冠状病毒为RNA病毒。从2003年冠状病毒引起的严重急性呼吸综合征（SARS）流行，到2004年人冠状病毒（HCoV）NL63传播和2019年新型冠状病毒（2019-nCoV）引发疫情，均提示应高度重视冠状病毒。冠状病毒可以通过各种媒介黏附于眼、鼻、口腔、呼吸道、消化道等黏膜，导致感染，从而引发炎性反应、肺纤维化、肾衰竭等，严重者导致死亡。随着医学分子技术进步和临床对冠状病毒的研究不断深入，目前已知可感染人的HCoV有7种，其中HCoV-NL63、SARS冠状病毒（SARS-CoV）和2019-nCoV可并发眼部疾病。本文针对HCoV-NL63、SARS-CoV和2019-nCoV的结构特点、传播途径、眼部致病特点和治疗等，汇总国内外最新研究结果进行总结和分析，以期为临床相关诊疗工作提供参考。 （中华眼科杂志，2021，57：871-875）

目前由2019新型冠状病毒(2019 novel coronavirus，2019-nCoV)感染引起的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情正在全球蔓延，引起全世界对人冠状病毒的广泛关注。该病毒与严重急性呼吸综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus，SARS-CoV)、人类冠状病毒NL63(human coronavirus NL63，HCoV-NL63)均以血管紧张素转换酶2(angiotensin-converting enzyme 2, ACE2)为受体。现对这3种病毒的病毒学特征、与ACE2的相互作用、传播能力和临床特点等方面的异同点，以及3种冠状病毒的交叉免疫问题进行综述，为2019-nCoV的后续研究及COVID-19防治提供参考。

目的:建立并优化人冠状病毒NL63参考株(HCoV-NL63-NC_005831)的体外富集方法。方法:以恒河猴肾细胞系(LLC-MK2)培养HCoV-NL63，以离心力135 000× g、分别离心病毒培养上清4 h、6 h、8 h、10 h和12 h以富集病毒，并以商品化PEG沉淀试剂盒富集方法作为对照。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、半数组织培养感染剂量(TCID 50)和空斑实验对原始病毒液、富集病毒液分别进行病毒核酸和病毒生物活性定量检测，评价病毒富集效果；通过透射电镜负染观测病毒富集前后的形态。 结果:经层超速离心法及经PEG沉淀法分别进行体积100∶1富集处理，两种方法获得的富集病毒液相较于原液的病毒核酸浓度及活病毒浓度均有提高( P<0.001)。超速离心方法富集前后，电镜下观察到的病毒颗粒呈正常的负染形态；4 h、6 h、8 h、10 h和12 h超速离心后活病毒浓度平均分别是原病毒液的(7.35±1.62)倍、(13.98±1.71)倍、(36.36±10.41)倍、(48.16±9.38)倍、(54.26±7.02)倍，PEG沉淀后活病毒浓度是原病毒液的(3.39±0.16)倍，经超速离心法获得的富集病毒液的核酸浓度及活病毒浓度显著高于PEG沉淀法( P<0.05)；8 h、10 h、12 h超速离心后病毒浓度显著高于4 h和6 h( P<0.05)，但8 h、10 h、12 h之间病毒含量差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:超速离心法相较于商品化的PEG沉淀法能更有效富集HCoV-NL63病毒；离心力为135 000× g时，选择8 h的超离时间可获得较优的体外富集效果。

与严重急性呼吸系统综合征冠状病毒（SARS-CoV）一样，2019新型冠状病毒（2019-nCoV）亦是以血管紧张素转化酶（ACE）2为受体感染细胞。ACE2作为肾素-血管紧张素系统（RAS）的重要成员，与ACE互为拮抗，二者的平衡与失衡在维护心血管系统生理功能、机体炎症反应、肺损伤等过程中均发挥着重要作用，其在冠状病毒感染与致病机制中亦发挥着非常重要的作用。目前为止，在7?种人畜共患的冠状病毒中有3?种以ACE2为受体感染细胞，即SARS-CoV、人类冠状病毒NL63（HCoV-NL63）和2019-nCoV，了解这些病毒与ACE2的相互作用对于冠状病毒感染的预防和治疗意义重大。该文对相关文献进行了梳理，总结了ACE2及RAS在冠状病毒感染、致病过程中发挥的作用，对于2019-nCoV防治过程中存在的争议进行了归纳，针对ACE2和RAS中可能存在的2019-nCoV的治疗靶点进行了展望。

