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牙根内吸收的病因及致病机制
编辑人员丨4天前
牙根内吸收是由破牙本质细胞活动引起的根管内牙本质缺失的病理性过程。由于其发病具有隐匿性,发现时往往已形成较大病损。前期牙本质层受损是始发因素,持续的牙髓炎症刺激是促进因素。牙外伤、牙髓的慢性炎症、活髓切断术和牙再植术等多种因素均可诱导牙根内吸收的发生。本文针对牙根内吸收的病因和致病机制进行阐述,以期为牙根内吸收的早期阻断治疗提供参考。
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编辑人员丨4天前
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成骨不全的研究进展
编辑人员丨4天前
成骨不全( osteogenesis imperfecta, OI)是一种先天性骨骼发育障碍的遗传性骨病,严重程度从围产期死亡到轻微症状,主要的临床表现包括蓝色巩膜、低骨量、反复骨折、侏儒症、牙本质发育不全及听力障碍等。目前 OI有18个亚型,3种遗传方式:常染色体显性遗传、常染色体隐性遗传和 X-连锁染色体遗传。 OI有多种致病基因,部分致病基因尚未分型,致病机制在逐步明确。目前尚未发现有彻底治愈 OI的报道,临床上多采用双磷酸盐治疗,转化生长因子- β单克隆抗体、特立帕肽等也有报道可能增加骨密度,间充质干细胞及基因编辑技术有望成为针对性治疗 OI的新手段。本文对成骨不全症的部分致病分子机制及治疗方法进行综述,以期为 OI的研究及治疗提供策略。
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编辑人员丨4天前
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牙髓干细胞用于牙再生的新进展和新方向
编辑人员丨4天前
获得正常形态结构和功能的牙髓、牙本质和牙周再生一直是牙再生领域的研究热点。目前,以牙髓干细胞为种子细胞的组织工程与再生技术已初步实现类牙组织再生。如何提高再生的有效性和稳定性成为亟待解决的问题。单细胞转录组测序和类器官培养技术的发展,为进一步实现精准、靶向和可控的功能性牙再生提供了可能。本文综述牙髓干细胞在牙再生中的研究进展,归纳牙髓干细胞基本特性并浅析研究热点,为实现稳定高效的牙再生提供新的研究方向和转化应用思路。
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编辑人员丨4天前
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脱矿牙本质基质保护策略及其在牙本质-树脂粘接修复中的研究进展
编辑人员丨4天前
病理损伤和临床医源性操作均可导致牙本质脱矿,形成脱矿牙本质基质(demineralized dentin matrix,DDM)。牙本质脱矿激活内源性基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)和半胱氨酸组织蛋白酶(cysteine cathepsin,CC);同时DDM力学性能降低,因此在酶促降解和物理破坏下DDM易丧失结构完整性,降低DDM在牙本质-树脂粘接修复中的临床价值。采用交联剂和MMP/CC抑制剂是保护DDM结构完整性和实现其临床价值的有效策略。多种化学合成试剂和植物来源提取物能显著改善DDM力学性能,增强DDM酶解耐受性,但化学合成试剂的细胞毒性和植物提取物引起的牙齿着色可显著影响其临床适用性。在保护牙本质胶原的同时发挥抗菌性能是未来DDM保护剂研究的新方向。因此,本综述分别从胶原交联剂、胶原降解酶抑制剂和集两者功效于一体的化合物展开,探讨DDM保护的最新研究进展,并展望其在牙本质-树脂粘接中的应用前景,以期为DDM保护策略的临床应用提供参考。
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编辑人员丨4天前
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基于单细胞测序技术构建小鼠磨牙牙髓细胞的发育图谱
编辑人员丨4天前
