目的:探讨昼夜节律变化对视黄酸相关孤儿受体(RORs)表达量及RORs激动剂SR1078对角膜上皮创伤修复的影响。方法:选取SPF级6~8周龄C57BL/6雌性小鼠228只，采用随机数表法将其中180只小鼠分为昼夜节律正常组、全昼组、全夜组、昼夜颠倒12 h组和昼夜颠倒3周组，每组36只。将剩余48只小鼠采用随机数表法随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组和SR1078组，每组24只。按照分组，将小鼠置于可控制光照(光照强度300 lx)及黑暗时间的节律箱中，其中昼夜节律正常组、PBS对照组和SR1078组节律箱的光照时间为7：00~19：00，黑暗时间为19：00~次日7：00。根据Zeitgeber Time计时法，以开始光照时间7：00记为ZT0，以关闭光照时间19：00记为ZT12。采用实时荧光定量PCR法检测昼夜节律正常组、全夜组、全昼组、昼夜颠倒12 h组和昼夜颠倒3周组ZT1、ZT5、ZT9、ZT13、ZT17、ZT21各时间点RORα和RORγ mRNA相对表达量。PBS对照组和SR1078组采用高尔夫样刀建立小鼠角膜上皮损伤模型并按照分组情况用相应试剂点眼，每隔6 h给药1次。采用Adobe Photoshop CC2019软件测量角膜上皮缺损面积，计算并比较2个组角膜上皮缺损率。分析昼夜节律正常组、全昼组、全夜组、昼夜颠倒12 h组和昼夜颠倒3周组小鼠角膜上皮RORα和RORγ mRNA相对表达量与PBS对照组和SR1078组角膜上皮缺损率的相关性。采用全角膜铺片及免疫荧光染色法观察角膜上皮修复情况，计算并比较PBS对照组和SR1078组小鼠角膜上皮分裂细胞数量。结果:与昼夜节律正常组比较，全昼组、全夜组、昼夜颠倒12 h组和昼夜颠倒3周组小鼠RORα/RORγ mRNA相对表达量整体呈减少趋势。造模后不同时间点PBS对照组和SR1078组小鼠角膜上皮缺损率总体比较差异有统计学意义( F组别＝74.01， P<0.001； F时间＝5 171.48， P<0.001)，其中造模后12 h SR1078组角膜上皮缺损率显著低于PBS对照组，差异有统计学意义( P<0.05)。角膜组织中RORα和RORγ mRNA相对表达量与小鼠角膜上皮缺损率均呈中度正相关( r＝0.614、0.537，均 P<0.01)；RORα mRNA相对表达量与角膜上皮缺损率变化量的直线回归方程为Y＝33.153X-43.052( F＝20.58， P<0.001)，RORγ mRNA相对表达量与角膜上皮缺损率变化量的直线回归方程为Y＝2.764X-1.364( F＝13.11， P<0.001)。造模后不同时间点SR1078组和PBS对照组小鼠角膜上皮分裂细胞数量总体比较差异有统计学意义( F分组＝160.55， P<0.001； F时间＝83.57， P<0.001)，其中造模后24、30、36 h SR1078组分裂细胞数目显著少于PBS对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:昼夜节律变化使小鼠角膜中RORα和RORγ mRNA表达减少，SR1078可通过促进角膜上皮RORα和RORγ mRNA的表达使小鼠角膜上皮分裂细胞数量减少，抑制角膜创伤后的修复过程。

