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淋病奈瑟菌NGO2105蛋白660 ~ 1 468肽段的表达纯化及多克隆抗体的制备与鉴定
编辑人员丨6天前
目的:原核表达淋病奈瑟菌NGO2105蛋白的660 ~ 1 468肽段，制备并鉴定其多克隆抗体。方法:将pCold TF-NGO2105 660-1468 aa重组质粒转化至 E.coli BL21（DE3）菌中进行蛋白表达。包涵体蛋白经变性复性处理后纯化目的蛋白。目的蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗血清；采用ELISA法检测抗体效价，Western印迹分析抗体对淋病奈瑟菌中NGO2105蛋白的特异性，流式细胞仪分析抗血清与淋病奈瑟菌的亲和力，黏附抑制实验评估抗NGO2105 660-1468 aa抗体对淋病奈瑟菌对人宫颈上皮细胞ME-180细胞黏附作用的抑制能力。不同处理组间比较采用 t检验。 结果:NGO2105 660-1468 aa蛋白以包涵体的形式呈现，通过变复性和纯化后得到了可溶性NGO2105 660-1468 aa蛋白，以该蛋白免疫小鼠后抗血清的效价为5.12 × 10 6，流式细胞仪分析结果显示，该抗体能较好与淋病奈瑟菌的NGO2105 660-1468 aa片段结合。黏附抑制实验结果提示，相比未处理组的黏附率（100%），抗NGO2105 660-1468 aa抗体在20和40倍稀释时均能显著抑制淋病奈瑟菌的黏附作用（黏附率= 52.9%、79.2%； t = 8.40、5.29； P < 0.001、= 0.006），呈现一定的浓度梯度依赖。 结论:成功表达及纯化出NGO2105 660-1468 aa肽段蛋白，制备出高效价的多克隆抗体，该抗体与淋病奈瑟菌有较好的亲和力且有黏附抑制能力。
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编辑人员丨6天前
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淋病奈瑟菌NGO2105蛋白Passenger结构域的克隆表达、多克隆抗体制备及定位分析
编辑人员丨2023/8/6
目的 拟原核表达淋病奈瑟菌NGO2105蛋白的Passenger结构域并制备多克隆抗血清,初步分析其保守性及亚细胞定位.方法 PCR扩增Passenger结构域编码基因并克隆入pCold TF原核表达质粒中,重组质粒转化大肠杆菌E.coil DH5α,通过PCR和测序鉴定后,再将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)菌中诱导表达目的蛋白,纯化目的蛋白后免疫BALB/c小鼠以制备多克隆抗体.Western blot分析NGO2105蛋白在临床分离菌株中的保守性.采用流式细胞技术分析淋病奈瑟菌中NGO2105蛋白Passenger结构域细胞定位.结果 成功表达出可溶形式的NGO2105蛋白Passenger结构域,重组蛋白免疫小鼠后可获得效价达到5.12×105的多克隆抗血清,Western blot分析显示Passenger抗血清能与不同临床分离菌株中的NGO2105蛋白特异性反应,流式细胞技术分析显示Passenger结构域定位于淋病奈瑟菌菌体表面.结论 成功获得可溶形式表达的Passenger蛋白及其多克隆抗体,NGO2105蛋白在临床分离的淋病奈瑟茵中有较好的保守性.亚细胞定位分析提示NGO2105蛋白为一种膜蛋白,其Passenger结构域定位于菌体表面,本研究可为进一步研究淋病奈瑟菌NGO2105蛋白的结构与功能奠定实验基础.
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编辑人员丨2023/8/6