目的:通过在单细胞水平分析小鼠磨牙细胞间异质性,构建牙髓细胞发育的时空图谱,进一步揭示牙齿发育的过程和调控机制。方法:分别收集出生后0、3 d的C57BL/6小鼠下颌第一磨牙各10颗,制备单细胞悬液,采用单细胞转录组测序(single-cell RNA sequencing,scRNA-seq)技术进行测序。从本课题组前期研究中提取出生后7 d小鼠磨牙scRNA-seq数据,与0、3 d数据进行合并分析。使用Seurat程序对测序数据进行质控、标准化、降维和聚类分析;Monocle程序进行拟时序分析,预测发育轨迹;Scillus程序进行基因本体分析,对细胞功能进行注释。使用原位杂交技术对标记基因进行体内定位,明确不同亚群细胞的体内分布和时空变化。结果:Seurat分析显示小鼠磨牙细胞具有26个细胞亚群,可分为牙髓细胞、牙囊细胞、上皮细胞、免疫细胞、内皮细胞、管周细胞、胶质细胞和红细胞等八大类细胞,其中牙髓细胞包含5个亚群:成熟牙髓细胞,标记基因为柯萨奇病毒腺病毒受体(coxsackie virus and adenovirus receptor,Cxadr);牙乳头细胞,标记基因为SPARC相关模块化钙结合蛋白2(SPARC related modular calcium binding 2,Smoc2);周期细胞,标记基因为Ⅱ型DNA拓扑异构酶(DNA topoisomerase Ⅱ alpha,Top2a);前成牙本质细胞,标记基因为棕榈酰蛋白羧酸酯酶(notum palmitoleoyl-protein carboxylesterase,Notum);成牙本质细胞,标记基因为牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,Dspp)。随着牙胚发育,成熟牙髓细胞的比例逐渐增加,周期细胞和成牙本质细胞比例逐渐降低。原位杂交染色和基因本体分析结果显示,Cxadr+成熟牙髓细胞定位于牙冠上部,主要功能为成骨和“细胞外结构组织”;Smoc2+牙乳头细胞位于根尖,主要功能与“细胞外结构组织”和器官发育相关;Top2a+周期细胞位于牙冠下部,进行有丝分裂;Notum+前成牙本质细胞邻近上皮根鞘,和Dspp+成牙本质细胞的主要功能同为生物矿化。Monocle分析显示牙髓细胞有2条发育轨迹,从Smoc2+牙乳头细胞起始,经过Top2a+周期细胞,再分化为Cxadr+成熟牙髓细胞或成牙本质细胞。结论:scRNA-seq技术能在转录组水平充分揭示细胞间的异质性,为研究器官发育过程和调控机制提供了有力工具。
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编辑人员丨4天前
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微量元素对牙髓干细胞分化的影响
编辑人员丨4天前
牙髓干细胞(dental pulp stem cell,DPSC)是牙髓及牙本质再生研究中关键的优选细胞,具有多向分化的能力。微量元素对DPSC分化的影响是近年口腔组织工程的研究热点。微量元素具有广泛的生理生化功能,一方面可直接调控DPSC分化、迁移和增殖能力;另一方面可通过发挥抗菌及免疫调节作用以及改变支架材料的理化特性,间接影响DPSC分化。明确微量元素在DPSC分化中的作用可为实现牙髓及牙本质再生提供更多的参考依据,本文就近年国内外关于微量元素对DPSC成牙向和成血管向分化的作用及机制研究进行综述。
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编辑人员丨4天前
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腺苷三磷酸诱导人牙髓细胞成牙本质向分化的实验研究
编辑人员丨4天前
目的:通过筛选能成功诱导人牙髓细胞(human dental pulp cell,HDPC)向成牙本质细胞样细胞分化的腺苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)的有效浓度,探讨体内诱导HDPC进行牙本质再生的ATP适宜浓度。方法:用0(对照组)、10、400、600、800 μmol/L ATP处理HDPC后,采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)、实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和蛋白质印迹法分别检测HDPC增殖以及成牙本质分化相关基因和蛋白[牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP1)、牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)]的表达;用茜素红染色评估诱导21 d后矿化结节情况(各组样本量均为5),并溶解矿化结节后定量分析各组溶液吸光度值( A值)。筛选既能有效诱导HDPC成牙本质向分化,又能降低ATP对HDPC增殖抑制作用的浓度作为ATP的适宜浓度,并选用此浓度进行动物体内实验。HDPC经此浓度ATP预处理7 d后接种于明胶海绵上,并置入6~7 mm长、管径1.0~2.5 mm的人牙根管片段内(ATP处理组,样本量为8);非ATP处理组的明胶海绵接种未经ATP预处理的HDPC(样本量为8),空白对照组的明胶海绵未接种细胞(样本量为2)。各组根管片段移植于免疫缺陷鼠(9只)背部双侧皮下,3个月后取材进行HE染色和组织学观察。 