目的 探讨siRNA沉默DJ-1基因体内外对人胃癌MGC803细胞的影响机制.方法 构建沉默DJ-1基因MGC803细胞;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、平板克隆、细胞划痕和侵袭实验检测沉默DJ-1基因对MGC803细胞增殖、克隆形成、迁移与侵袭的影响;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测DJ-1、PTEN、Akt、p-Akt、Snail、Vimentin、E-cadherin、基质金属蛋白酶9(MMP-9)与基质金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP3)的表达;相差显微镜观察DJ-1沉默对MGC803细胞形态学的影响;裸鼠实验检测DJ-1沉默对MGC803细胞移植瘤的影响.结果 分别用4组si-DJ-1及si-NC质粒转染MGC803细胞,其中si-DJ-1A组DJ-1 mRNA与蛋白表达下调较为显著(P＜0.001),则后续选用si-DJ-1A作为稳定沉默DJ-1基因MGC803细胞.MTT法检测结果显示,24、48和72 h后,si-DJ-1组增殖活性分别较MGC803对照组和si-NC组降低,均P＜0.001.克隆形成实验显示,si-DJ-1组克隆形成数较对照组与si-NC组减少,P＜0.001.划痕实验结果显示,si-DJ-1组迁移距离[(199.21±14.74)μm]较对照组[(302.62±17.70)μm]和si-NC组[(304.49+13.55)μm]缩短,P＜0.001.侵袭实验显示,si-DJ-1组侵袭细胞数[(44.80±5.10)个]较对照组[(83.80±5.80)个]和 si-NC 组[(82.80±5.80)个]减少,P＜0.001.与对照组和 si-NC 组相比,si-DJ-1 组 DJ-1 mRNA(F=18.350,P=0.003)、Snail mRNA(F=26.320,P＜0.001)、Vimentin mRNA(F=44.379,P＜0.001)与 MMP-9 mRNA(F=57.450,P＜0.001)下调,而 E-cadherin mRNA(F=94.529,P＜0.001)与 TIMP3 mRNA(F=16.480,P=0.004)上调;si-DJ-1 组 DJ-1(F=6.393,P=0.004)、p-Akt(F=12.980,P=0.007)、Snail(F=381.000,P＜0.001)、Vimentin(F=99.750,P＜0.001)与 MMP-9(F=126.800,P＜0.001)蛋白下调,而 PTEN(F=36.880,P＜0.001)、E-cadherin(F=181.000,P＜0.001)与TIMP3(F=217.800,P＜0.001)上调.相差显微镜显示,si-DJ-1组纤维母细胞样长梭形细胞肿瘤干细胞减少,圆形与椭圆形细胞增多,异型性下降.体内实验表明,si-DJ-1组移植瘤生长速度较对照组减慢,si-DJ-1 组移植瘤质量[(0.51±0.05)g]较对照组[(0.90±0.16)g]减小,t=5.273,P＜0.001.si-DJ-1 组较对照组 DJ-1、Ki-67、Vimentin和CD-34阳性表达降低,而PTEN和E-cadherin表达增强.结论 DJ-1沉默可通过PTEN/Akt通路体内外抑制MGC803细胞增殖、迁移、侵袭与上皮细胞-间充质转化.

目的:观察滋阴化痰方调控外泌体对小鼠胃癌皮下瘤的干预作用。方法:取对数生长期的第4代人胃癌细胞株MGC-803细胞，按随机数字表法分为外泌体对照组和低、高剂量组，低、高剂量组分别加入25、100 μg/ml的滋阴化痰方进行干预，48 h后提取各组MGC-803细胞分泌的外泌体。将20只BALB/c雄性小鼠按随机数字表法分为外泌体对照组、滋阴化痰方低剂量组、滋阴化痰方高剂量组和空白对照组，每组5只。除空白对照组外，其余各组小鼠分别经眼眶注射对应组细胞提取的外泌体，每只10 μg/次，隔日1次，共15次；空白对照组注射等量PBS。末次给药后以SGC-7901细胞接种小鼠建立肿瘤模型。观测小鼠体重及成瘤情况。采用免疫组化染色观察肿瘤组织血小板-内皮细胞黏附分子(platelet endothelial cell adhesion molecule-1, CD31)、VEGF、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFG)表达。结果:与空白对照组比较，滋阴化痰方高剂量组肿瘤重量[(170.00±10.00)mg比(343.33±20.82)mg]降低( P<0.05)，肿瘤CD31[(37.43±0.55)比(63.30±0.85)]、VEGF[(11.37±1.19)比(70.30±0.72)]、bFGF[(43.77±1.53)比(84.97±1.86)]表达均降低( P<0.05)。与外泌体对照组比较，滋阴化痰方低、高剂量组CD31、VEGF、bFGF表达均降低( P<0.05)。 结论:滋阴化痰方可调控外泌体抑制小鼠胃癌皮下瘤的生长，这种作用可能与抑制肿瘤血管新生有关。