上海市CDC试点实施了成年人急性呼吸道感染综合监测，对流感样病例（ILI）和严重急性呼吸道感染（SARI）开展主动监测和多种呼吸道病原体的检测鉴定。在2019年172例ILI中以流感病毒感染为主，其中新甲型H1N1型、H3N2亚型和B/V亚型流感病毒的检出阳性率分别为30.81%、14.53%和30.55%，新甲型H1N1型的流行高峰为第一季度。肠道病毒/人鼻病毒总检出阳性率为6.40%，高峰在第三季度。腺病毒总检出阳性率为4.65%，高峰在第二季度。人类冠状病毒OC43型2份、HKU1型和NL63型各1份、229E型未检出；金黄色葡萄球菌检出率为17.44%，肺炎克雷伯菌检出率为9.88%；1 447例SARI病例也以流感病毒感染为主，其中新甲型H1N1型、H3N2和B/V亚型流感病毒的检出率分别为5.46%、1.73%和0.30%，新甲型H1N1型流感流行高峰也为第一季度，检出阳性率为17.50%。肠道病毒/人鼻病毒总检出阳性率为2.97%，高峰在第一季度。肺炎支原体检出阳性率为3.25%，军团菌检出阳性率为1.04%。检出人类冠状病毒229E型5份、OC43型10份、HKU1型7份、NL63型6份；细菌培养检出金黄色葡萄球菌8株，铜绿假单胞菌4株，肺炎克雷伯菌3株。通过开展主动监测，不仅发现了个别少见的新发传染病如人感染H7N9禽流感病例，同时也初步掌握了上海市急性呼吸道感染病例的流行病学特征、病原谱特征及其季节性变化趋势。近年来，通过逐步增加监测哨点医院，不断改进监测方法，尤其是在应对新型冠状病毒肺炎过程中在全市推广了基于医院HIS系统的监测信息上报系统，初步建立了覆盖全市的急性呼吸道感染综合监测网络，为开展新发呼吸道传染病主动监测预警打下了基础。

目的:建立基于SYBR Green I颜色判定的检测新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）ORF1ab基因的逆转录环介导等温扩增方法（reverse transcription loop-mediated isothermal amplification，RT-LAMP），为诊断SARS-CoV-2提供简便、快速和准确可靠的工具。方法:基于GenBank中SARS-CoV-2 ORF1ab基因序列保守区设计引物，经引物筛选和RT-LAMP反应体系优化后进行灵敏度和特异性评价，并与实时荧光定量RT-PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）方法进行比较。结果:基于颜色判定的RT-LAMP方法可在65℃45 min内完成SARS-CoV-2的快速检测，检测限为3 copies/reaction，与qRT-PCR的敏感度一致。RT-LAMP检测人冠状病毒OC43、人冠状病毒NL63和乙型流感病毒核酸样本结果为阴性，具有较好的特异性。经SARS-CoV-2临床样本验证，RT-LAMP与qRT-PCR的检测符合率达100%。结论:基于颜色判定的RT-LAMP方法灵敏度高、特异性强，适用于SARS-CoV-2的快速可视化检测，具有应用于SARS-CoV-2样本的初筛及基层卫生医疗机构和现场推广的潜力。

目的:建立并评价一种基于COYOTE ? Flash20实时荧光定量PCR仪用于新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸快速检测的方法。 方法:通过使用靶向SARS-CoV-2 ORF1ab和N基因的特异性引物探针组构建快速反应体系，并验证体系的灵敏度和特异性。同时，使用108例新型冠状病毒肺炎(COVID-19)临床样本对该方法进行应用评估。结果:该检测方法无需核酸提取、手动操作时间仅用1 min，样本进、结果出，可以在30 min完成检测。该方法最低检测限为4×10 2拷贝/ml；与其他人类冠状病毒(包括HCoV-229E、HCoV-NL63、HCoV-OC43、HCoV-HKU1、SARS-CoV和MERS-CoV)以及其他引起呼吸系统疾病的病毒无交叉反应。临床样本应用评估显示，与常规需要核酸提取的RT-qPCR的总符合率为98.15%。 结论:通过对SARS-CoV-2快速荧光定量PCR方法的应用评价发现，该方法操作简便、快速、特异、灵敏，适用于多种场景即时快速检测需求。

