环状RNA(circRNA)是由前体mRNA反向剪接形成的具有封闭结构的环状分子，可充当微小RNA(miRNA)"海绵"，与蛋白质、RNA结合形成复合物，发挥调控宿主基因表达、蛋白翻译的功能，在生理学和病理生理学中具有重要意义。多种眼科疾病中均存在特异性circRNA的异常表达，其通过"海绵"作用调控靶基因表达可引起多种眼部细胞功能异常，导致新生血管形成、血管渗漏、炎症反应、视网膜神经退行性变、晶状体混浊、肿瘤生长等病理改变，在眼病的发生和发展中可能起重要作用。本文就近年来circRNA在眼科疾病中的表达特点及其在眼病病理过程中介导的基因调控网络进行综述，探讨circRNA作为眼科疾病生物标志物及新型治疗靶点的意义。

目的:观察沉默中介体复合物亚基19(Med19)基因对人前列腺癌PC3细胞裸鼠体内增殖、生长作用的影响，探讨其机制。方法:采用针对Med19的小干扰RNA(siRNA)慢病毒载体转染PC3细胞，3 d后，应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测Med19-siRNA转染组(siRNA)与对照组(scRNA)Med19基因和蛋白表达，噻唑蓝(MTT)实验评估肿瘤细胞增殖和生长能力，Western blot检测肿瘤细胞中p27、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)的表达。构建经慢病毒转染的PC3裸鼠模型，测量移植瘤的大小和增殖、凋亡指数。结果:Med19-siRNA慢病毒感染PC3细胞后，转染组Med19 mRNA[表达率为(16.88±3.40)%]和蛋白表达与对照组比较明显降低，差异有统计学意义( t＝9.089， P<0.01)；MTT实验表明转染组细胞增殖较对照组缓慢( t＝10.492， P<0.01)；在PC3-Med19-si细胞中，p-Akt和p-PI3K的表达降低，而p27的表达升高；转染组裸鼠移植瘤的重量和增殖指数均低于对照组，差异有统计学意义[(0.17±0.08) g比(0.39±0.19) g， t＝2.488， P<0.05；(18.30±6.55)%比(33.22±4.36)%， t＝3.792， P<0.01)。两组中的细胞凋亡指数差异无统计学意义( t＝0.184， P>0.05)。 结论:沉默Med19基因后，通过调节p27、p-Akt、p-PI3K的表达来抑制前列腺癌PC3的生长，导致前列腺癌在增殖、生长能力均受到显著抑制。

目的 探讨中介体复合物亚基8(MED8)在胃癌中的表达及其与预后的关系和对细胞周期的影响.方法 采用公共数据库分析MED8在胃癌及癌旁组织的表达及其与患者预后的关系,并纳入2012年6月至2017年7月于蚌埠医学院第一附属医院行胃癌根治术的104例患者进行验证.采用受试者工作特征曲线评估MED8对患者术后5年生存率的预测价值;采用生物信息学方法预测MED8在胃癌中的生物学功能;采用慢病毒转染调控胃癌细胞系(MGC-803)中MED8的水平,流式细胞学分析MED8表达水平对MGC-803细胞G1/S期转换的影响.免疫印迹实验检测MED8表达水平对MGC-803细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶4(Cdk4)和G1/S-特异性周期蛋白-D1(CyclinD1)蛋白表达的影响.结果 MED8在胃癌组织中高表达与患者不良预后相关(P＜0.001),且具有良好的预后预测价值(曲线下面积=0.733,P＜0.001);基因富集分析提示MED8可能参与细胞周期进程.流式细胞实验表明上调MED8表达可促进MGC-803细胞从G1期进入S期(P＜0.001),下调MED8则相反(P＜0.001).免疫印迹检测显示上调MED8的MGC-803细胞中Cdk4和CyclinD1蛋白水平均显著升高(P均＜0.001);下调MED8则相反(P均＜0.001).结论 MED8在胃癌中高表达且可能通过调控胃癌细胞周期G1/S期转换影响疾病进展及预后.

