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禽呼肠孤病毒σC蛋白重组腺病毒载体的构建及其对肝癌细胞增殖的影响
编辑人员丨2024/4/27
目的 构建表达禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)σC蛋白的重组腺病毒载体pAd-σC,并检测其对肝癌细胞增殖的影响,为新型抗肿瘤疫苗的研发奠定基础.方法 采用PCR法扩增ARVσC基因,构建重组穿梭载体pShuttle-σC,随后转化含有腺病毒载体pAdessy-1的BJ5183感受态细胞,通过同源重组获得重组腺病毒载体pAd-σC,在HEK293细胞内包装病毒,TCID50法检测病毒滴度,Western blot和ELISA法检测σC蛋白的表达,CCK-8法检测病毒对人肝癌细胞SMMC7721增殖的影响.结果 重组穿梭载体pShuttle-σC经双酶切及测序鉴定证明构建正确,重组腺病毒载体pAd-σC经菌落PCR鉴定证明构建正确;σC蛋白在肝癌细胞SMMC7721中可成功表达;重组腺病毒Ad-σC效价为107.5/0.1 mL,可抑制肝癌细胞SMMC7721增殖.结论 成功构建了含有ARV σC基因的重组腺病毒载体pAd-σC,初步分析其对肿瘤细胞增殖具有抑制作用,为揭示ARV溶瘤效应的分子机制及进一步研发新型抗肿瘤生物制剂奠定了基础.
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编辑人员丨2024/4/27
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SPF鸡肝脏细胞cDNA文库的构建及鉴定
编辑人员丨2023/8/6
旨在构建SPF鸡肝脏组织细胞的cDNA文库并且对文库质量进行鉴定.用TRIzol方法从SPF鸡肝脏组织细胞中提取总RNA,用紫外分光光度仪测定其含量后,应用SMART技术经过LD-PCR合成双链cDNA.利用CHROMA SPIN-400纯化柱纯化得到双链cDNA,并与线性DGADT7-Rec共转化进酵母Y187感受态,以同源重组的方式在酵母细胞内构建鸡肝脏酵母双杂交cDNA表达文库.结果 显示,成功构建含有1.70×107个重组子的SPF鸡肝脏细胞cDNA文库,插入片段多数在0.4～2.0 kb之间,重组率达100％,重组子中平均插入的片段长度为1.0 kb,文库滴度为1.30× 107 cfu/mL.结果 表明,该文库达到了高质量文库所应具备的条件,为进一步筛选此文库与ARV相互作用的宿主蛋白以及研究其功能提供了数据依据.
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编辑人员丨2023/8/6
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柏禽刺螨叮刺传播和经期、经卵传递流行性出血热病毒的实验研究
编辑人员丨2023/8/5
首先接种EHFV苏-163株于乳小鼠，再以柏禽刺螨若螨和成螨叮刺此感染性鼠，经10天，15天和25天将这些螨及其子代若螨分别叮刺健康乳鼠，然后以间接免疫荧光技术检测，结果除10天子代组阴性外，其余均获EHF特异性荧光颗粒，而对照乳鼠阴性。与呼肠孤病毒Ⅰ、Ⅱ型抗血清呈阴性，且EHF免疫血清可阻断特异性荧光反应。因此，我们首次证明柏禽刺螨不仅能经叮刺传播，而且能经期传递和经卵传递EHF。病毒在螨体内能生存和繁殖26天以上。由于柏禽刺螨是家鼠和大、小白鼠寄生革螨的优势种，分布广、数量大、专性吸血、经常侵袭人群，其季节消长与发病季节相符。所以我们认为，此螨在城市型和实验动物型EHF的传播和维持中起重要作用。
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编辑人员丨2023/8/5
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禽呼肠孤病毒基因组结构和功能及其基因工程疫苗的研究进展
编辑人员丨2023/8/5
禽呼肠孤病毒病是由禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)引起的一种传染性疾病.ARV可感染多种禽类,分布范围十分广泛.近年来,禽呼肠孤病毒病感染谱不断扩大,给养禽业的发展带来了一定的经济损失.本文对ARV的基因组结构和功能,及其基因工程疫苗的研究进展作一综述,以期为禽呼肠孤病毒病的研究和防控提供参考.
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编辑人员丨2023/8/5
