目的:探究江苏省发热伴血小板减少综合征血清新型布尼亚病毒（severe fever with thrombocytopenia syndrome virus，SFTSV）中和抗体消长及影响因素，为免疫防控提供理论依据。方法:采集江苏省发热伴血小板减少综合征既往病例的血清样本，采用空斑减少中和试验对其进行SFTSV中和抗体检测，阐明其消长规律，应用Spearman相关和广义相加模型分析其影响因素。结果:本研究共纳入2011—2018年江苏省发热伴血小板减少综合征既往病例95例，其血清SFTSV中和抗体总阳性率为98.95%（94/95），总体几何平均滴度为1∶221。抗体水平随病后时间的延长总体呈逐年下降趋势（ F=2.31， P=0.03），急性期高病毒载量者抗体水平较高（ t=2.23， P=0.03）。抗体水平与急性期病毒载量呈正相关关系（ r s=0.30， P<0.01），与病后时间呈负相关关系（ r s=-0.25， P=0.03）。广义相加模型结果显示，急性期病毒载量CT值在0~125 000 copies/mL范围内对其影响尤为显著；抗体水平于病后7—20个月期间下降明显，21—40个月期间趋于平缓，41—96个月期间持续下降。 结论:2011—2018年江苏省发热伴血小板减少综合征既往病例血清SFTSV中和抗体普遍呈阳性，具有自我保护能力。抗体水平随时间逐渐降低，且与急性期病毒载量呈非线性正相关关系，可进行针对性免疫防护。

目的:分析发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)不同基因型和突变体的中和特性。方法:采用VSVΔG-Fluc*G骨架构建SFTSV不同基因型和突变体的假病毒，建立以假病毒为基础的中和抗体检测方法。制备不同基因型DNA疫苗并免疫豚鼠采集血清。对DNA疫苗免疫后血清以及自然感染者的血清进行中和抗体检测，分析其中和特性。结果:成功构建了5个基因型和43株突变体的假病毒。通过条件优化，建立了以假病毒为基础的中和抗体检测方法。利用报告基因表达量的减少，将中和抗体对假病毒的半数感染抑制率所对应的稀释倍数作为中和抗体滴度。以参考株HB29检测，自然感染者的中和抗体滴度在1∶100～1∶43 000之间，不同基因型DNA疫苗免疫后的中和抗体在1∶100～1∶2 500之间。不同基因型和突变体对DNA疫苗免疫的豚鼠血清以及自然感染者血清的中和抗体检测差异无统计学意义。结论:各基因型和突变体的中和特性未发现明显改变，对疫苗毒株的选择具有重要参考价值。

目的 通过9型腺相关病毒(adeno-associated virus 9,AAV9)系统表达发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)Gn蛋白,并评价其免疫原性.方法 将SFTSV Gn基因重组至病毒载体pAAV-CMV-FH,将构建的重组质粒转染HEK293T细胞,获得重组病毒AAV9-Gn;免疫荧光和Western blot法鉴定Gn蛋白的表达情况.将18只雌性BALB/c小鼠随机分为Mock组(无血清DMEM)、AAV9-GFP组(1 × 1011 vg)和AAV9-Gn组(1×1011 vg),各组均经小鼠右后肢肌内注射,100μL/只.连续21 d监测各组小鼠体质量、饮食、行为及精神状态,并计算体质量变化率;于免疫后2、4、8、16周,采用荧光灶减少中和试验(fluorescent reduction neu-tralization test,FRNT)检测各组小鼠血清中SFTSV中和抗体水平,ELISA法检测AAV9-Gn组小鼠血清中特异性IgG 1和IgG2a抗体水平.结果 与特异性抗体孵育显色后,转染AAV9-Gn的Vero细胞于荧光显微镜下可见特异性绿色荧光,且可与小鼠抗SFTSV Gn单克隆抗体发生特异性结合,并于相对分子质量约61 000处可见特异性结合条带.3组小鼠体质量均呈增长趋势,组间差异无统计学意义(F=0.158～2.621,P＞0.05),且饮食、行为及精神状态均表现正常.免疫后2、4、8和16周,AAV9-Gn组小鼠血清中的SFTSV中和抗体效价均明显高于Mock组和AAV9-GFP组(H=13.332～14.538,P均＜0.001),且效价峰值出现在第8周;不同时间点小鼠血清中特异性IgGl抗体水平均明显高于IgG2a(F=4.373～12.975,P均＜0.05).结论 通过AAV9表达系统可正确表达SFTSV Gn蛋白,且对小鼠毒性较低,并具有良好的免疫原性,有望作为SFTSV疫苗的候选成分.

