目的:观察黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,AST Ⅳ)对阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)模型小鼠认知功能障碍和病理改变的影响,并探讨可能的调控机制.方法:将APP/PS1转基因(APPswe/PSEN1dE9)小鼠随机分为AD+AST Ⅳ组和AD组,并以C57BL/6野生型(wild-type,WT)小鼠作为对照组(WT组),灌胃治疗两个月(n= 8).应用Morris水迷宫和Y迷宫实验评价小鼠空间认知功能(n=8),尼氏染色检测神经元数量与形态,免疫荧光染色观察神经元核抗原(neuronal nuclear antigen,NeuN)和β-淀粉样蛋白(amyloid β-protein,Aβ)水平(n=4),Western blot法检测全脑组织中神经突生长抑制因子A(neurite outgrowth inhibitor A,NogoA)、Nogo-66受体(Nogo-66 recep-tor,NgR)、p75神经营养因子受体(p75 neurotrophin receptor,p75NTR)、含富亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域蛋白1(leucine rich repeat and immunoglobin-like domain-containing protein-1,LINGO-1)、环磷酸腺苷(cyclic ade-nosine monophosphate,cAMP)和蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)的表达(n=4).结果:AST Ⅳ能够显著缓解APP/PS1小鼠的认知功能障碍,提高其学习、记忆和探索功能.与WT组相比,APP/PS1小鼠大脑皮质区和海马区Aβ沉积增加(P<0.01),尼氏小体丢失严重(P<0.05或P<0.01),神经元数量减少(P<0.05);而AST Ⅳ可以显著减少Aβ沉积(P<0.05),减少尼氏小体丢失(P<0.05),增加神经元数量(P<0.05).与WT组相比,APP/PS1小鼠脑组织NogoA、NgR、p75NTR和LINGO-1表达显著增加(P<0.05或P<0.01),cAMP和PKA表达显著减少(P<0.05或P<0.01);而AST Ⅳ可以显著抑制NogoA、NgR、p75NTR和LINGO-1表达(P<0.05或P<0.01),增加cAMP和PKA表达(P<0.05).结论:AST Ⅳ通过抑制NogoA及NgR/p75NTR/LINGO-1受体复合物的表达,并上调cAMP/PKA通路,减少APP/PS1小鼠脑组织中Aβ沉积,减轻神经元损伤,从而改善认知功能和缓解学习障碍.

目的 通过磷酸化蛋白质组学检测经典致幻剂诱导甩头反应的相关磷酸化蛋白,探讨经典致幻剂诱导甩头反应的分子机制以及潜在治疗靶点.方法 定量磷酸化蛋白质组学检测经典致幻剂作用下大鼠大脑皮质中的蛋白磷酸化变化,生物信息学和文献查阅分析经典致幻剂特异性诱导的磷酸化蛋白.通过使用目标蛋白的工具药物干预经典致幻剂诱导的甩头反应来初步筛选并验证关键蛋白在甩头反应中的功能.结果 磷酸化蛋白质组学发现甩头反应10 min时大鼠大脑皮质中大量蛋白发生磷酸化变化.蛋白筛选得到Nogo-A和RhoA蛋白参与经典致幻剂作用机制,甩头实验进一步验证Nogo-A/NgR/RhoA/ROCK信号通路参与经典致幻剂诱导的甩头行为.结论 蛋白质磷酸化修饰参与经典致幻剂诱导的甩头反应.Nogo-A/NgR/RhoA/ROCK信号通路参与经典致幻剂诱导的甩头反应.

目的 观察补肾益髓方( Bushen Yisui formula,BSYSF)及其拆方补肾方( Bushen formula,BSF)和化痰活血方( Huatan Huoxue formula,HTHXF)对实验性自身免疫性脑脊髓炎( experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠轴突再生抑制信号通路NogoA/NgR/RhoA/ROCK的调控作用.方法 将雌性C57BL/6 小鼠采用数字表法随机分为正常对照组( normal control, NC)、模型组(model,MO)、醋酸泼尼松组( prednisone acetate, PA,6 mg/kg)、梓醇组( catapol,CA,40 mg/kg)、BSYSF 组(生药3.02 g /kg)、BSF组(生药1.44 g /kg)、HTHXF 组(生药1.57 g /kg),每组16 只.用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55 ( myelin oligodendrocyte glycoprotein35-55 ,MOG35-55 )免疫小鼠制备EAE模型. NC和MO组小鼠灌服蒸馏水,各治疗组予相应药物灌胃,每日1次,共40 d.免疫第25天和40天,分别取小鼠脑和脊髓.应用实时荧光定量-PCR(quantitative real time-PCR,qRT-PCR)检测NogoA、NgR、RhoA和ROCKⅡmRNA表达;免疫组织化学( immunohistochemistry,IHC)和蛋白质印迹( Western blotting, WB)法测定上述指标蛋白的表达.结果 MO组小鼠脑和脊髓NogoA、NgR、RhoA和 ROCKⅡmRNA和蛋白表达较NC组明显上调( P<0.05,P<0.01,P<0.001).经BSYSF及其拆方BSF和HTHXF治疗后,NogoA、NgR、RhoA和ROCKⅡmRNA和蛋白的表达均有不同程度的降低,BSYSF组的上述指标差异有统计学意义(P <0.05,P <0.01,P <0.001).结论 BSYSF 及其拆方 BSF 和HTHXF均具有调节EAE小鼠轴突抑制因子NogoA/NgR及其信号通路RhoA/ROCK作用,并且BSYSF作用明显.上述结果为阐释BSYSF促进轴突再生的作用机制提供了实验依据.

