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两种呼吸道合胞病毒PreF三聚体重组蛋白疫苗的制备和免疫原性评价
编辑人员丨5天前
目的:通过基因序列设计及优化，构建质粒并表达纯化出4种呼吸道合胞病毒(RSV) PreF蛋白，对其免疫原性进行评价。方法:分别用Human和CHO密码子优化Coronin-1A和T4三聚体蛋白基因序列，并添加到RSV F蛋白序列后，将上述质粒转染Expi293F细胞进行蛋白质表达，收获上清经镍柱纯化后，制备出4种三聚体蛋白，并进行SDS-PAGE分析及Western blot鉴定。于0周和3周免疫动物，采血后进行结合抗体和中和抗体活性检测。结果:SDS-PAGE分析及Western blot鉴定结果表明，制备及表达的4种蛋白质具有稳定的三聚体结构；抗原抗体亲和力试验表明，4种三聚体蛋白与RSV特异性单抗8897、D25、Motavizumab、AM14和Palivizumab的亲和力均很强；免疫血清的结合抗体效价和中和抗体效价结果表明，初次免疫后，两种T4三聚体蛋白诱导的抗体水平更高，再次免疫后，Human密码子优化的三聚体蛋白抗体增长幅度较高。结论:两种不同的异源三聚体基序添加均可产生有效的三聚体PreF蛋白，并能在小鼠体内诱导出有效的结合抗体和中和抗体。
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编辑人员丨5天前
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呼吸道合胞病毒PreF和PostF重组蛋白疫苗的免疫原性评价
编辑人员丨5天前
目的:对比呼吸道合胞病毒(RSV)融合前F蛋白(PreF)和融合后F蛋白(PostF)的免疫原性差异。方法:通过SDS-PAGE及Western blot鉴定PreF和PostF的表达，使用Octet仪器检测F蛋白与特异性抗体的亲和力，用PreF和PostF免疫小鼠，检测免疫血清的结合抗体与中和抗体差异。结果:PreF经改造后以稳定的三聚体形式存在，与单抗D25、8897、AM14、Palivizumab以及Motavizumab均具有很高的亲和力，但PostF缺乏表位?构象，并呈现单体构象，与D25、8897、AM14并无明显结合。PreF和PostF免疫小鼠的研究发现，AS01佐剂比铝佐剂更能诱导出高滴度结合抗体和针对RSV Long株的中和抗体。PreF与PostF免疫后诱导的结合抗体与PreF的结合能力相当，PostF免疫后诱导的结合抗体与PostF的结合水平显著高于PreF。结论:PreF拥有更多的抗体结合表位，改造后稳定的PreF三聚体重组蛋白能够诱导更强的中和抗体。同时，AS01佐剂免疫效果优于铝佐剂。因此，基于PreF稳定的三聚体结构改造及佐剂的研发对于RSV疫苗的发展至关重要。
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编辑人员丨5天前
