一致.结论 HBV相关HCC患者血清中一些N-聚糖水平变化可能与肝癌组织中糖基转移酶基因GnT-V、GnT-IVa和FUT8表达上调密切相关.