目的:观察电头针干预对局灶性脑缺血大鼠缺血皮层区维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、辅助性T细胞(Th)17和调节性T细胞(Treg)的影响,从调控免疫细胞平衡的角度探讨电头针缓解缺血性脑卒中炎性损伤的分子机制.方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电头针组、抑制剂组、激动剂组、电头针+激动剂组,每组 15只.采用线栓法复制大脑中动脉栓塞大鼠模型.电头针组取双侧顶颞前斜线电针干预,每次30 min;抑制剂组给予RORγt抑制剂SR1001溶液腹腔注射;激动剂组给予RORγt激动剂SR1078溶液腹腔注射;电头针+激动剂组在腹腔注射SR1078溶液基础上再行电头针干预;所有干预均1次/d,连续7 d.干预前、后对各组大鼠行Zea-Longa评分,神经功能缺损量表(mNSS)评分和神经行为学评分.TTC染色法检测脑梗死体积;实时荧光定量PCR法检测脑缺血区皮层中RORγt mRNA的表达水平;Western blot法检测脑缺血区皮层中RORγt、白细胞介素(IL)-17A、IL-10和转化生长因子β1(TGF-β1)的蛋白表达水平;免疫组织化学法检测脑组织中IL-6、IL-21的阳性表达;免疫荧光染色法检测脑缺血区皮层中IL-17A+Th17和叉头状转录因子P3(FOXP3)+Treg细胞的阳性表达面积并计算其比值.结果:与假手术组比较,模型组Zea-Longa评分、mNSS评分与神经行为学评分升高(P<0.01),脑梗死体积增大(P<0.01),缺血区皮层RORγt mRNA及蛋白、IL-17A蛋白表达水平升高(P<0.01),IL-10、TGF-β1蛋白表达水平降低(P<0.01),IL-6、IL-21阳性表达升高(P<0.01),IL-17A+Th17/FOXP3+Treg阳性表达面积比值升高(P<0.01).与模型组比较,电头针组和抑制剂组Zea-Longa评分、mNSS评分与神经行为学评分降低(P<0.01),脑梗死体积显著缩小(P<0.01),RORγt mRNA及蛋白、IL-17A蛋白表达水平降低(P<0.01,P<0.05),IL-10、TGF-β1蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01),IL-6、IL-21阳性表达降低(P<0.01),IL-17A+Th17/FOXP3+Treg阳性表达面积比值降低(P<0.01);而激动剂组以上指标的结果均呈相反趋势(P<0.01,P<0.05).与激动剂组比较,电头针+激动剂组Zea-Longa评分、mNSS评分与神经行为学评分降低(P<0.01),脑梗死体积显著缩小(P<0.05),RORγt mRNA及蛋白、IL-17A蛋白表达水平降低(P<0.01,P<0.05),IL-10、TGF-β1 蛋白表达水平升高(P<0.01,P<0.05),IL-6、IL-21阳性表达降低(P<0.05,P<0.01),IL-17A+Th17/FOXP3+Treg阳性表达面积比值降低(P<0.01).结论:下调RORγt的表达,促进IL-17A+Th17/FOXP3+ Treg比例恢复平衡可能是电头针缓解缺血性脑卒中炎性神经损伤的机制之一.

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)通过RORα/β-catenin信号对人胃癌MGC803 细胞迁移侵袭与上皮-间质转化(EMT)的影响.方法 MGC803 细胞实验分为MGC803 组、DADS组、SR1078 组、SR1078+DADS组.MTT检测细胞增殖能力;细胞划痕和Transwell实验分别检测细胞迁移与侵袭能力.Western blotting与免疫荧光检测RORα/β-catenin信号与EMT相关分子表达情况,免疫共沉淀检测RORα蛋白与β-catenin蛋白结合能力,相差显微镜观察细胞形态改变.结果 与MGC803 组比较,DADS组、SR1078 组细胞增殖能力分别呈时间依赖性降低(P<0.05);细胞迁移与侵袭能力降低(P<0.05);RORα蛋白与E-cadherin明显上调(P<0.05),而核内β-catenin、转化生长因子-β1、Rac1 与Vimentin表达下调(P<0.05);RORα与β-catenin结合明显减少(P<0.05);长梭形细胞减少,异型性降低(P<0.05).SR1078+DADS组的上述指标结果更明显(P<0.05).结论 DADS通过RORα/β-catenin信号抑制人胃癌MGC803 细胞增殖、迁移侵袭与EMT,提示DADS与SR1078 的作用相似.

