目的:探讨组蛋白去乙酰化酶3（HDAC3）特异性抑制剂RGFP966对创伤性脑损伤（TBI）大鼠早期脑损伤的神经保护作用及其机制。方法:将48只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、TBI组、TBI+溶媒对照组、TBI+RGFP966组，每组12只。后3组大鼠采用液压冲击脑损伤法建立TBI模型，其中TBI+RGFP966组于造模后30 min经腹腔注射RGFP966（溶于1%DMSO中，剂量为10 mg/kg，2次/d，共给药3 d），TBI+溶媒对照组同期注射等量DMSO。于造模后第3天，分别应用改良神经功能缺损评分（mNSS）评估各组大鼠的神经功能，干湿重法检测各组大鼠损伤侧大脑皮层含水量，尼氏染色检测各组大鼠损伤侧额叶皮层组织中损伤神经元比例，免疫组化染色及Western blotting检测各组大鼠损伤侧额叶皮层组织中HDAC3及焦亡相关蛋白表达，ELISA法检测各组大鼠血清中炎性因子含量。结果:造模后第3天，与TBI+溶媒对照组比较，TBI+RGFP966组大鼠mNSS评分[(9.83±0.75)分 vs.(6.67±0.82)分]、脑组织含水量[(82.73±0.36)% vs. (80.92±0.66)%]明显下降，损伤神经元比例[(75.60±7.44)% vs. (55.87±4.10)%]明显下降，HDAC3蛋白表达明显下降（0.67±0.09 vs. 0.51±0.07），乙酰化H3、乙酰化H4蛋白表达明显上升（0.81±0.02 vs. 1.22±0.02；0.74±0.01 vs. 1.07±0.02），核因子-κB（NF-κB）（1.20±0.05 vs. 0.94±0.04）、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）（0.72±0.02 vs. 0.40±0.03）、活性含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1、消皮素D N-末端片段（GSDMD-N）（0.71±0.03 vs. 0.52±0.01）蛋白表达明显下降，NF-κB、NLRP3免疫组化染色评分明显下降，肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β、白细胞介素-18含量明显下降，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:TBI后早期应用RGFP966干预可以减轻神经细胞焦亡和炎症反应，发挥神经保护作用，其机制可能与抑制NF-κB/NLRP3/GSDMD通路激活有关。

目的:评价组蛋白去乙酰化酶3 (HDAC3)在原代大鼠心肌细胞高糖缺氧复氧损伤中的作用及其与自噬的关系。方法:将1~3 d左右的新生SD乳鼠提取原代心肌细胞，铺板。按随机数字表法分为5组( n＝24)：对照组(C组，糖浓度5.5 mmol/L)、缺氧复氧组(H/R组)、高糖组(H组，糖浓度30 mmol/L)、高糖缺氧复氧组(HH/R组)和高糖缺氧复氧+HDAC3抑制剂RGFP966组(HH/R+RG组)。采用50%葡萄糖注射液制备高糖培养基(终浓度为30 mmol/L)。H/R组细胞置于低氧环境(5%CO 2-0.9%O 2-94.1%N 2)中培养6 h，再置于常氧环境中复氧2 h制备心肌细胞缺氧复氧模型。HH/R+RG组于缺氧复氧前24 h加入RGFP966，终浓度10 μmol/L。于细胞复氧2 h时，采用CCK-8法检测细胞活力；ELISA法检测细胞上清LDH活性；自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)转染下共聚焦显微镜检测细胞自噬水平；Western blot法检测心肌细胞HDAC3、p62、LC3Ⅱ和LC3Ⅰ的表达，计算LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。 结果:与C组比较，H/R组和H组心肌细胞活力降低，上清液LDH活性升高，H/R组自噬小体数增加，心肌细胞HDAC3表达上调，p62表达下调，LC3 Ⅱ/I比值升高，H组自噬小体数减少，心肌细胞HDAC3和p62表达上调，LC3 Ⅱ/I比值降低( P<0.05)；与H/R组比较，HH/R组心肌细胞活力降低，上清液LDH活性升高，自噬小体数量降低，HDAC3和p62表达上调，LC3 Ⅱ/I比值降低( P<0.05)；与H组比较，HH/R组心肌细胞活力降低，上清液LDH活性升高，自噬小体数量增加，HDAC3和p62表达上调，LC3 Ⅱ/I比值升高( P<0.05)；与HH/R组比较，HH/R+RG组心肌细胞活力升高，上清液LDH活性降低，自噬小体数量增加，HDAC3和p62表达下调，LC3 Ⅱ/Ⅰ比值升高( P<0.05)。 结论:HDAC3表达上调参与了原代心肌细胞高糖缺氧复氧损伤的过程，与降低细胞自噬水平有关。

