目的:采用生物信息学方法分析结核分枝杆菌的Rv1528c基因及其编码的PapA4蛋白结构和功能,以期为结核分枝杆菌潜伏感染的治疗及预防提供研究思路.方法:从NCBI网站获取Rv1528c基因及PapA4蛋白的基本信息;使用Protparam、ProtScale和ProtCompB预测PapA4蛋白的理化性质、亲疏水性和亚细胞定位;使用SignalPServerv.4.0、TMHMMServerv.2.0、NetNGlyc1.0server和NetPhosServerv.3.1预测PapA4蛋白的信号肽、跨膜结构、糖基化及磷酸化位点;使用SOPMA预测PapA4蛋白的二级结构;使用SWISS MODEL获取PapA4蛋白的三级结构模型;使用ABCpred和SYFPEITHI预测PapA4蛋白的抗原表位;使用MEGA软件构建系统发育树;使用STRING数据库查找PapA4的相关蛋白并进行GO分析推测其功能;使用HDOCK进行蛋白-蛋白对接;使用ChemDraw完成小分子设计并通过AutoDock软件完成分子对接.结果:Rv1528c基因全长498 bp,编码的PapA4蛋白氨基酸数为165,分子式为 C785H1252N244O234S7,等电点(pI)为8.84,平均亲水性系数为-0.208,预测其为亲水性蛋白,亚细胞可能定位于细胞膜.PapA4蛋白无跨膜结构、信号肽和糖基化位点,有15个磷酸化位点;二级结构包含45.45%的α-螺旋(Hh)、12.73%的β-折叠(Ee)、9.70%的β-转角(Tt)、32.12%无规则卷曲(Cc).PapA4蛋白含有13个B细胞抗原表位、12个T细胞优势抗原表位和5个CTL抗原表位.系统进化树显示其高度保守.GO分析显示其主要功能与脂肪酸代谢有关.分子对接显示PapA4蛋白有多个活性位点.结论:生物信息学预测PapA4蛋白为胞膜蛋白,但无跨膜结构,具有多个磷酸化位点及B、T细胞抗原表位,发现多个功能位点,其主要功能可能是潜伏活化期间海藻糖的脂肪酸酰基化.为结核分枝杆菌潜伏的预防及治疗提供了药物靶点.

书籍名称:儿童口腔科普绘本(全4册)著者:王晴、沃嘉伟出版社:东方出版社内容简介:全套书是专为0～6岁儿童打造的儿童口腔科普绘本,共4册,精装彩绘,分别为《小海豚Xixi害怕去看牙》《鮟鱇鱼Papa爱吃甜食》《小海胆Lulu想当牙医》《小章鱼Momo爱吃手》.

目的 探讨雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)对重型再生障碍性贫血(SAA)模型小鼠CD4+CD25+ Treg细胞凋亡情况的影响及可能的机制.方法 以近交系雌性BALB/c小鼠作为对照(对照组),应用IFN-γ腹腔注射联合白消安灌胃的方法建立SAA小鼠模型(SAA组),并使用RAPA腹腔注射5d治疗SAA小鼠(RAPA组).骨髓活检病理学检查观察各组小鼠的骨髓造血组织变化;免疫磁珠分选出各组小鼠脾脏Treg细胞,用流式细胞术检测其凋亡率;Western blot法检测各组小鼠脾脏Treg细胞的Akt、磷酸化(p)-Akt、Stat3、p-Stat3的表达水平;收集各组小鼠外周血和脾脏中单个核细胞,用流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+ Treg细胞的比例变化.结果 与对照组相比,SAA组造血细胞明显减少,且造血细胞被大量的脂肪组织所代替,RAPA组造血细胞亦明显减少,可见大量脂肪细胞;对照组、SAA组、RAPA组小鼠胫骨骨髓造血组织面积分别为(94.25±4.20)％、(7.00±2.00)％、(9.75±1.83)％,差异有统计学意义(Welch F=1 441.822,P＜0.001);RAPA组略高于SAA组[△(x)=2.15％(95％CI 0.15％～5.35％),P=0.037].对照组、SAA组、RAPA组脾脏Treg细胞凋亡率分别为(19.84±1.39)％、(29.85±2.72)％、(22.39±3.71)％,差异有统计学意义(F=18.338,P＜ 0.001);RAPA组Treg细胞凋亡率明显低于SAA组.RAPA组脾脏Treg细胞中Akt、Stat3的表达水平高于SAA组,而p-Akt和p-Stat3表达水平低于SAA组(P值均＜0.05). SAA组、RAPA组的脾脏CD4+CD25+Foxp3+/CD4+CD25+、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+细胞比例均低于对照组,且RAPA组明显高于SAA组(P值均＜0.017).结论 IFN-γ联合白消安诱导的SAA模型小鼠脾脏Treg细胞存在过度凋亡现象,而RAPA可能通过抑制Treg细胞内Akt及Stat3的磷酸化上调Foxp3的表达,从而抑制Treg细胞的凋亡.