目的:观察磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/基质金属蛋白酶(MMP)-9信号通路在芬太尼抑制人胃癌MGC-803细胞侵袭和迁移中的作用。方法:将人胃癌MGC-803细胞随机分为空白对照组(C组)、芬太尼组(F组)，LY294002组(LY组)，SB-3CT组(SB组)，LY294002＋芬太尼组(FLY组)和SB-3CT＋芬太尼组(FSB组)。Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭迁移能力，实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测MMP-9和Akt的mRNA和蛋白质的表达，使用方差分析和独立样本 t检验分析组间差异。 结果:F组胃癌细胞侵袭数低于C组(35.91±3.36比48.46±4.86， t＝3.679， P<0.05)、迁移数低于C组(74.75±3.76比96.00±5.20， t＝5.739， P<0.05)细胞迁移率(%)低于C组(14.29±4.29比22.43±3.37， t＝3.591， P<0.05)，Akt mRNA表达低于C组(0.77±0.02比1.00， t＝8.110， P<0.05)、MMP-9 mRNA表达低于C组(0.87±0.08比1.00， t＝2.967， P<0.05)、Akt-1蛋白表达低于C组(0.76±0.04比0.90±0.05， t＝3.940， P<0.05)和MMP-9蛋白表达低于C组(0.76±0.05比0.94±0.04， t＝4.774， P<0.05)，差异均有统计学意义。FLY组胃癌细胞侵袭数低于LY组(18.45±4.86比33.62±4.13， t＝4.999， P<0.05)、细胞迁移数低于LY组(42.79±3.56比71.79±7.60， t＝5.986， P<0.05)和细胞迁移率(%)低于LY组(7.52±1.30比11.02±1.73， t＝2.811， P<0.05)，FLY组Akt mRNA表达低于LY组(0.60±0.05比0.76±0.17， t＝3.468， P<0.05)、MMP-9 mRNA表达低于LY组(0.75±0.06比0.88±0.03， t＝3.288， P<0.05)、Akt-1蛋白表达低于LY组(0.60±0.02比0.75±0.05， t＝4.783， P<0.05)和MMP-9蛋白表达低于LY组(0.48±0.03比0.74±0.06， t＝7.266， P<0.05)，差异均有统计学意义。FSB组胃癌细胞侵袭数低于SB组(18.67±2.15比32.33±6.20， t＝3.607， P<0.05)、细胞迁移数低于SB组(45.67±4.63比75.04±4.47， t＝7.898， P<0.05)和细胞迁移率(%)低于SB组(7.09±1.69比14.39±2.06， t＝4.745， P<0.05)，FSB组Akt mRNA表达低于SB组(0.53±0.11比0.76±0.07， t＝2.950， P<0.05)、MMP-9 mRNA低于SB组表达(0.63±0.07比0.84±0.01， t＝3.687， P<0.05)、Akt-1蛋白表达低于SB组(0.61±0.03比0.75±0.04， t＝4.573， P<0.05)和MMP-9蛋白表达低于SB组(0.53±0.07比0.72±0.05， t＝3.730， P<0.05)，差异均有统计学意义。芬太尼可降低细胞侵袭和迁移能力，MMP-9和p-Akt表达减少，且芬太尼联合LY294002或SB-3CT较单独用药时进一步加强了抑制效果。 结论:芬太尼抑制人胃癌MGC-803细胞侵袭和迁移的机制与抑制PI3K/Akt/MMP-9信号通路有关。