目的:研究阐明北京地区人冠状病毒(human coronavirus，HCoV)的流行特征和基因变异规律，为HCoV的感染防控提供分子流行病学依据。方法:本研究收集了2016—2017年北京市呼吸道多病原监测采集的HCoV阳性病例样本287份和流行病学数据，分析HCoV检出率、人群、季节特征，采用RT-PCR方法扩增HCoV pol基因部分片段用于HCoV分型和进化分析研究。结果:本研究HCoV检出率为1.89%，HCoV阳性样本的呼吸道病毒共感染率为20.56%(59/287)。鉴定出OC43型69株，核苷酸同源性为97.2%～100%，氨基酸同源性为92.2%～100%；229E型39株，核苷酸同源性为99.2%～100%，氨基酸同源性为99.2%～100%；HKU1型10株，NL63型2株。结论:OC43型和229E型为2016—2017年北京市HCoV主要型别，呈现出一定的季节差异，同一型别流行株具有很高的核苷酸和氨基酸同源性。

目的 分析上海2009年11月至2016年4月人冠状病毒(HCoV)流行特征,以及HCoV-OC43基因型分布和变异变迁规律.方法 收集2009年11月至2016年4月期间上海7家哨点医院感染科急性呼吸道感染患者的临床资料和呼吸道样本,包括咽拭子、痰、鼻咽抽吸物和肺泡灌洗液,共6059例.采用HCoV通用引物对患者样本进行检测并测序分型.HCoV-OC43阳性样本进一步采用特异性引物对刺突蛋白、依赖RNA的RNA聚合酶(RDRP)和核衣壳蛋白全基因进行扩增和测序,并通过全基因序列构建进化树对HCoV-OC43进行基因分型和进化分析.结果 共检出HCoV 63株(1.04%),其中HCoV-OC43检出数最多,为34株,其后依次是HCoV-229E和HCoV-HKU1,检出数分别为18和10株,而HCoV-NL63、重症急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)和中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)均未检出.29例HCoV-OC43阳性样本获得刺突蛋白、RDRP和核衣壳蛋白全基因序列,根据进化树分析显示,其中27例为D型,2例为B型,而其他基因型E、F、G均未检出,其中D型为主导基因型.进一步分析与HCoV-OC43进入宿主和中和抗体产生相关的刺突蛋白发现,刺突蛋白重要的功能结构域——N端结构域(NTD)和受体结合结构域(RBD)含有较多氨基酸变异和阳性选择位点,并伴有氨基酸插入/缺失.13个阳性选择位点均位于NTD或RBD,其中10个位于NTD,3个位于RBD.结论2009—2016年,上海流行的HCoV主要为HCoV-OC43,其中D型为优势基因型.刺突蛋白的NTD区和RBD区是HCoV-OC43进化过程中的高变区域,伴有氨基酸替换、氨基酸插入/缺失.

目的 研究南京地区急性呼吸道感染患儿冠状病毒HKU1(Human CoV-HKU1)和NL63(Human CoV-NL63)的感染状况,分析其临床和流行病学特征.方法 2009年8月至2011年7月收集了因急性呼吸道感染于南京医科大学儿童医院就诊和住院患儿呼吸道分泌物标本1286份,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HCoV-HKU1和NL63基因,同时对阳性标本进行常见呼吸道病毒筛查.采用分子生物学实验方法对阳性扩增产物进行克隆、测序、同源和进化分析.结果HCoV-HKU1检出率1.1％(14/1286),核苷酸同源性98.2％ ～100％,混合感染率92.9％,主要临床诊断为支气管炎、支气管肺炎、毛细支气管炎,临床表现为咳嗽、发热、喘息.HCoV-NL63检出率1.5％(19/1286),核苷酸同源性95.6％ ～100％,混合感染率为63.2％,主要临床诊断为急性上呼吸道感染、支气管炎、支气管肺炎,临床表现为发热、咳嗽、咳痰.HCoV-HKU1和NL63感染均无死亡病例.结论 HCoV-HKU1 感染主要为下呼吸道感染,在冬春季流行,受感染人群以 1 岁以下婴幼儿为主;HCoV-NL63 感染包括上呼吸道和下呼吸道感染,在夏季和秋季流行,受感染人群以 1 岁 ～ 3 岁幼儿为主. 冠状病毒 HKU1 与 NL63 感染的临床特点比较无明显差异.