目的:研究转录因子Krüpple样因子5(Krüpple-like factor 5,KLF5)在人牙髓-牙本质复合体中的表达,探讨其在成牙本质细胞分化及牙本质形成过程中的作用.方法:应用免疫组织化学方法检测KLF5在人牙髓-牙本质复合体中及牙髓细胞矿化诱导过程中的表达,Western印迹法检测KLF5在成牙本质细胞分化过程中的表达变化.采用SPSS17.0软件包对实验结果进行单因素方差分析和Tukey检验.结果:在正常及龋坏牙中,KLF5表达于人成牙本质细胞和成牙本质样细胞,而在牙本质及前期牙本质中无表达.细胞免疫组织化学结果显示,在矿化诱导0、7、14d的人牙髓细胞中,KLF5在细胞核中呈强阳性表达.Western印迹结果显示,随着矿化诱导时间的延长,KLF5蛋白表达量逐渐增加.诱导14～21 d时,KLF5表达量增加最显著.结论:KLF5可能参与成牙本质细胞分化及牙本质的形成过程.

目的 探讨Krüpple样因子5(KLF5)对心肌细胞体积、细胞内总蛋白、氧化损伤及Ca2+水平的影响.方法 体外分离培养乳鼠心肌细胞,心肌细胞分为以下几组,对照组:不做任何处理,正常培养.模型组:在细胞培养液中添加100 nm的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ).阴性组:心肌细胞中转染siRNA阴性对照.干扰组:心肌细胞中转染KLF5 siRNA.阴性+AngⅡ组:心肌细胞中转染siRNA阴性对照,并在细胞培养液中添加100 nm的AngⅡ.干扰+AngⅡ组:心肌细胞中转染KLF5 siRNA,并在细胞培养液中添加100 nm的AngⅡ.分别检测KLF5的基因和蛋白表达水平.在心肌细胞内转染KLF5 siRNA,同时用AngⅡ处理,测定心肌细胞的体积和心肌细胞内总蛋白的含量,同时检测细胞内肥大基因心房利钠肽(ANP)mRNA的水平,Western blot方法测定细胞内钙调神经磷酸酶(CaN)蛋白水平,激光共聚焦显微镜检测静息状态下Ca2+水平,二硝基苯肼法测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤法测定超氧化物歧化酶(SOD)含量.结果 模型组心肌细胞中KLF5基因和蛋白表达水平高于对照组(P<0.05).干扰组心肌细胞中KLF5水平低于对照组(P<0.05).阴性组和对照组心肌细胞中KLF5水平没有差异(P>0.05).模型组心肌细胞的体积增加,细胞总蛋白含量也增加,细胞内肥大基因ANP mRNA的水平也升高,CaN蛋白表达和静息状态下Ca2+水平上调,细胞内生成的MDA增加,SOD活性降低,细胞培养液中LDH水平升高,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).干扰+AngⅡ组心肌细胞体积和蛋白含量下降,细胞内肥大基因ANP mRNA的水平降低,CaN蛋白表达和静息状态下Ca2+水平下降,细胞生成的MDA减少,SOD活性升高,细胞培养液中LDH水平降低,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05).阴性+AngⅡ组细胞体积、蛋白含量、细胞内肥大基因ANP mRNA、CaN蛋白、静息状态下Ca2+水平、细胞生成的MDA、SOD活性、细胞培养液中LDH水平与模型组比较没有明显差异(P>0.05).结论 AngⅡ诱导心肌细胞表达KLF5,KLF5下调可抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其作用机制可能与心肌细胞氧化损伤和Ca2+水平有关.

目的 研究沉默Krüpple样因子5(KLF5)对氧化应激条件下心肌细胞炎症因子分泌的影响及机制.方法 心肌H9c2细胞用过氧化氢处理,qRT-PCR和Western blot检测细胞中KLF5 mRNA和蛋白表达水平.用KLF5 shRNA慢病毒感染H9c2细胞,给予过氧化氢处理后,qRT-PCR和Western blot检测细胞中KLF5表达水平.MTT检测沉默KLF5对过氧化氢处理的心肌细胞活性的影响,同时用qRT-PCR法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA水平,Western blot检测细胞中核因子-κBp65(NF-κBp65)蛋白水平.用NF-κB激活剂处理沉默KLF5的心肌细胞,MTT检测其在过氧化氢处理后细胞活性,qRT-PCR法检测过氧化氢处理后细胞中TNF-α、IL-1β水平.结果 过氧化氢诱导H9c2细胞中KLF5 mRNA和蛋白表达.KLF5 shRNA慢病毒感染可下调氧化应激条件下H9c2细胞中KLF5的表达.过氧化氢能够下调H9c2细胞活性,提高细胞分泌的TNF-α、IL-1β水平,促进细胞中NF-κBp65蛋白表达.沉默KLF5能够提高过氧化氢条件下H9c2细胞经活性,减少细胞分泌TNF-α、IL-1β,抑制细胞中NF-κBp65蛋白表达.NF-κB激活剂可以逆转沉默KLF5对过氧化氢处理的心肌细胞增殖活性、炎症因子分泌的影响.结论 氧化应激诱导心肌细胞表达KLF5,沉默其表达可以通过抑制NF-κB通路减少心肌细胞中炎症因子表达.

