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肺癌转移相关蛋白1相互作用蛋白的筛选及验证
编辑人员丨2023/8/6
目的 筛选肺癌转移相关蛋白1 (lung cancer metastasis related protein 1,LCMR1)的相互作用蛋白并进行验证.方法 以人肺癌95D细胞RNA作为模板,构建95D细胞cDNA文库.将LCMR1质粒及人肺癌95D细胞cDNA文库共转化酵母菌AH109,初步筛选LCMR1相互作用蛋白.应用融合蛋白沉降技术和免疫共沉淀技术对酵母双杂交结果进行验证,确定蛋白质相互作用.结果 成功构建了人肺癌95D细胞的cDNA文库.应用酵母双杂交技术筛选出6种LCMR1相互作用蛋白,选取其中DEK原癌基因进行验证.使用融合蛋白沉降技术及免疫共沉淀技术证实,LCMR1蛋白与DEK蛋白在体外及细胞内均可以特异结合,特异结合发生在DEK蛋白N端功能区.结论 LCMR1与DEK为相互作用蛋白,DEK蛋白N端功能区与细胞凋亡密切相关,为LCMR1基因功能研究提供线索和相应分子基础.
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编辑人员丨2023/8/6
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酵母双杂交技术筛选人95D细胞中肺癌转移相关蛋白1相互作用蛋白及其验证
编辑人员丨2023/8/6
目的 通过酵母双杂交实验、免疫共沉淀及GST pull down技术筛选并验证肺癌细胞系95D细胞中与肺癌转移相关蛋白1 (lung cancer metastasis-related protein 1,LCMR1)相互作用蛋白,为进一步研究LCMR1在肺癌发生发展中的作用提供科学依据.方法 将诱饵质粒pGBKT7-LCMR转化AH109,应用酵母双杂交系统筛选出95D细胞中与LCMR1相互作用的候选克隆;应用反复划线法、X-α-Gal显色法和共转化回复验证法排除假阳性克隆,对真阳性克隆进行测序及生物学分析;构建含Myc标签的LCMR1融合蛋白的重组载体pCMV-Myc-LCMR1载体,以及带flag标签的目标相互作用蛋白载体,共转染细胞,利用免疫共沉淀技术验证LCMR1与相互作用蛋白之前的相互作用;融合蛋白沉降(GST pull-down)法进一步体外验证LCMR1与相互作用蛋白之间的作用.结果 诱饵质粒pGBKT7-LCMR1与95D细胞cDNA文库共转化AH109,初步获得20个候选克隆;重复划线法后获得16个阳性克隆,X-α-Gal显色法获得12个蓝色阳性克隆,进一步将文库质粒与诱饵质粒共转化酵母菌回复验证,最终获得6个真阳性克隆;成功构建含标签重组载pCMV-Myc-LCMR1、pcDNA3.0-flag-RPL29及pcDNA3.0-flag-GNG5载体,经免疫共沉淀验证LCMR1与RPL29在细胞内有相互作用,与GNG5在细胞内无相互作用;GST pull-down实验验证LCMR1与RPL29在体外有相互作用,与GNG5在细胞外无相互作用.结论 酵母双杂交技术筛选出95D细胞中相互作用蛋白6个,经免疫共沉淀和GST pull-down实验验证LCMR1与RPL29体内体外均有相互作用.
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编辑人员丨2023/8/6
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MED19(LCMR1)基因在肿瘤中的表达及生物学功能的研究进展
编辑人员丨2023/8/5
中介体复合物(mediator complex subunit,MED)是广泛存在于酵母和哺乳动物体内的一种高度保守的多蛋白体复合物,参与转录因子与RNA聚合酶Ⅱ(RNA polymerase Ⅱ,RNA pol-Ⅱ)间的信息传递过程.MED19作为人中介体复合物的亚基之一,与人生长发育,尤其是肿瘤发生发展密切相关.本文对人MED19基因的结构和生物学功能研究进展进行综述,为后续MED19研究提供依据与思路.
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编辑人员丨2023/8/5