本文主要探讨RORα激动剂SR1078对卵巢癌细胞的作用及其分子机制.采用MTS法检测N-[4-[2,2,2-三氟-1-羟基-1-(三氟甲基)乙基]苯基]-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(SR1078)对卵巢癌细胞HeyA8和Hey细胞活性的影响.通过流式细胞术检测SR1078对卵巢癌细胞HeyA8和Hey细胞周期和凋亡的影响.利用p53 siRNA或p53抑制剂PFT-α和PFT-β处理HeyA8和Hey细胞,流式细胞术检测干扰p53后对SR1078诱导卵巢癌细胞凋亡的影响.Western blot检测SR1078和p53 siRNA对p53蛋白表达的影响,以及p53抑制剂单独或联合SR1078对p53、p-p53及其调控的下游促凋亡蛋白Noxa表达的影响.实验结果显示,SR1078明显降低了HeyA8和Hey的细胞活性,且显著诱导HeyA8和Hey细胞凋亡;此外,SR1078能够上调p53和Noxa表达,而干扰p53能够显著抑制SR1078诱导卵巢癌细胞凋亡和Noxa的表达;综上所述,RORα激活剂SR1078通过活化p53信号通路诱导卵巢癌细胞凋亡.

目的:探讨RORα 在脂多糖所致小鼠巨噬细胞炎症反应过程中的表达变化与作用.方法:取小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs),加入100 ng/ml脂多糖(LPS)处理不同时间点后,利用荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测细胞中炎症因子白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α),以及RORα的转录水平变化,进一步利用Western blot检测RORα蛋白水平变化;分别采用RORα激动剂SR1078和拮抗剂SR3335预处理细胞24 h后,LPS处理2 h,利用ELISA法检测细胞上清中炎症因子IL-1β,TNF-α和IL-6的含量.结果:100 ng/ml LPS在不同时间点均可显著促进BM-DMs炎症因子IL-1β和TNF-α的转录水平表达(P<0.05),而在LPS处理1～12 h显著抑制了RORα的转录水平(P<0.05),同时蛋白表达水平也明显降低(P<0.05).与LPS处理组相比,S R1078预处理,可显著抑制炎症因子的释放,而S R3335进一步激活了细胞炎症因子的释放(P<0.05).结论:RORα对脂多糖所致小鼠巨噬细胞炎症反应具有调节作用.

[目的]观察RORα激动剂SR1078对人胃癌MGC803细胞增殖、迁移与侵袭的影响.[方法]实验分为10μmol/LSR1078处理MGC803细胞组与MGC803细胞组.Western blot与免疫荧光检测RORα表达,MTT检测细胞增殖;细胞划痕和Transwell实验分别检测细胞迁移与侵袭.[结果]Western blot检测显示,10μ mol/L SR1078处理组较对照组RORα蛋白明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫荧光显示,SR1078处理MGC803细胞RORα表达增强.MTT检测显示,10μmol/LSR1078作用MGC803细胞24h、48h、72h、96h后,增殖抑制率分别为37.2％、46.9％、52.7％、68.6％,SR1078可呈时间依赖性抑制MGC803细胞增殖(P＜0.05).划痕实验显示,10μmol/L SR1078处理组迁移距离(5.74±0.078μm)明显低于对照组(9.37±0.098μm),差异有统计学意义(P＜0.05).Transwell迁移实验显示,10μmol/L SR1078处理组迁移细胞(80±1.155个)较对照组(103±1.155个)明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05).侵袭实验显示,10μmol/LSR1078处理组细胞穿膜细胞(19.67±1.764个)较MGC803细胞(40.67±1.202个)明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]SR1078可通过上调RORα抑制MGC803细胞增殖与迁移侵袭.