目的 探讨转录因子Krüpple样因子7(KLF7)对新生大鼠海马神经元缺血再灌注损伤的影响.方法 取新生Sprauge-Dawley大鼠海马组织制备海马神经元单细胞悬液,按每孔1×106个细胞接种于聚赖氨酸包被6孔细胞培养板,细胞贴壁继续培养7d后分为正常组、氧糖剥夺/复氧(OGD/R)组和OGD/R+ KLF7组.正常组培养7d的原代大鼠海马神经元按每孔1×106个细胞于含胎牛血清的DMEM/F12培养基中进行培养,置于含体积分数5％CO2的培养箱中37℃下培养3d;OGD/R组培养7d的原代大鼠海马神经元用磷酸盐缓冲液洗3次,用移液器将原培养液置换为无糖平衡盐溶液,置于三气缺氧细胞培养箱(体积分数1％O2、94％ N2、5％ CO2)中37℃下培养4h,然后应用4.5 g·L-1葡萄糖培养基代替无糖平衡盐溶液,置于含体积分数5％ CO2的常温培养箱中培养24 h;OGD/R+KLF7组培养成功的OGD/R模型细胞加入Lenti-KLF7慢病毒进行转染,置于含体积分数5％ CO2的培养箱中37℃下孵育3d.应用倒置相差显微镜观察各组海马神经元的生长状态,实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞中KLF7、NGF、Caspase-3、Bcl-2和Bax mRNA表达,细胞计数试剂盒检测各组细胞活性,Hoechst33342/磺化丙啶双染法检测各组细胞凋亡情况.结果 3组细胞中KLF7、NGF、Caspase-3、Bax和Bcl-2 mRNA相对表达量比较差异均有统计学意义(F=237.702、24.031、476.505、112.900、89.467,P＜0.05);OGD/R组和OGD/R+KLF7组细胞中KLF7、NGF、Caspase-3、Bax和Bcl-2 mRNA相对表达量显著高于正常组(P＜0.05);OGD/R+ KLF7组细胞中KLF7、NGF和Bcl-2mRNA相对表达量显著高于OGD/R组(P＜0.05),Caspase-3和Bax mRNA相对表达量显著低于OGD/R组(P＜0.05).正常组、OGD/R组和OGD/R+KLF7组细胞活性分别为1.080±0.090、0.499±0.049和0.727±0.115,3组细胞活性比较差异有统计学意义(F=42.710,P＜0.05);OGD/R组和OGD/R+KLF7组细胞活性显著低于正常组(P＜0.05),OGD/R+ KLF7组细胞活性显著高于OGD/R组(P＜0.05).正常组、OGD/R组、OGD/R+KLF7组细胞凋亡率分别为(40.6±6.3)％、(76.7±4.3)％和(58.5±4.4)％,3组细胞凋亡率比较差异有统计学意义(F=36.822,P＜O.05);OGD/R组和OGD/R+KLF7组细胞凋亡率显著高于正常组(P＜0.05),OGD/R+KLF7组细胞凋亡率显著低于OGD/R组(P＜0.05).结论 KLF7对OGD/R诱导的海马神经元缺血再灌注细胞损伤具有保护作用,其机制可能与介导NGF表达,进而调控Caspase-3、Bcl-2和Bax细胞凋亡信号通路有关.