目的:观察组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)-核转录因E2相关因子2(Nrf2)信号通路对大鼠颞下颌关节(TMJ)骨关节炎(OA)髁突软骨细胞脂肪化的影响.方法:60只6周龄雌性SD大鼠随机分为10组(n=6),分别为对照组,单侧前牙反(UAC)刺激组,UAC伴HDAC3抑制剂RGFP966注射组(UAC+RGFP966组)以及UAC伴Nrf2激动剂Bardoxolone注射组(UAC+Bardoxolone组),分别于实验开始后4、8、12周处死动物,取TMJ髁突软骨进行HDAC3、Nrf2和软骨细胞脂肪化标志分子脂联素(Adiponectin)免疫组织化学染色.结果:相比于同期对照组,UAC组大鼠TMJ髁突软骨退变明显,HDAC3、Adi-ponectin阳性细胞率均显著增加(P＜0.05),而Nrf2阳性细胞率显著减少(P＜0.05);与同期UAC组相比,注射RGFP966和Bardoxolone药物后,大鼠TMJ髁突软骨中HDAC3、Adiponectin阳性细胞率显著减少(P＜0.05),Nrf2阳性细胞率显著增多(P＜0.05),软骨退变程度显著减轻.结论:UAC刺激通过HDAC3-Nrf2信号通路促进TMJ OA髁突软骨细胞脂肪化,局部药物注射干预HDAC3-Nrf2信号可抑制TMJ OA髁突软骨细胞脂肪化及软骨退变.

目的 探讨HDAC3抑制剂RGFP966缓解子宫内膜纤维化的分子机制.方法 将18只6～8周雌性SD大鼠随机分为3组,Control组、IUA模型组(即宫内粘连大鼠模型组)、RGFP966治疗组(1UA模型组给予HDAC3抑制剂RGFP966治疗),每组6只.建立IUA大鼠模型.ELISA测定大鼠血清炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平.qPCR法测定大鼠子宫内膜组织上皮间质转化标志物E-cadherin、N-cadherin、α-SMA、Vimentin mRNA相对表达水平.蛋白质印迹法测定大鼠子宫内膜组织TGF-β1、SMAD3、p-STAT-1、STAT-1、AIM2、IL-18、cleaved-IL-1β、IL-1β的表达水平.结果 与Control组相比,IUA模型组大鼠子宫角壁变薄,血清炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高(P＜0.05);E-cadherin mRNA相对表达水平降低,N-cadherin、α-SMA、Vimentin mRNA 相对表达水平升高(P＜0.05);TGF-β1、SMAD3、p-STAT-1 蛋白质表达水平增强(P＜0.05);AIM2、IL-18、cleaved-IL-1 β的表达水平增强(P＜0.05).与IUA模型组相比,RGFP966治疗组部分逆转(P＜0.05)了上述指标.STAT-1和IL-1β的表达水平在上述3个分组中无明显差异(P＞0.05).结论 HDAC3的抑制剂RGFP966可通过下调TGF-β1/SMAD3/STAT-1信号通路抑制AIM2炎症小体和EMT,缓解子宫内膜纤维化.