目的:探讨微小RNA(microRNA，miRNA)-6751-3p表达对胃癌细胞增殖和迁移的影响及其分子机制。方法:采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胃癌细胞株(MGC803、BGC823、SGC7901、HS-746T)和正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)中miR-6751-3p的表达水平。将miR-6751-3p表达水平最低的胃癌细胞株分为对照组和实验组，分别转染miR-NC和miR-6751-3p模拟物。qRT-PCR检测两组细胞miR-6751-3p的表达水平。分别采用CCK-8法和划痕愈合实验检测miR-6751-3p过表达细胞的增殖和迁移情况。通过Deepbase v2.0和microRNA.org在线网站预测miR-6751-3p的潜在靶基因，采用双荧光素酶报告基因实验进行验证。qRT-PCR和Western blot检测miR-6751-3p过表达细胞靶基因的表达。结果:与正常胃黏膜上皮细胞相比，miR-6751-3p在胃癌细胞株中表达明显下调( P<0.05)，表达水平最低的细胞株是MGC803细胞( P<0.01)。与对照组相比，miR-6751-3p过表达可抑制MGC803细胞的增殖能力( P<0.05)。对照组和实验组MGC803细胞划痕愈合率分别为(65.14±5.65)%和(23.40±6.78)%。与对照组相比，实验组MGC803细胞划痕愈合率显著降低( t＝4.73, P<0.001)。在线网站预测miR-6751-3p的靶基因可能是脂肪酸结合蛋白5(FABP5)，miR-6751-3p可互补结合FABP5信使RNA(mRNA)( P<0.01)。与对照组相比，miR-6751-3p过表达可抑制MGC803细胞中 FABP5基因的表达( t＝4.01, P<0.01)。 结论:胃癌细胞株中miR-6751-3p呈低表达，miR-6751-3p过表达可通过下调 FABP5基因能抑制胃癌MGC803细胞增殖和迁移能力。

目的:观察微小RNA(miR)-1-3p在胃癌(GC)细胞和组织中的表达，探讨miR-1-3p对GC细胞增殖侵袭能力的影响及可能的分子调控机制。方法:收集2014年1月至2015年6月在兰州大学第一医院行手术治疗的82例GC患者组织标本和癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-1-3p在GC组织及癌旁组织、人GC细胞系(MKN-45、BGC823、AGS、MGC803、SGC7901)和人胃黏膜上皮细胞(GES-1)中的表达水平。分析miR-1-3p表达水平与GC患者临床病理特征参数及预后的相关性，用克隆形成实验和Transwell侵袭实验分别检测miR-1-3p的表达水平对GC细胞增殖侵袭能力的影响。采用生物信息学和荧光素酶报告基因实验验证miR-1-3p与B细胞淋巴瘤/白血病-2相关永生基因4(BAG4)的靶向调控关系。结果:miR-1-3p在GC组织中的相对表达量 (0.815±0.060)低于癌旁组织 (1.604±0.140， t＝5.922， P<0.01)，其表达水平与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期密切相关(均 P<0.05)。miR-1-3p低表达组患者的总生存率低于高表达组[风险比( HR)＝0.519，95%可信区间( CI)：0.259~0.953， P<0.05)。过表达miR-1-3p组GC细胞的增殖和侵袭能力显著低于对照组( t＝9.089， P<0.01)，敲低miR-1-3p后得到了与之相反的结果( t＝8.783， P<0.01)。BAG4是miR-1-3p潜在的靶基因。下调miR-1-3p可逆转si-BAG4对GC细胞增殖和侵袭能力的作用。 结论:miR-1-3p通过靶向BAG4的表达调控GC细胞的增殖侵袭。

目的:探讨微小RNA(microRNA)-4320对胃癌MGC803细胞增殖、迁移的影响及机制。方法:分别采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-4320在4种胃癌细胞株(MGC803、HS-746T、SGC7901、BGC823)中的表达情况。将携带miR-4320干扰片段的重组慢病毒和空白慢病毒感染MGC803细胞，设为si-miR-4320组和NC组。噻唑蓝比色法和Transwell小盒实验分别检测下调miR-4320后MGC803细胞增殖和迁移情况。生物信息学软件RNAhybrid预测miR-4320目的基因。通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-4320与目的基因的靶向关系。分别采用qRT-PCR和Western blot检测miR-4320目的基因的表达。计量数据以均数±标准差( ± s)表示，组间比较应用 t检验或单因素方差分析。 结果:4种胃癌细胞株miR-4320的表达均显著高于正常胃黏膜上皮细胞( P<0.01)。NC组和si-miR-4320组MGC803细胞中miR-4320表达分别为8.19±1.00和1.09±0.31，miR-4320干扰片段显著降低miR-4320的表达( P<0.01)。si-miR-4320组MGC803细胞的吸光度明显低于NC组( P<0.05)，迁移能力明显低于NC组( P<0.01)。细胞因子信号抑制因子( SOCSI)是miR-4320的目的基因( P<0.01)。与NC组相比，si-miR-4320组SOCS1基因表达明显上调( P<0.01)。 结论:miR-4320在胃癌细胞株中表达升高，下调miR-4320的表达能够通过诱导SOCS1基因表达，抑制胃癌MGC803细胞的增殖及迁移能力。