结果:培养5 d时与对照组相比,10 μmol/L ATP组HDPC增殖显著增加( P<0.05),而600和800 μmol/L ATP组HDPC增殖显著减小( P<0.05),且800 μmol/L ATP组HDPC增殖显著小于600 μmol/L ATP组( P<0.05)。与对照组相比,600和800 μmol/L ATP组DMP1、DSPP的基因和蛋白表达均显著上调( P<0.05),且两组间差异无统计学意义( P>0.05),而其他各组DMP1、DSPP的基因和蛋白表达均无显著上调( P>0.05)。诱导21 d后600和800 μmol/L ATP组均可见明显的矿化结节,其他组均未见矿化结节;定量分析显示0、10、400、600、800 μmol/L ATP组 A值分别为1.05±0.15、1.11±0.23、1.15±0.17、3.65±0.30、3.40±0.43,600与800 μmol/L ATP组 A值均显著大于其他各组( P<0.05),且600与800 μmol/L ATP组间差异无统计学意义( P>0.05)。HE染色结果显示,600 μmol/L ATP可诱导HDPC在根管牙段内分化形成牙本质样结构。 结论:600 μmol/L为ATP诱导HDPC成牙本质向分化的适宜浓度,该浓度ATP可在免疫缺陷小鼠体内诱导HDPC形成牙本质样结构。
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编辑人员丨4天前
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转录因子激活蛋白2C对小鼠磨牙牙胚发育的影响
编辑人员丨4天前
目的:探究转录因子激活蛋白2家族的成员转录因子激活蛋白2C(TFAP2C)在小鼠磨牙牙胚发育过程中的表达及其影响。方法:实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)分析胚胎(E)14.5小鼠胚胎各器官及E12.5~E18.5和出生后0~7天的小鼠磨牙牙胚内Tfap2c的相对表达水平,冰冻切片免疫荧光染色显示Tfap2c在小鼠磨牙牙胚内的表达位置。采用牙胚体外培养的方法,探究敲降Tfap2c对小鼠磨牙牙胚发育的影响,RT-qPCR检测成牙本质细胞表达相关基因的相对表达水平。分离并提取小鼠牙胚间充质细胞进行培养,探究敲降Tfap2c对小鼠牙胚间充质细胞的影响,划痕愈合实验检测细胞迁移,细胞计数(CCK-8)法检测细胞增殖。结果:Tfap2c基因在小鼠磨牙牙胚发育早期相对表达水平较高。E13.5,Tfap2c在小鼠磨牙牙胚上皮组织与间充质组织内均有表达,二者的相对表达水平差异无统计学意义( t=1.06, P=0.472)。E14.5,Tfap2c在小鼠磨牙牙胚初级釉结附近的间充质组织内表达,小鼠磨牙牙胚间充质组织内Tfap2c的相对表达水平(1.000±0.036)显著高于上皮组织(0.199±0.008)( t=37.29, P<0.001)。体外培养小鼠磨牙牙胚并敲降Tfap2c后,小鼠磨牙牙胚牙尖相对高度(0.708±0.171)及牙尖高度与牙冠高度的比值(0.321±0.068)均显著低于对照组(分别为1.000±0.287和0.483±0.166)( t=2.79, P=0.012; t=2.85, P=0.015);对照组的牙冠相对高度(1.078±0.206)及相对宽度(1.000±0.116)与敲降组的差异均无统计学意义(分别为0.993±0.254和0.999±0.122)( t=0.83, P=0.419; t=0.01, P=0.992)。体外培养小鼠磨牙牙胚内敲降Tfap2c,成牙本质细胞表达相关基因Dspp和Dmp1相对表达水平均显著低于对照组( t=15.33, P<0.001; t=13.81, P<0.001)。在小鼠牙胚间充质细胞内敲降Tfap2c,划痕愈合实验显示,对照组细胞48 h划痕宽度显著小于敲降组( t=29.86, P=0.001);CCK-8法检测显示对照组与敲降组细胞间各时间点吸光度值的差异均无统计学意义( P>0.05);Tfap2c敲降组牙胚间充质细胞内成牙本质细胞表达相关基因Dspp和Dmp1相对表达水平均显著低于对照组( t=3.86, P=0.031; t=4.36, P=0.022)。 结论:Tfap2c在小鼠磨牙牙胚发育早期表达,主要表达于小鼠磨牙牙胚间充质组织内,敲降Tfap2c影响小鼠磨牙牙胚牙尖形成,影响牙胚间充质细胞迁移。
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编辑人员丨4天前
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细胞分裂周期蛋白42对牙根发育的影响及相关机制研究
编辑人员丨4天前
