目的:探讨前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9（proprotein convertase subtilisin/kexin type 9，PCSK9）对足细胞脂质稳态和细胞损伤的影响及其作用机制。方法:选取12周龄C57BL/6野生型小鼠（对照组， n=10）和系统性敲除 PCSK9基因型小鼠（ PCSK9 KO组， n=10）为动物模型，经心脏全身灌注后取肾组织。体外培养小鼠足细胞，用干扰小RNA（siRNA）敲低足细胞 PCSK9的表达。用荧光染料BODIPY 493/503染色法观察小鼠肾组织肾小球及体外培养足细胞内的脂质蓄积程度；透射电子显微镜观察足细胞的足突、线粒体结构和脂滴大小及其分布；TUNEL染色法评估肾小球内的细胞凋亡；实时荧光定量PCR（qPCR）和Western印迹法检测线粒体功能相关关键酶过氧化物酶体增殖物激活受体C辅激活因子1α（peroxisome proliferator-activated receptor-C coactivator 1α，PGC-1α）、肉毒碱棕榈酰转移酶1（carnitine palmitoyltransferase 1，CPT-1）、乙酰辅酶A氧化酶1（acetyl CoA oxidase 1，Acox-1），以及凋亡相关指标的mRNA和蛋白表达水平。 结果:与对照组相比， PCSK9 KO组小鼠肾小球内脂质蓄积更显著；肾组织内线粒体功能相关关键酶PGC-1α蛋白和mRNA相对表达量均显著降低，CPT-1和Acox-1的mRNA相对表达量也均显著降低（均 P<0.05）；肾小球足细胞内线粒体肿胀、嵴消失，足细胞的足突部分融合、消失；肾小球内细胞凋亡指数增加（ P<0.05）。与对照组比较，体外培养的 PCSK9 siRNA组足细胞内脂质蓄积显著，线粒体功能相关关键酶PGC-1α、CPT-1和Acox-1的mRNA相对表达量下降，线粒体结构受损，细胞凋亡指数增加（均 P<0.05）。 结论:PCSK9参与足细胞的脂代谢平衡，PCSK9表达减少增加足细胞内脂质沉积，诱导线粒体结构及功能受损，导致细胞凋亡。

目的:探讨蛋白质N-α-乙酰转移酶基因10(NAA10)作为乳腺癌治疗靶点的可能性。方法:通过METABRIC数据库分析33个乙酰转移酶基因与乳腺癌预后的关系，并分析NAA10基因表达与乳腺癌临床病理参数之间的关系；反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)实验检测NAA10基因mRNA和蛋白水平表达，应用NAA10小干扰RNA(siRNA)处理NAA10高表达的乳腺癌细胞株，选取乳腺癌国际联盟分子分类(METABRIC)数据库1974例乳腺癌患者，其中腺腔A型(Luminal A)718例，腺腔B型(Luminal B)占488例，人表皮生长因子受体2(Her-2)过表达型占240例，基底样型(Basal-like)占329例，正常乳腺样型(Normal-like)199例。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆形成实验检测NAA10基因沉默后对乳腺癌细胞增殖的影响。计数资料比较采用 t检验、 χ2检验，相关性检验采用Spearman等级相关分析，。 结果:NAA10的mRNA表达与乳腺癌的无病生存率(DFS)及总生存率(OS)差异有统计学意义( P<0.05)，其相对风险比分别为1.31(1.14～1.51)，1.13(1.01～1.25)；NAA10基因的表达与乳腺癌组织学分级、淋巴结状态、诺丁汉指数(NPI)明显正相关( P<0.01)；NAA10的mRNA和蛋白水平在Basal-like型乳腺癌表达最高；与对照组比较，NAA10基因沉默可以抑制乳腺癌细胞增殖50%左右( P<0.05)，差异有统计学意义。 结论:NAA10基因与乳腺癌细胞增殖密切相关且其表达水平与乳腺癌预后关系密切。