目的:探讨过氧蛋白同源物(PXDN)基因对人胃癌MGC803细胞生长和侵袭迁移能力的影响及其机制。方法:收集从2019年4月到2019年6月期间福建医科大学附属第二医院胃肠外科确诊为胃癌的未经过放疗和化疗的手术标本及配对的癌旁组织，各10例。通过癌症肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库筛选与胃癌相关的突变基因，并通过筛选GEO数据库中与胃癌相关的RNA测序数据集(GSE122796)分析突变基因的差异表达状况。收集临床上未经放、化疗的胃癌组织及配对的癌旁组织各10例，采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法和蛋白质印迹法(Western blot)检测PXDN在癌旁组织和胃癌组织中的表达。通过Western blot检测PXDN在4种人胃癌细胞株的表达。构建小干扰RNA沉默PXDN的表达，将培养的细胞随机随机分为NC-SiRNA组(转染阴性对照组)和PXDN-SiRNA组，并采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、划痕实验、Transwell法，检测MGC803细胞的增殖、侵袭和迁移的变化。此外，Western blot检测Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的改变。应用SPSS 22.0统计软件分析，采用 t检验或单因素方差进行分析。 结果:TCGA与GEO数据库显示PXDN是胃癌发病相关的高突变率(15.4%)及显著差异基因[Log2 FC＝2.83±0.72，padj＝0.031， P<0.05]。RT-qPCR和Western blot结果显示PXDN在胃癌组织表达量明显上调[(0.92±0.12)比(0.61±0.09)、(1.65±0.23)比(1.00±0.25)， t＝12.680、17.520， P<0.05]，差异有统计学意义。Western blot检测PXDN在MGC803细胞株表达量较其他细胞株高( F＝23.810， P<0.05)，差异有统计学意义。沉默PXDN基因可显著抑制MGC803细胞的增殖[吸光度( A)值：(0.62±0.05)比(1.05±0.08)， t＝7.740， P<0.05]、迁移[(41.25±5.67)个比(85.23±4.28)个， t＝21.120， P<0.05]、侵袭[(42.47±3.98)个比(86.16±4.19)个， t＝20.090， P<0.05]，差异有统计学意义。此外，沉默PXDN后，糖原合成酶激酶-3β(Gsk-3β)蛋白表达水平显著上调，β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白(Cyclin) D1表达水平显著下降( t＝12.590， P<0.05)，差异有统计学意义。 结论:PXDN显著促进MGC803细胞增殖、侵袭和迁移能力，其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。

目的:观察盐酸氢吗啡酮对人胃癌MGC-803、SGC-7901和AGS细胞增殖活性的影响。方法:2019年1月至8月，将人胃癌MGC-803、SGC-7901或AGS细胞(购自中国科学院上海细胞生物研究所)接种于96孔板中，随机分为6组( n＝6)：对照组(C组)、50 μmol/L氢吗啡酮组(H1组)、100 μmol/L氢吗啡酮组(H2组)、200 μmol/L氢吗啡酮组(H3组)、400 μmol/L氢吗啡酮组(H4组)、800 μmol/L氢吗啡酮组(H5组)。应用SPSS 24.0统计软件分别于孵育24、48、72 h时测定细胞活力，计算半数抑制浓度(IC 50)和细胞存活率。 结果:与C组比较，随着药物浓度的增加、孵育时间的延长，氢吗啡酮明显抑制MGC-803、SGC-7901和AGS 3种胃癌细胞的增殖( P<0.05)；H4组MGC-803、SGC-7901和AGS细胞孵育72 h时的吸光度值分别为0.45±0.01、0.98±0.08、2.13±0.16，均小于C组(0.78±0.02、1.36±0.01、2.51±0.23， F＝13.129、15.761、17.458， P<0.05)。孵育72 h时显示，随着氢吗啡酮浓度的增加，胃癌MGC-803、SGC-7901和AGS细胞的生存率明显降低( P<0.05)，H4组MGC-803、SGC-7901和AGS细胞的生存率分别为(57.43±4.76)%、(71.92±6.76)%、(85.73±1.65)%，明显低于C组的100%( F＝8.854、7.872、12.531， P<0.05)；根据72 h生存率计算半抑制浓度(IC 50)，氢吗啡酮对MGC-803、SGC-7901或AGS细胞的IC 50分别为439.38、517.41、644.49 μmol/L。 结论:盐酸氢吗啡酮可以抑制胃癌MGC-803、SGC-7901或AGS细胞的生长增殖。