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶3特异性抑制剂RGFP966对胃癌细胞增殖能力和细胞周期的影响及其作用机制.方法:采用CCK-8法检测RGFP966处理MKN-45和MGC-803细胞后各组细胞的活力;细胞克隆形成实验检测RGFP966对胃癌细胞集落形成能力的影响;流式细胞术检测细胞周期;Western blot实验检测细胞增殖和周期相关蛋白Ki-67、c-Myc、Cyclin A2、Cyclin D1以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达情况.结果:与对照组相比,RGFP966可显著抑制胃癌细胞MKN-45和MGC-803的增殖能力、集落形成能力.与对照组相比,流式细胞术显示RGFP966诱导胃癌细胞阻滞在G0/G1期.与对照组相比,RGFP966处理后细胞增殖和周期相关蛋白Ki-67、c-Myc、Cyclin A2、Cyclin D1表达均下降,RGFP966可显著降低PI3K和AKT的磷酸化水平.结论:RGFP966抑制胃癌细胞的增殖能力并诱导胃癌细胞阻滞在G0/G1期,其作用机制可能与RGFP966抑制PI3K/AKT信号通路有关.

目的 评价自噬在糖尿病小鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及其与组蛋白去乙酰化酶3 (HDAC3)/时钟基因芳香烃受体核转位蛋白样1基因(Bmal1)信号通路的关系.方法 清洁级健康雄性C57BL/6小鼠,采用腹腔注射链脲佐菌素的方法制备糖尿病模型.饲养8周后取模型制备成功的小鼠36只,采用随机数字表法分为3组(n=12):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)和缺血再灌注+HDAC3抑制剂组(I/R-H组).采用大脑中动脉闭塞法(缺血1h再灌注24h)建立脑缺血再灌注模型.I/R-H组于模型建立前30 min皮下注射HDAC3特异性抑制剂RGFP966 10 mg/kg.于再灌注24h时取脑组织,光镜下观察病理学结果,采用TTC法检测脑梗死体积,TUNEL法确定细胞凋亡指数,比色法测定SOD活性、MDA含量和ROS活性,免疫荧光法检测自噬相关蛋白Beclin-1和LC3B的表达,采用Western blot法检测HDAC3、Bmal1、GSK-3β和p62的表达.结果 与S组比较,I/R组脑梗死体积增加,脑组织SOD活性、MDA含量和ROS活性降低,Bmal1、p-GSK-3β和HDAC3表达下调,细胞凋亡指数升高(P＜0.05);与I/R组比较,DIR-H组脑梗死体积增加,SOD活性、MDA含量和ROS活性升高,Bmal1、p-GSK-3β、Beclin-1和LC3B表达上调,细胞凋亡指数、HDAC3和p62表达下调(P＜0.05).结论 HDAC3/Bmal1信号通路通过激活自噬,增加糖尿病脑缺血再灌注小鼠抗氧化能力,发挥内源性保护作用.

目的 评价组蛋白去乙酰化酶3 (HDAC3)在心肌缺血再灌注诱发糖尿病大鼠肾损伤中的作用.方法 SPF级健康成年雄性SD大鼠,体重210～220 g,采用腹腔注射1％链脲佐菌素60mg/kg的方法制备大鼠糖尿病模型,取糖尿病模型制备成功的大鼠18只,采用随机数字表法分为3组(n=6):假手术组(S组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)和HDAC3抑制剂组RGFP966(RG组).采用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型.RG组于心肌缺血前1h时腹腔注射RGFP966 10 mg/kg.于再灌注120 min时分离右侧颈内动脉取血,采用ELISA法检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK-MB)、肌酐(Cr)和尿素氮浓度;取部分肾组织,观察病理学结果,进行肾小管损伤评分,Western blot法检测HDAC3、沉默信息调节因子1(SIRT1)和IL-1β表达水平.结果 与S组比较,I/R组血清LDH和CK-MB、Cr、尿素氮浓度和肾小管损伤评分升高,HDAC3和IL-1β表达上调,SIRT1表达下调(P＜0.05);与I/R组比较,RG组血清LDH、CK-MB、Cr、尿素氮浓度和肾小管损伤评分降低,HDAC3和IL-1β表达下调,SIRT1表达上调(P＜0.05).结论 HDAC3表达上调参与了心肌缺血再灌注诱发糖尿病大鼠肾损伤的过程.