中介体复合物作为真核生物转录机器中的重要共激活子,起着连接RNA聚合酶Ⅱ和不同转录因子从而调节基因转录的作用.当植物遭遇各种非生物胁迫时,中介体复合物通过整合胁迫信号并激活或抑制靶基因的表达,进而帮助植物适应环境胁迫.本文总结了植物中介体复合物的发现,及其在干旱、盐、极端温度下的功能及调节机制,并探讨了中介体复合体的未来研究方向,有助于理解中介体复合物在非生物胁迫应答中的重要功能.

目的:CD4+ T细胞在免疫应答过程中的分化受到由众多分子组成的复杂而精细的信号通路的调控,且调控T-bet表达的分子机制并未阐明.中介体复合物亚基1(mediator complex subunit 1,Med1)与多种辅助因子结合调节基因转录,促进细胞存活和增殖,影响恒定自然杀伤T细胞(invariant natural killer T cell,iNKT)的发育.本研究旨在探讨Med1对T细胞发育及CD4+ T细胞在免疫应答中分化的影响.方法:构建T细胞特异性敲除Med1基因(KO)小鼠(Med1F/FCD4cre+)并对其进行验证.采用流式细胞术检测KO组和对照(Con)组(Med1F/FCD4cre-)小鼠胸腺、脾和淋巴结中CD4+和CD8+ T细胞的百分比及数目;用淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(lymphocytic choriomeningitis virus,LCMV)感染小鼠 8 d后,检测小鼠脾中CD4+ T细胞及抗原特异性(GP66+)CD4+ T细胞的百分比及数目、Th1 细胞(Ly6c+PSGL1+)占CD4+ T细胞及抗原特异性CD4+ T细胞的百分比及数目、CD4+ T细胞及抗原特异性CD4+ T细胞中T-bet的荧光强度.结果:KO组与Con组小鼠胸腺中CD4+和CD8+ T细胞的百分比及数目、脾和淋巴结中CD4+ T细胞的百分比及数目差异均无统计学意义(均P>0.05),但KO组脾和淋巴结中CD8+ T细胞的百分比及数目较Con组均显著降低(均P<0.05).感染LCMV后,KO组与Con组小鼠脾中CD4+ T细胞及抗原特异性CD4+ T细胞的百分比及数目差异均无统计学意义(均P>0.05),但KO组Th1细胞占CD4+ T细胞及抗原特异性CD4+ T细胞的百分比及数目、CD4+ T细胞及抗原特异性CD4+ T细胞中T-bet的表达较Con组均显著降低(均P<0.05).结论:T细胞中特异性敲除Med1基因不影响胸腺中CD4+和CD8+ T细胞的发育,但是影响外周CD8+ T细胞的维持.在免疫应答中Med1基因缺失影响转录因子T-bet的表达,最终导致CD4+ T细胞向Th1细胞分化减少.

目的:采用分子模拟技术从宽体金线蛭来源多肽库中筛选抗凝活性多肽,结合分子对接初筛及分子动力学模拟复筛,最终通过抗凝实验验证得到宽体金线蛭抗凝活性多肽.方法:利用虚拟酶切技术对宽体金线蛭蛋白库进行酶切,得到宽体金线蛭多肽候选库;选择凝血酶为凝血活性靶点,采用HPEPDOCK及Discovery Studio CDOCKER两种方法进行分子对接,并利用分子动力学模拟技术对分子对接初筛结果中对接结合能高的复合物进行动力学模拟复筛,通过MM-PBSA模块分析计算凝血酶-多肽复合物结合自由能;最后采用固相合成法化学合成复筛中稳定结合的宽体金线蛭多肽并进行体外抗凝活性测定.结果:经过虚拟酶切共得到 3317 条无毒多肽,通过分子对接进行初筛,结合分子动力学模拟复筛,得到 1 条结合凝血酶效果最好的目标抗凝肽,该多肽序列为QNTVGLDDFFSSYER,结合自由能为-427.506 kJ·mol-1.凝血酶Arg233 残基是该凝血酶-多肽复合物中介导结合相互作用的关键氨基酸.该宽体金线蛭抗凝肽在体外活性测定中确能延长凝血酶时间.结论:利用分子模拟技术有效筛选出 1 条宽体金线蛭抗凝活性肽,并经过抗凝实验验证,表明"模拟+实验"的活性肽筛选策略切实可行,该研究思路可为动物类中药物质基础研究提供参考.