目的 探讨雷帕霉素(RAPA)对甲氨蝶呤(MTX)诱导急性淋巴细胞白血病(ALL) EU-4细胞凋亡的影响.方法 分别使用5μg/L、10 μg/L、25 μg/L、50 μg/L和100 μg/L的RAPA预处理EU-4细胞0.5h,RAPA未处理组作为对照组,收集细胞,Western blot检测LC-3蛋白,流式细胞技术检测凋亡率.观察不同质量浓度的RAPA预处理对EU-4细胞自噬和凋亡的影响,确定RAPA预处理浓度.将EU-4细胞分为RAPA预处理组和未处理组,分别使用0.05.μmol/L、0.10 μmol/L和0.20 μmol/L的MTX作用24h,流式细胞技术检测凋亡率,Western blot检测LC-3蛋白,酶标仪测定吸光度(A562),根据标准曲线计算样品的蛋白浓度.结果 检测对照组和不同浓度RAPA预处理组的EU-4细胞凋亡率显示,对照组,5μ/L、10 μg/L、25 μg/L、50 μg/L和100μg/L RAPA预处理组EU-4细胞的凋亡率分别为(7.51±0.32)％、(7.33±0.41)％、(7.71±0.51)％、(7.63±0.38)％、(7.80±0.43)％和(16.66 ±0.87)％,5μg/L、10 μg/L、25μg/L和50μg/L RAPA预处理组EU-4细胞的凋亡率与对照组比较差异均无统计学意义(t=0.427、-0.417、-0.297、-3.561,均P＞0.05),而100μg/L RAPA预处理组EU-4细胞的凋亡率显著高于对照组,差异有统计学意义(t=-28.815,P＜0.01).根据Western blot和流式细胞技术的检测结果综合考虑,选取50μg/L作为RAPA预处理的浓度.流式细胞技术检测RAPA预处理组和未处理组MTX作用24h后EU-4细胞的凋亡率显示,RAPA预处理组用0.05 μmol/L、0.10 μmol/L和0.20 μmol/L MTX作用24h后,EU-4细胞的凋亡率分别为(50.23±2.11)％、(66.88±2.89)％和(73.11±2.67)％,未处理组0.05 μmol/L、0.10 μmol/L和0.20 μmol/L MTX作用24 h后,EU-4细胞的凋亡率分别为(22.53±1.67)％、(42.82±2.26)％和(53.22±1.93)％.相同浓度的MTX作用24h后,RAPA预处理组EU-4细胞的凋亡率均显著高于未处理组,差异均有统计学意义(t=12.693、66.148、14.429,均P＜0.01).结论 RAPA预处理后,较低剂量的MTX即可诱导急性淋巴细胞白血病EU-4细胞大量凋亡.

目的:探讨右美托咪定发挥神经保护作用的细胞自噬和线粒体自噬机制.方法:通过对SH-SY5Y细胞进行氧糖剥夺再灌注模拟全脑的缺血再灌注损伤,将细胞随机分为7组:(1)C组:对照组;(2)OGD/R组:氧糖剥夺再灌注损伤组;(3)DEX组:右美托咪定组;(4)3MA组:3-甲基腺嘌呤组;(5)D+3MA组;(6)RAPA组:雷帕霉素组;(7)D+RAPA组.结果:与OGD/R组相比,DEX组、3MA组、D+3MA组的细胞活性、电镜下完整线粒体的数量、自噬体数量明显好于OGD/R组(P＜0.05);RAPA组与OGD/R组相比上述指标无明显差异(P＞0.05);而RAPA中加入右美托咪定以后,可以部分逆转PAPA的作用,细胞活性增加,完整线粒体数量增加,自噬体数量减少(P＜0.05).免疫印迹结果显示,与OGD/R组相比,DEX组、3MA组、D+3MA组LC3II/LC3I、Beclin l表达减少,BCD2、P62、TOM20的表达增加,RAPA组各种自噬蛋白的表达与OGD/R组相比没有统计学意义,当应用右美托咪定之后逆转了各种蛋白的表达(P＜0.05).结论:右美托咪定通过减少过度的细胞自噬和线粒体自噬发挥神经保护作用.

[背景]近年来,我国规模猪场着重加强了对猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒病、猪瘟、猪伪狂犬病、猪链球菌病、副猪嗜血杆菌病等疫病的防控,却忽视了由肠外致病性大肠杆菌(Extraintestinal Pathogenic Escherichia coli,ExPEC)对猪群健康产生的潜在危害性,了解和掌握猪源ExPEC流行特征意义显著.[目的]探究临床分离的54株猪源ExPEC血清型、系统进化群和基因型的分布及流行特征.[方法]应用玻板凝集试验和试管凝集试验鉴定O抗原血清型,采用PCR技术检测系统进化群鉴定相关基因、28个ExPEC相关毒力基因以及多位点序列分型相关基因.[结果]受试菌中有52株确定了 O抗原血清型,其中40株为O38(74.1％),为优势血清型;8株为O127(14.8％),O93和O11均2株(各占3.7％).受试菌中44株为B2群(81.5％),是主要系统进化群,D群和B1群均5株(各占9.3％);28个 ExPEC 相关毒力基因中ompA、ibeA、fimH、traT、focD、papA、iroN、iutA、iucD、cvaC、tsh、kpsMTⅡ、iss和ompT出现的频率超过50％,其中ompA和ibeA检出率分别达100％和96.3％,为高度流行的毒力基因,未检到cnfl,而bmaE、malX和iha更倾向分布于D群菌株中.受试菌共呈现31种ST型,其中ST10和ST648均5株(各占9.3％),ST410和ST101均4株(各占7.4％).[结论]猪源ExPEC优势血清型及系统进化群在不同地区、不同时段上的流行分布均存在一定差异,呈现动态过程,O38作为优势血清型目前尚未见报道,具有高致病性的B2群和D群菌株有逐渐增多的趋势.ST型复杂多样,呈现遗传多样性,在一定程度上与人源和禽源ExPEC具有相同的遗传背景.