目的 研究组蛋白去乙酿化酶 3(HDAC3)在酒精诱导的肠上皮细胞炎症和通透性中的作用和机制.方法 培养Caco-2细胞达到分化,采用(10、25 、50 、100、200)mmol/L 乙醇对其进行处理,通过噻唑蓝(MTT法)检测乙醇对细胞活性的影响,实时定量PCR检测 Caco-2细胞HDAC3 mRNA水平,Western blot法检测其蛋白水平,从中筛选出适宜的乙醇浓度.将分化的 Caco-2细胞分为对照组、乙醇组(50 mmol/L乙醇处理60min)和 RGFP966预处理组(乙醇处理前用 2μmol/L HDAC3抑制剂 RGFI珍66预处理 1 h).EUSA检测培养的细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量,电阻仪检测跨上皮电阻值(TER),Western blot法检测细胞中闭合蛋白(occludin)、密封蛋白 1(claudin-1)以及磷酸化的核因子 κBp65(p-NF-κBp65)、核因子 κB抑制蛋白(IκB)的蛋白水平.结果 (10、25 、50)mmol/L乙醇对细胞活力无明显影响,这些浓度的乙醇处理后 HDAC3 mRNA和蛋白表达均升高,且具有剂量依赖性.与对照组相比,乙醇处理组细胞 TNF-α含量和 p-NF-κBp65蛋白水平增加,TER值与occludin、claudin-1和 IκB蛋白水平均降低;与乙醇处理组相比,RGFP966预处理组细胞 TNF-α含量和 p-NF-κBp65蛋白水平均降低,TER值与 occludin、claudin-1和 IκB蛋白水平均增加.结论 抑制 HDAC3能够减弱乙醇诱导的肠上皮细胞炎症和通透性,可能是通过抑制 NF-κB的活化发挥作用的.

目的:探究组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)在HK-2细胞高糖缺氧复氧损伤的作用并探讨其可能的作用机制.方法:随机将HK-2细胞分5组(n=6):低糖组(L组)、高糖组(H组)、低糖缺氧复氧组(LR组)、高糖缺氧复氧组(HR)、高糖缺氧复氧+HDAC3抑制剂(RGFP966)组(HR+RG).采用50％葡萄糖注射液以葡萄糖终浓度为45mmol/L的高糖培养基培养细胞24 h建立高糖模型,于三气培养箱(含94％N2,5％CO2和1％O2)进行缺氧24 h,复氧4h建立缺氧复氧模型.采用CCK-8和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞活性和LDH释放水平,超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)试剂盒检测SOD活性及MDA的含量,Western Blot法检测HK-2细胞HDAC3、P62和LC3蛋白的表达.结果:与L组比较,H组和LR组细胞上清LDH和MDA显著增高(P＜0.05);且HDAC3和P62蛋白表达水平显著增高(P＜0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白水平显著降低(P＜0.05);与LR组比较,HR细胞上清LDH和MDA显著增加(P＜0.05);HDAC3和P62蛋白表达水平显著增高(P＜0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白水平显著降低(P＜0.05).与HR组相比,HR+RG细胞损伤减轻,细胞上清LDH、MDA显著减轻(P＜0.05);HDAC3和P62蛋白表达显著降低(P＜0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达升高(P＜0.05).结论:HDAC3的表达增加介导高糖缺氧复氧引起的HK-2细胞损伤,且其与自噬功能降低密切相关;RGFP966通过抑制HDAC3蛋白的表达,促进自噬的恢复,从而减轻高糖缺氧复氧引起的损伤.

目的:观察组蛋白脱乙酰化酶3(HDAC3)抑制剂RGFP966是否能够促进低温保存心脏复灌期心功能的恢复,并探讨Hippo-YAP信号通路是否参与了RGFP966的心肌保护作用.创新点:首次证实了在Celsior保存液中添加RGFP966可以减轻长时程低温保存引起的心脏功能障碍.该研究结果为临床实践中的心脏移植提供有价值且可行的策略,为患者获得远距供体心脏提供了可能.方法:将大鼠离体心脏置于含有或不含有RGFP966的Celsior保存液中低温保存12 h后,于Langendorff灌流系统中复灌60 min,测定复灌期各项心功能指标.用Western blotting法分析Mst1和YAP蛋白表达和磷酸化水平.用TUNEL法测定心肌细胞凋亡情况.结论:RGFP966可以促进低温保存心脏复灌期心功能的恢复,其作用机制可能是通过抑制Hippo-YAP信号传导通路的激活,增强心肌抗氧化能力,抑制心肌细胞凋亡而实现的.