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H9亚型禽流感病毒与大肠杆菌并发感染的诊断
编辑人员丨2023/8/6
目的 对苏北某鸡场送检病鸡,剖检显示严重的心包炎、肝周炎,部分脏器出血,进行实验室诊断.方法 取病鸡肝脏划线接种麦康凯平板,同时取病鸡肝脏、脾脏及胰腺,病料混合研磨后接种3枚10日龄SPF鸡胚,每个鸡胚接种0.2ml研磨液.将平板上长出的细菌纯化后进行细菌生化实验及16S rDNA基因测序鉴定.死亡鸡胚收集尿囊液进行试纸条检测、血凝及血凝抑制实验.结果 生化试验、16S rDNA扩增序列分析结果显示麦康凯上红色菌落为大肠杆菌,分离病毒具有血凝性且能被禽流感H9亚型特异性血清抑制.结论 本病例为H9亚型AIV与大肠杆菌混合感染.
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编辑人员丨2023/8/6
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SPF鸡肝脏细胞cDNA文库的构建及鉴定
编辑人员丨2023/8/6
旨在构建SPF鸡肝脏组织细胞的cDNA文库并且对文库质量进行鉴定.用TRIzol方法从SPF鸡肝脏组织细胞中提取总RNA,用紫外分光光度仪测定其含量后,应用SMART技术经过LD-PCR合成双链cDNA.利用CHROMA SPIN-400纯化柱纯化得到双链cDNA,并与线性DGADT7-Rec共转化进酵母Y187感受态,以同源重组的方式在酵母细胞内构建鸡肝脏酵母双杂交cDNA表达文库.结果 显示,成功构建含有1.70×107个重组子的SPF鸡肝脏细胞cDNA文库,插入片段多数在0.4～2.0 kb之间,重组率达100％,重组子中平均插入的片段长度为1.0 kb,文库滴度为1.30× 107 cfu/mL.结果 表明,该文库达到了高质量文库所应具备的条件,为进一步筛选此文库与ARV相互作用的宿主蛋白以及研究其功能提供了数据依据.
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编辑人员丨2023/8/6
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鸡Toll样受体21单克隆抗体的研制及其初步应用
编辑人员丨2023/8/5
[目的]研制鸡Toll样受体21(chTLR21)单克隆抗体,考察禽致病性大肠杆菌(APEC)及高致病性禽流感病毒(HPAIV)感染鸡组织中的chTLR21蛋白的表达情况.[方法]以人工合成的多肽免疫原chTLR21(203-225 aa)与KLH偶联蛋白免疫6周龄BALB/c小鼠,以多肽免疫原chTLR21(203-225 aa)与BSA偶联蛋白作为检测抗原,通过间接ELISA技术筛选阳性杂交瘤细胞株,同时,采用间接免疫荧光技术(IFA)检测单克隆抗体的荧光反应性;上述单克隆抗体用于chTLR21在鸡巨噬细胞(HD11)中的定位;在APEC O1血清型E516菌株、HPAIV H5N6亚型毒株感染35日龄SPF鸡模型中,应用获得的单克隆抗体以免疫印迹(Western blotting)和免疫组化(IHC)方法检测感染鸡组织中chTLR21的表达情况.[结果]建立了间接ELISA检测方法,确定最适抗原包被浓度为2.5 μg/mL,最适血清稀释度为1:6 400.经ELISA、IFA筛选,获得4株阳性杂交瘤细胞株,分别命名为1G3、2C10、3B6和4F11.上述单克隆抗体亚类分别为IgG2b、IgG1、IgG2b和IgG2a型,其中3B6具有较强的荧光反应性;制备单克隆抗体3B6腹水,其ELISA效价为1∶102 400;IFA结果表明,chTLR21存在于HD11细胞质内;APEC感染鸡组织中chTLR21 Western blotting和IHC检测结果表明,感染鸡肝、脾、肺、肾、法氏囊中chTLR21表达量显著上升,而胰腺中表达量显著下降;HPAIVH5N6感染鸡上述组织中chTLR21的表达量均未见明显变化.[结论]本研究成功研制出针对鸡chTLR21受体的单克隆抗体,单克隆抗体3B6可用于检测鸡体内chTLR21表达情况,为chTLR21在病原体感染及天然免疫应答中的机制、功能研究提供了重要生物材料.
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编辑人员丨2023/8/5