目的 探究N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V(N-acetylglucosamine transferase V,GnT-V)介导糖尿病小鼠心肌损伤的作用及其机制.方法 6～8周龄雄性C57BL/6小鼠30只,随机分为正常对照组(Ctrl组)、糖尿病组(DM组)和糖尿病+干扰GnT-V基因的腺相关病毒组(DM+shGnT-V组),每组10只.采用超声心动图检测各组小鼠心功能及左室质量,HE染色观察各组小鼠心肌组织病理变化,实时定量PCR检测心肌组织中心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)和B型钠尿肽(B-type natriuretic peptide,BNP)的表达,免疫印迹方法检测心肌组织中GnT-V、转化生长因子-β激活激酶1(transforming growth factor-β-activated kinase 1,TAK1)蛋白表达.体外培养原代心肌细胞,分为正常葡萄糖组(NG组)、高糖组(HG组)、高糖+干扰GnT-V基因的腺病毒组(HG+Ad-shGnT-V组)和高糖+干扰GnT-V基因的腺病毒+过表达TAK1基因的腺病毒组(HG+Ad-shGnT-V+Ad-TAK1组).免疫印迹方法检测原代心肌细胞中GnT-V、TAK1蛋白表达,免疫荧光检测α-辅肌动蛋白(α-actinin)表达水平.结果 与Ctrl组相比,DM组小鼠心脏收缩功能显著下降(P＜0.001),左室质量明显增加(P＜0.001),心肌细胞肥大(P＜0.001),GnT-V和TAK1表达水平明显升高及ANP和BNP在mRNA水平表达显著增加(P＜0.01).与DM组相比,DM+shGnT-V组小鼠心脏功能明显改善(P＜0.01),左室质量明显降低(P＜0.01),心肌肥大症状明显减轻(P＜0.001),GnT-V、TAK1、ANP及BNP表达明显减少(P＜0.05).与NG组相比,HG组原代心肌细胞α-actinin免疫荧光强度增强,GnT-V和TAK1的表达显著增加(P＜0.05);与HG组相比,HG+Ad-shGnT-V组GnT-V、TAK的表达显著减少(P＜0.05),α-actinin免疫荧光强度减弱;与HG+Ad-shGnT-V组相比,HG+Ad-shGnT-V+Ad-TAK1组GnT-V表达未见明显变化,TAK1的表达明显增加(P＜0.05),心肌细胞α-actinin免疫荧光强度增强.结论 GnT-V可能通过激活TAK1调控糖尿病小鼠的心肌损伤.

N-末端α位乙酰基转移酶基因10(Naa10)广泛存在于真核生物细胞中,其编码的Naa10p是NatA复合物的催化亚基.Naa10p修饰新生蛋白质N末α位氨基酸残基乙酰化,进而通过介导mTOR、Ca2+/MLCK、DNMT1、PGK1、PIX-蛋白等信号通路调控蛋白降解、细胞凋亡、增殖、迁移、浸润、血管生成等生物学过程.根据乙酰化底物的不同,Naa10p还在细胞凋亡的调控中起双重作用.研究发现Naa10p在肝癌、结直肠癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌等多种癌组织中过表达,而在癌旁组织中不表达或低表达,因肿瘤差异其预后意义不同.因此,Naa10可作为部分肿瘤诊断和预后的新型潜在生物标志物及治疗靶点.

近年的细菌耐药性监测结果发现，肺炎克雷伯菌对庆大霉素等氨基糖甙类抗生素的耐药率已达40%左右。耐药的主要机制为细菌产生N-乙酰转移酶AAC（3）-V，使其抗菌活性不能发挥。不同菌株产生的钝化酶及其编码基因有一定的差异。作者从华山医院分离的肺炎克雷伯菌耐药株，用PCR方法从该菌株的一分子量约85×10 3的接合型质粒上扩增出全长基因，连接pUC18，从转化子中筛选出编码乙酰转移酶AAC（3）-V的克隆。经限制性内切酶和DNA序列分析，并与来自粘质沙雷菌的基因比较，其核苷酸序列约有95%的同源性，20个氨基酸发生替换。大部分氨基酸的变异发生在C末端。该基因连接表达载体pLY4，转入大肠杆菌DH5α和JF1125，后两者对庆大霉素的抗性均获得大幅度提高。

目的:基于N-α-乙酰基转移酶D(NATD)/叉头框蛋白A2(FOXA2)信号通路探讨其对乳腺癌转移的作用机制.方法:对不同转移能力的乳腺癌细胞系(人细胞系MDA-MB-231及其对肺转移衍生物LM2、MCF10CA1h及其转移性等基因系MCF10CA1a)进行了质谱组学分析.构建NATD过表达和敲减的MDA-MB-231和LM2细胞模型,并通过尾静脉注射到小鼠体内.在不同时点使用生物发光成像测量了肺转移负担.通过高通量反相蛋白质阵列和RNA免疫沉淀测序(RIP-Seq)分析鉴定NATD靶标.对于救援实验,MDA-MB-231细胞与FOXA2和NATD过表达质粒体共转染48 h.通过Transwell测定评估细胞侵袭和迁移.分别进行免疫荧光或Western blot测定NATD和上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白表达.结果:质谱组学分析确定NATD是受调控的蛋白质之一,并且Western blot证实了NATD蛋白在LM2和MCF10CA1a转移癌细胞中的表达高于MDA-MB-231和MCF10CA1h亲本癌细胞.NATD过表达MDA-MB-231细胞显著加剧了小鼠肺转移负担并缩短了动物的存活期;相比之下,NATD敲减LM2细胞减少了小鼠的肺定植并延长了无转移生存期.通过高通量反相蛋白质阵列和RIP-Seq分析鉴定FOXA2作为NATD靶标.在NATD过表达的MDA-MB-231细胞中,FOXA2表达明显降低.NATD过表达介导的对MDA-MB-231细胞侵袭和迁移的促进作用被FOXA2过表达逆转.此外,免疫荧光和Western blot分析显示,NATD过表达介导MDA-MB-231细胞的EMT过程,而FOXA2过表达逆转了NATD对EMT过程的诱导作用.结论:NATD通过控制FOXA2介导的EMT来促进乳腺癌转移.因此,靶向NATD/FOXA2轴可能是治疗乳腺癌的新策略.