目的:探究细胞分裂周期蛋白42(cell division cycle 42,CDC42)对牙根发育的影响及其对上皮根鞘(Hertwig root sheath,HERS)细胞增殖与迁移的调控作用。方法:采用免疫荧光追踪CDC42在小鼠出生后5 d(postnatal day 5,P5;P3、P7、P14含义依此类推)、P7、P14磨牙牙根的表达情况。将9只8周龄C57BL/6J雄鼠按简单随机抽样法分为3组(每组3只),取P3 C57BL/6J乳鼠牙胚于气-液环境下培养1 d后植入小鼠肾被膜下观察牙根发育情况。对照组在小鼠肾被膜下仅植入牙胚,磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)组植入牙胚及吸附PBS的凝胶珠,ML141组植入牙胚及吸附CDC42抑制剂ML141的凝胶珠。通过慢病毒转染敲低HERS细胞中Cdc42表达,进行细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测、胸腺嘧啶核苷类似物(5-ethynyl-2′-deoxyuridine,EdU)检测以及划痕实验。对迁移的细胞进行高尔基体(GM130)和细胞骨架(F-actin)免疫荧光染色。通过CCK-8和EdU检测比较对照组和敲低组的细胞增殖活性,通过划痕实验比较对照组和敲低组的细胞迁移率。结果:CDC42在牙根发育中表达于HERS上皮、高度极化的成釉上皮和成牙本质细胞,以及临近的牙乳头和牙囊细胞中。肾被膜移植结果显示,ML141组牙根长度[(0.61±0.09)mm]显著短于对照组[(1.03±0.19)mm]( P=0.007)和PBS组[(0.98±0.10)mm]( P=0.021)。慢病毒转染后,敲低组Cdc42相对表达量(0.31±0.33)显著低于对照组(1.05±0.08)( t=15.38, P<0.001),敲低效率接近70%。转染后3、4、5 d,敲低组细胞活性(分别为0.87±0.04、0.96±0.10、0.59±0.06)均显著低于对照组(分别为1.09±0.13、1.55±0.32、1.10±0.09)( t=3.16, P=0.016; t=4.23, P=0.002; t=5.08, P<0.01),敲低组细胞增殖率[(1.65±0.64)%]显著低于对照组[(4.02±1.12)%]( t=5.21, P<0.001)。Cdc42敲低后,敲低组24和48 h细胞迁移率[分别为(45.1±4.2)%、(56.4±8.3)%]均显著低于对照组[分别为(63.8±7.4)%、(80.2±7.8)%]( t=3.78, P=0.019; t=3.62, P=0.023)。对照组中迁移细胞中高尔基体沿迁移方向定向分布,而在敲低组中高尔基体沿细胞核周围分布。 结论:CDC42在牙根发育中对牙根长度调节具有重要作用,其可能通过影响HERS细胞的迁移与增殖介导牙根伸长。
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编辑人员丨4天前
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miR-615-3p通过负调控FBLN1的表达抑制脂肪干细胞成骨分化
编辑人员丨3周前
目的:探讨miR-615-3p及其靶基因纤维蛋白 1(FBLN1)在脂肪干细胞(ADSCs)成骨分化中的作用及其相互调控机制.方法:利用慢病毒转染ADSCs分别敲低miR-615-3p及过表达FBLN1,Western blot和实时荧光定量PCR检测miR-615-3p敲低效率和FBLN1 过表达效率以及敲低miR-615-3p后FBLN1 的表达,通过碱性磷酸酶(ALP)活性、茜素红染色检测敲低miR-615-3p和过表达FBLN1 对ADSCs的成骨分化能力的影响,通过实时荧光定量PCR检测敲低miR-615-3p和过表达FBLN1 ADSCs成骨细胞特异性转录因子 Osterix(OSX)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、牙本质基质蛋白-1(DMP1)的基因表达,通过Western blot检测敲低miR-615-3p和过表达FBLN1 后ADSCs DMP1 和DSPP蛋白表达.结果:敲低ADSCs中miR-615-3p后,miR-615-3p基因表达降低,ALP活性升高(P<0.05),矿化结节增多,OSX、DMP1、DSPP 基因表达水平上升(P<0.05),DMP1、DSPP蛋白表达升高.低表达miR-615-3p的ADSCs中FBLN1 表达升高.过表达FBLN1 后,ADSCs中FBLN1 蛋白和基因表达升高,ALP活性升高(P<0.05),矿化结节增多,OSX、DMP1、DSPP基因表达水平上升(P<0.05),DMP1、DSPP 蛋白表达升高.结论:miR-615-3p通过下调FBLN1 抑制ADSCs的成骨分化.
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编辑人员丨3周前