目的:探究微小RNA-140-5p(miR-140-5p)通过靶向调控组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)基因表达在胃癌转移中的作用及机制。方法:收集2020年4月至2020年10月齐齐哈尔医学院附属第三医院院胃癌患者手术切除癌组织以及癌旁组织(52例)；细胞实验对象为购买人胃正常上皮黏膜细胞系GES-1和胃癌细胞系MGC-803、SGC-7901和HGC-27。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)以及蛋白质印迹法(Western blot)检测胃癌患者肿瘤组织中HDAC4的表达。在线网站Targetscan预测HDAC4上游调控miRNA。双荧光素酶报告实验验证miR-140-5p和HDAC4的靶向关系。胃癌细胞依据不同转染处理分组为si-NC组、si-HDAC4组、mimic-NC组、miR-140-5p mimic组、inhibitor-NC组和miR-140-5p inhibitor组。采用RT-qPCR检测胃癌细胞miR-140-5p的表达，Western blot检测HDAC4蛋白表达。Transwell实验检测细胞迁移和侵袭；流式细胞术检测细胞凋亡，组间比较采用 t检验。 结果:胃癌组织中的HDAC4的mRNA和蛋白表达高于癌旁组织(1.024±0.099比1.512±0.065；0.916±0.160比1.734±0.289， t＝29.71、17.86，均 P<0.05)。在胃癌细胞中miR-140-5p与HDAC4存在结合位点，双荧光素酶报告实验验证miR-140-5p结合在HDAC4的3’端非编码区(3’UTR)(0.986±0.050比0.436±0.039， t＝15.02， P<0.05)。胃癌细胞中miR-140-5p表达显著低于正常细胞(1.021±0.054比0.362±0.029， t＝18.62， P<0.05)。miR-140-5p mimic组细胞迁移(180.000±5.890比54.000±3.230， t＝32.49， P<0.05)和侵袭(94.000±5.430比43.000±3.420， t＝13.77， P<0.05)能力显著低于mimic-NC组，而凋亡能力显著高于mimic-NC组(11.250±1.560比30.240±3.550， t＝8.48， P<0.05)；miR-140-5p inhibitor组细胞迁移(192.000±6.000比284.000±8.430， t＝15.37， P<0.05)和侵袭(89.000±5.110比153.000±6.990， t＝12.80， P<0.05)能力显著高于inhibitor-NC组，而凋亡能力显著低于inhibitor-NC组(13.200±1.620比5.350±1.000， t＝7.14， P<0.05)。miR-140-5p mimic+Jagged1/FC组细胞迁移(60.000±3.430比196.000±7.230， t＝29.44， P<0.05)和侵袭(48.000±3.750比97.000±4.890， t＝13.77， P<0.05)能力显著高于miR-140-5p mimic+DMSO组，而细胞凋亡能力显著低于miR-140-5p mimic+DMSO组(28.950±3.240比12.050±1.430， t＝8.27， P<0.05)。 结论:胃癌细胞的miR-140-5p上调表达可通过抑制HDAC4/Notch信号轴进而抑制胃癌转移进程。

目的:通过检测分析胃癌细胞中circ_0009910表达，初步探讨其在胃癌细胞中的作用机制。方法:用qRT-PCR检测胃癌细胞系BGC823、SGC7901、AGS、MGC803、MKN45中的circ_0009910表达水平，在BGC823、AGS细胞中采用circ_0009910 siRNA转染敲降circ_0009910，验证转染效果；在circ_0009910敲降的BGC823、AGS细胞中，用MTT法检测细胞增殖、平板法检测集落形成、Transwell检测迁移和侵袭、western-blotting检测上皮间质转化(EMT)，采用SPSS 18.0软件进行统计学分析。结果:BGC823、SGC7901、AGS、MGC803、MKN45中的circ_0009910相对表达水平为(7.238±0.895)、(5.023±0.786)、(4.184±0.356)、(8.561±1.026)、(3.478±0.301)，较正常胃癌显著升高( P<0.01)，siRNA转染敲降circ_0009910后，BGC823、AGS细胞活力、集落形成数目、迁移和侵袭能力与对照组相比均明显降低( P<0.01)，N-cadherin、Snail蛋白的相对表达降低，而E-cadherin表达增加。 结论:circ_0009910在胃癌细胞中高表达，可促进胃癌细胞增殖、集落形成、迁移和侵袭及EMT。