目的 探讨醋酸阿比特龙联合多西他赛与泼尼松在转移性去势抵抗性前列腺癌(mCRPC)患者中的应用及N-末端α位乙酰基转移酶基因10(acetyltransferase gene 10,Naa10)与治疗敏感性的关系.方法 回顾性选择2017年10月-2019年12月邢台医学高等专科学校第二附属医院收治的122例mCRPC患者为研究对象,入选患者均经过雄激素剥夺治疗.根据治疗方案不同将患者分为对照组和试验组,对照组患者静脉滴注多西他赛注射液,剂量75mg·m-2,每3周1次;口服醋酸泼尼松片,1次1片,每天2次;在注射多西他赛注射液化疗前1天、当天和后1天均口服醋酸地塞米松片,1日2次,总剂量7.5 mg.试验组患者在对照组的基础上空腹口服醋酸阿比特龙片,每次1g,每日1次,治疗4个周期(12周).比较两组患者近期临床疗效、不良反应及远期生存率等情况,随访3年,计算患者的中位生存期.免疫组化法检测mCRPC癌组织中Naa10蛋白表达,将患者分成Naa10阳性表达组和阴性表达组,分析其临床病理参数,单因素和Cox回归分析确定影响mCRPC预后的因素,分析Naa10蛋白阳性表达与治疗敏感性的关系.结果 治疗4个周期后,试验组患者9例完全缓解、40例部分缓解、8例疾病稳定及4例疾病进展,治疗总有效率为80.33％;对照组患者2例完全缓解、34例部分缓解、20例疾病稳定及5例疾病进展,治疗总有效率为59.02％,两组间比较差异显著(x2=6.556,P=0.011).试验组和对照组患者均出现骨髓抑制(x2=0.209,P=0.648)、肝功能损伤(x2=0.830,P=0.362)、胃肠道反应(x2=0.370,P=0.543)、水钠潴留(x2=0.209,P=0.648)及心脏毒性(x2=0.899,P=0.343)等3级以上不良反应,但两组间差异未见显著性.mCRPC癌组织中Naa10蛋白阳性表达与治疗周期(x2=9.106,P=0.003)、淋巴结转移(x2=5.055,P=0.025)、T分期(x2=4.391,P=0.036)、骨转移病灶数(x2=19.863,P=0.000)、内脏转移(x2=5.009,P=0.025)等具有显著相关性,但与年龄(x2=3.059,P=0.080)、化疗方案(x2=0.880,P=0.348)、EOCG评分(x2=3.453,P=0.178)、民族(x2=0.135,P=0.713)及Gleason评分(x2=0.837,P=0.360)等没有显著相关性.单因素分析结果显示,mCRPC患者中位生存期与EOCG评分(x2=7.464,P=0.006)、淋巴结转移(x2=6.114,P=0.013)、化疗方案(x2=7.049,P=0.030)、治疗周期(x2=5.051,P=0.038)、T分期(x2=1.196,PP=0.035)、骨转移病灶数(x2=9.611,P=0.008)、内脏转移(x2=1.085,P=0.048)及Naal0蛋白阳性表达(x2=15.600,P=0.000)等指标具有显著相关性.Cox回归分析结果显示,骨转移病灶数(＞10个)(OR=2.404,95％CI:1.424～4.056)、治疗周期(＞8个疗程)(OR=0.458,95％CI:0.253～0.832)、化疗方案(试验组)(OR=0.360,95％CI:0.160～0.801)和Naa10蛋白阳性表达(OR=2.563,95％CI:2.106～3.117)是mCRPC患者预后生存的独立影响因素(P＜0.05).结论 醋酸阿比特龙联合多西他赛与泼尼松应用于mCRPC治疗,可有效提高近期临床疗效,延长生存期,且不增加不良反应,同时Naa10蛋白高表达是mCRPC患者预后不良的危险因素,临床宜监测指标,及时调整和评估临床治疗效果.