目的:分析微小RNA-145(microRNA-145,miR-145)和Krüpple样因子5(Krüepple-like factor5,KLF5)在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)骨髓液中的表达及其临床意义.方法:收集2015年1月至2016年3月住院MM诊治患者65例(疾病组)和体检健康正常者36例(对照组)作为研究对象,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测骨髓液中miR-145 mRNA和KLF5 mRNA表达水平;采用Western Blot检测KLF5蛋白表达水平;分析miR-145与KLF5 mRNA在MM髓液中表达的相关性.结果:miR-145 mRNA在MM骨髓液中的表达水平显著低于对照组(P<0.05);KLF5 mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05);与I期、Ⅱ期比较,Ⅲ期MM患者骨髓液中miR-145表达水平显著降低(P<0.05),KLF5 mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与IgG型和IgA型相比,轻链型与非分泌型MM患者骨髓液中miR-145相对表达量明显降低(P<0.05);KLF5 mRNA在不同免疫分型中的表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);miR-145和KLF5的表达呈负相关(r=-0.452,P<0.05);死亡MM患者骨髓液中miR-145表达水平显著低于存活患者(P<0.05),KLF5 mRNA表达水平显著高于存活患者(P<0.05).结论:miR-145在MM患者骨髓液中低表达,KLF5高表达,二者表达可能与MM的发生和病情发展密切相关.

目的:探讨Krüpple样转录因子12(KLF12)在宫颈癌中的表达及对宫颈癌细胞增殖、凋亡及IL-6/STAT3信号通路的影响.方法:Western blot检测宫颈癌组织及宫颈癌C33A、HeLa和SiHa细胞KLF12表达.将KLF12特异性siRNA(si-KLF12)转染至C33A细胞,同时转染阴性对照(si-NC),Western blot检测转染后细胞KLF12表达,CCK-8法检测si-KLF12转染C33A细胞24～72 h细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测5 mg/ml重组人IL-6(RhIL-6)处理的转染si-KLF12的C33A细胞中STAT3、p-STAT3、CyclinD1、Bcl-2和Bax表达.结果:宫颈癌组织及细胞中KLF12表达明显升高(P<0.05).与对照组相比,转染KLF12 siRNA的C33A细胞KLF12表达、细胞增殖能力明显降低,细胞凋亡率明显升高(P<0.05).与si-NC组相比,si-KLF12组p-STAT3、CyclinD1和Bcl-2表达均明显降低,Bax表达明显升高(P<0.05),si-KLF12和RhIL-6处理C33A细胞可明显减弱si-KLF12对p-STAT3、CyclinD1和Bcl-2表达的影响.结论:KLF12在宫颈癌中表达升高,抑制其表达可降低细胞增殖能力,促进细胞凋亡,机制可能与调控IL-6/STAT3信号通路有关.

目的 检测未破裂颅内动脉瘤病人血清miR-448-3p、Krüpple样因子5(KLF5)表达并探讨其临床意义.方法 2017年9月～2020年5月本院收治的未破裂颅内动脉瘤病人(观察组)143例,同期体检健康者150例(对照组)作为对照.检测血清miR-448-3p、KLF5 mRNA表达水平及血清白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;比较两组血清miR-448-3p、KLF5 mRNA水平;Pearson法分析未破裂颅内动脉瘤病人血清miR-448-3p、KLF5 mRNA水平与血清IL-6、TNF-α水平,及血清miR-448-3p与血清KLF5 mRNA水平的相关性;ROC曲线分析血清miR-448-3p、KLF5 mRNA表达水平对未破裂颅内动脉瘤的诊断价值.结果 与对照组相比,观察组未破裂颅内动脉瘤病人血清miR-448-3p水平显著降低,KLF5 mRNA、IL-6、TNF-α水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与瘤数目=1个比较,瘤数目≥2个的未破裂颅内动脉瘤病人血清miR-448-3p水平显著降低,KLF5 mRNA水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与瘤直径<7 mm相比,瘤直径≥7 mm的未破裂颅内动脉瘤病人血清miR-448-3p水平显著降低,KLF5 mRNA水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);未破裂颅内动脉瘤病人血清miR-448-3p水平与血清KLF5 mRNA、IL-6、TNF-α水平均呈负相关(r=-0.429、-0.442、-0.471,P<0.05),血清KLF5 mRNA水平与血清IL-6、TNF-α水平均呈正相关(r=0.454、0.523,P<0.05);血清miR-448-3p、KLF5 mRNA表达水平诊断未破裂颅内动脉瘤的ROC曲线下面积分别为0.978、0.995,敏感度分别为93.7％、95.8％,特异性分别为90.7％、98.7％.结论 未破裂颅内动脉瘤病人血清miR-448-3p水平降低,KLF5水平升高,两者水平与病人瘤数目、瘤直径、炎症水平关系密切,可能共同参与动脉瘤进展.