目的:观察成对关联刺激对缺血性脑卒中大鼠缺血半暗带区NogoA、NgR、RhoA蛋白表达的影响.方法:90只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和PAS组,每组又分为7d、14d、28d三个亚组(n=10).模型组和PAS组大鼠采用Longa线栓法制作MCAO模型,假手术组除不插入线栓外,其余操作与模型组和PAS组相同.PAS组于术后第1d开始给予0.05Hz、共90对脉冲的PAS治疗,每日1次,每次持续30min;模型组和假手术组不予任何干预措施,各时间点治疗结束后取缺血半暗带区脑组织,Western Blot和免疫荧光检测缺血半暗带NogoA、NgR、RhoA蛋白的表达和分布情况.结果:术后第7、14、28d,假手术组NogoA、NgR、RhoA蛋白的表达水平均最低,模型组在各时间点NogoA、NgR、RhoA含量均较假手术组明显升高(P＜0.05),PAS组术后各时间点NogoA、NgR、RhoA的含量高于假手术组(P＜0.05),低于同时间点模型组(P＜0.05),PAS组NogoA、NgR、RhoA蛋白在术后28d的含量低于同组第7d、14d(P＜0.05).结论:PAS可抑制NogoA/NgR/RhoA信号通路蛋白的表达,可能是PAS促进脑缺血大鼠神经再生,改善脑缺血大鼠的感觉运动功能障碍的内在分子机制之一.

目的 探讨法舒地尔(Fasudil)对H2O2诱导的SY5Y人神经母细胞瘤细胞凋亡和突触可塑性的影响及其机制.方法 细胞分为PBS对照组、250 μmol/L H2O2处理组和250 μmol/L H2O2联合15 μg/mL Fasudil处理组.噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡,免疫荧光细胞化学染色检测神经突生长抑制因子A(NogoA)、NogoA受体(NgR)和突触小泡蛋白(Syn)的表达,Western blot法检测NogoA、NgR、p75神经营养因子受体(p75NTR)和含富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白结构域的Nogo相互作用蛋白1(LINGO-1)、Syn和突触后致密区蛋白95(PSD-95)的表达.结果 与PBS组比较,H2O2组细胞活性降低,细胞凋亡率升高,Fasudil处理可显著提高细胞活性,降低细胞凋亡率.与H2O2模型组比较,Fasudil处理能使Syn和PSD-95的表达增加.与PBS组比较,H2O2组NogoA及其受体复合物NgR/p75NTR/LINGO-1的表达明显增加,而Fasudil处理可以抑制NogoA及其受体复合物NgR/p75NTR/LINGO-1的表达.结论 Fasudil可能通过抑制NogoA/NgR信号通路的激活,从而减轻H2O2诱导的SH-SY5Y细胞凋亡以及增强突触的可塑性.

目的 基于Nogo-A/RhoA/ROCK信号通路探讨雷公藤甲素减轻氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的机制.方法 CCK8法检测不同浓度雷公藤甲素对正常SH-SY5Y细胞活性的影响以筛选最佳的药物作用浓度;然后将SH-SY5Y细胞分为4组:正常对照组、模型组、雷公藤甲素(1 nmol/L)干预组、Rho激酶抑制剂法舒地尔(15μg/mL)干预组.CCK8法检测SH-SY5Y细胞活性;JC-1试剂盒评估线粒体膜电位;免疫荧光染色检测NogoA、ROCK2和GAP43的表达;Western blot法检测GAP43、PSD95、NogoA、NgR、RhoA和ROCK2的表达.结果 CCK8结果显示,雷公藤甲素的最适作用浓度为1 nmol/L.与正常对照组比较,模型组细胞活性降低(P<0.001);线粒体膜电位下调(P<0.001);GAP43和PSD95表达降低(P<0.001);同时NogoA、NgR、RhoA和ROCK2表达增加(P<0.001);雷公藤甲素干预和法舒地尔干预均可以改善OGD/R诱导的细胞损伤,使细胞活性增加(P<0.001),线粒体膜电位上升(P<0.001);上调GAP43和PSD95表达(P<0.05);同时下调NogoA、NgR、RhoA和ROCK2的表达(P<0.001).结论 雷公藤甲素可以通过抑制NogoA/RhoA/ROCK信号通路减轻OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞损伤.