目的:研究MED12高频突变体对细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡及周期的影响,探究MED12突变对于体外细胞功能的作用.方法:外源性转染MED12重组野生型和突变质粒至HEK293T细胞.Western blot法检测MED12蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞迁移和侵袭,流式细胞法检测细胞凋亡水平.结果:CCK-8法检测发现,与野生型MED12比较,突变型(G44D)能提高HEK293T细胞的增殖能力,差异有统计学意义(P<0.01),但迁移、侵袭能力、凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:MED12突变体通过提高细胞增殖,进而促进子宫肌瘤的发病.

由多亚基组成的中介体复合物(Mediator complex)是真核生物转录调控中不可或缺的纽带,它的核心功能就是将基因特异的转录因子和基于RNA聚合酶II的转录机器相连接,形成转录预起始复合物(Pre-initiation complex,PIC),从而实现特定转录信号的传递.Mediator 25(MED25)是植物中介体复合物的一个多功能亚基,参与调控植物生长发育和抗逆境胁迫等多种复杂的生理过程.MED25可以和多种转录激活子(如MYCs、AP2/ERFs及ARFs等)、转录抑制子(如JAZs和Aux/IAAs等)以及其它中介体亚基(如MED13和MEDl6等)在蛋白水平上直接互作,调控植物激素茉莉酸(JA)、脱落酸(ABA)、生长素(Auxin)和乙烯(Ethvlene)等信号途径以响应各种生物和非生物胁迫.近年来对MED25的靶标分离及功能鉴定已经成为一个热点话题.本文系统介绍了MED25在各激素信号途径转导中的调控作用机制,对深入讨论植物如何启动特定激素信号途径进而调控特定生理过程的分子机制提供新的研究思路.

在真核生物中基因的转录受到严格而精确的调控,转录中介体复合物(Mediator Com-plex)能够直接与转录机器相互作用,调控转录的起始、延伸及终止等过程.此外,组蛋白修饰、染色质三维结构的改变对转录的调控也至关重要,转录调控的紊乱往往会导致发育异常以及疾病的发生.该文主要论述Mediator复合物在转录与表观遗传学调控(包括染色质高级结构动态变化)中的分子机制及功能作用.

目的 观察中介体复合物亚基19(Med 19)基因沉默对人前列腺癌LNCaP细胞增殖、生长作用的影响,探讨其机制.方法 采用针对Med 19的小干扰RNA(siRNA)慢病毒载体转染LNCaP细胞,应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测Med 19-siRNA转染组(siRNA)与对照组(scRNA) Med 19基因和蛋白表达情况,噻唑蓝(MTT)实验、软琼脂实验评估肿瘤细胞增殖和生长能力,流式细胞仪分析细胞周期的变化.计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示.组间比较采用双侧t检验.结果 Med 19-siRNA慢病毒感染LNCaP细胞后,转染组Med19 mRNA和蛋白表达与对照组比较明显降低,差异有统计学意义(t=-69.141,P＜0.01);MTT实验表明转染组细胞增殖较对照组缓慢(t=-11.948,P＜0.01);软琼脂实验中转染组集落数量为(8.61±0.51)个,较对照组[(18.89±0.82)个]显著减少,差异有统计学意义(t=-98.775,P＜0.01);转染组G0/G1期细胞比例为(67.29±1.70)％,与对照组[(56.23±1.46)％]比较差异有统计学意义(t=-21.906,P＜0.01).结论 沉默Med 19基因后,促使人前列腺癌LNCaP细胞停留在G0/G1期增多,导致前列腺癌在增殖、生长能力均受到显著抑制.