目的 构建表达发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)Gn蛋白的重组狂犬病病毒,并研究重组病毒的免疫反应.方法 将SFTSV的保护性抗原Gn蛋白基因插入至狂犬病病毒(RABV)SAD株基因组的假基因区,通过反向遗传技术拯救获得重组病毒SAD-Gn株.对SAD-Gn进行生物学特性鉴定,并将SAD-Gn株免疫小鼠,测其血清中和抗体效价.结果 通过酶切、RT-PCR和荧光抗体染色鉴定,证明SAD-Gn株基因组中含有Gn基因,且能正确表达Gn蛋白.该重组病毒细胞适应性好,滴度可达3.3×108 FFU/ml.免疫小鼠后,可同时诱导产生高效价的抗RABV和SFTSV的中和抗体.结论 成功构建了重组病毒SAD-Gn,并诱导小鼠产生针对RABV和SFTSV的中和抗体,为进一步研制预防狂犬病和发热伴血小板减少综合征的二联疫苗奠定了基础.

目的 了解两种新型布尼亚病毒(SFTSV) IgG抗体ELISA试剂盒的检测效果,为其应用提供参考.方法 微量中和试验(MNT)、ELISA-1和ELISA-2试剂盒平行检测25例发热伴血小板综合征患者恢复期血清和385例健康人群血清中的SFTSV IgG抗体,以MNT的检测结果为金标准,计算各项比对指标并进行综合评估.结果 MNT和两种ELISA试剂盒用于恢复期患者血清IgG抗体检测效果较好.然而用于健康人群血清IgG抗体检测有较大差异,MNT、ELISA-1和ELISA-2的检出阳性率分别为11.69％、7.79％与5.97％.与MNT相比,2种ELISA方法的灵敏度为51.11％与48.89％,特异性为97.94％与99.71％,正确指数为0.49与0.49,阳性似然比为24.83与166.22,阴性似然比为0.50与0.51,一致性强度值为0.57与0.62.假阳性样本S/CO平均比值3.02,低于共同阳性样本的17.49,其中＜3.8者占7份.结论 ELISA-1和ELISA-2用于恢复期患者血清IgG的检测结果准确可靠,而用于健康人群血清IgG的检测结果与标准方法之间一致性偏低,筛查诊断价值不理想.

目的 获得表达发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)N端糖蛋白(Gn)的重组人5型腺病毒(Ad5-Gn),鉴定其生物学特性及诱导产生中和抗体的能力.方法 利用AdEasy腺病毒包装系统,构建pAD-Amp-Gn表达载体,转染HEK-293细胞,获得重组腺病毒Ad5-Gn.用Ad5-Gn感染细胞,利用免疫荧光染色和Western印迹鉴定SFTSV Gn的表达水平;将Ad5-Gn病毒注射BALB/c小鼠,观察小鼠行为学并检测特异性中和抗体水平,评价Ad5-Gn的安全性和免疫原性.结果 免疫荧光染色和Western印迹结果表明,Ad5-Gn感染细胞后能检测到SFTSV Gn表达,且大小符合预期.Ad5-Gn不影响小鼠生长,免疫小鼠4周后产生的中和抗体平均效价为1:341.结论 获得了表达SFTSV Gn的Ad5-Gn候选疫苗,其毒力低且能诱导小鼠产生较高的中和抗体,为进一步研制SFTSV疫苗奠定了基础.