目的:基于TLR4/p38MAPK/AP-1信号通路探讨心痛泰对兔动脉粥样硬化和血管重构的影响.方法:日本大耳白兔120只随机分为空白组,模型组,心痛泰低、中、高剂量组和瑞舒伐他汀组.采用前瞻性实验研究,造模的同时给予药物灌胃.8周后取胸主动脉,免疫组化法测定白介素-8(IL-8)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1);Masson染色观察胶原分解和平滑肌纤维;测定胸主动脉最大内膜厚度(MIT)、最小管腔直径(MLD)、管腔面积(LA)、内弹力膜围绕面积(IELa)、外弹力膜围绕面积(EELa),计算内膜面积(IA)、中膜面积(MA)、管腔狭窄百分比(LS);Western Blot法测定胸主动脉组织Toll样受体-4(TLR4)、丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、转录激活因子(AP-1)的蛋白表达.结果:与模型组比较,心痛泰各剂量组、瑞舒伐他汀组IL-8、MCP-1、MMP-9含量显著降低(P＜0.01),TIMP-1含量显著升高(P＜0.05,P＜0.01),TLR4、p38MAPK、AP-1的蛋白表达显著降低(P＜0.05,P＜0.01);与心痛泰低剂量组比较,心痛泰高剂量组及瑞舒伐他汀组IL-8、MCP-1、MMP-9显著降低(P＜0.01),TIMP-1升高(P＜0.01),TLR4、p38MAPK、AP-1的蛋白表达显著降低(P＜0.01).与模型组比较,心痛泰各剂量组、瑞舒伐他汀组的IA、MA、LS均显著降低(P＜0.01).与心痛泰低剂量组比较,心痛泰中、高剂量组和瑞舒伐他汀组的IA、MA、LS均显著降低(P＜0.01).Masson染色显示,模型组管壁变薄,胶原分解增多,平滑肌纤维排列紊乱,管腔直径扩大,管腔内血栓形成;与模型组比较,心痛泰各剂量组和瑞舒伐他汀组动脉管壁胶原纤维分解减少,平滑肌细胞排列较为整齐,管腔、管壁结构有所改善.结论:心痛泰可能是通过调控TLR4/p38MAPK/AP-1信号通路及下游的细胞因子,减少血管胶原分解、抑制纤维细胞增生,改善动脉粥样硬化和血管重构.

目的:研究小檗碱(BBR)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导ANA-1细胞炎性应答的影响及潜在的作用机制.方法:对数增长期的ANA-1细胞按照随机数字表法平均分为对照组、荧光抗体组、模型组、低剂量BBR组、中剂量BBR组、高剂量BBR组、抑制剂组.对照组、荧光抗体组均加入2.5μL二甲基亚砜(DMSO);模型组加入浓度为1μmol/L AngⅡ工作液;低、中、高剂量BBR组分别加入浓度为1、5、10μmol/L BBR工作液;抑制剂组加入浓度为10μmol/L TAK242工作液.采用细胞增殖与毒性检测实验(CCK-8)方法检测不同浓度的BBR对细胞活力的影响;采用流式细胞术检测细胞膜表面TLR4的平均荧光强度(MFI);采用ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;采用实时定量PCR法检测IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平;采用Western blot检测p-ERK/ERK、p-p38/p38、p-JNK/JNK、p-p65/p65、p-IRF3/IRF3的磷酸化及TLR4、MyD88、AP-1的表达情况;采用生化法检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力.结果:①CCK-8法检测结果:与对照组比较,低、中、高剂量BBR组细胞活性均无明显区别,差异无统计学意义(P>0.05).②流式细胞术检测结果:与荧光抗体组比,模型组MFI明显减弱;与模型组比较,模型+高剂量BBR组MFI明显增强,差异具有统计学意义(P<0.05).③ELISA检测结果:与对照组比较,模型组IL-1β、IL-6、TNF-α的含量明显升高;与模型组比较,模型组+低、中、高剂量BBR组IL-1β、IL-6、TNF-α含量均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05).④实时定量PCR法检测结果:与对照组比较,模型组IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平明显升高;与模型组比较,模型组+低、中、高剂量BBR组IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05).⑤Western blot结果:与对照组比较,模型组处理45 min后p65、IRF-3蛋白的磷酸化表达明显升高,模型+低、中、高剂量BBR组p65、IRF-3蛋白的磷酸化表达明显下降.与对照组比较,模型组处理15 min后ERK、p38蛋白磷酸化表达明显升高,处理30 min后JNK蛋白的磷酸化表达明显升高,处理45 min后p65、IRF-3蛋白的磷酸化表达明显升高,而模型+高剂量BBR组与模型+抑制组p65、IRF-3、ERK、p38、JNK蛋白的磷酸化表达均明显下降.与对照组比较,模型组处理12 h后TLR4、MyD88、AP-1蛋白的表达以及p65、IκBα、JNK蛋白的磷酸化表达明显升高,模型+低、中、高剂量BBR组TLR4、MyD88、AP-1蛋白的表达以及p65、IκBα、JNK蛋白的磷酸化表达均明显下降.与对照组比较,模型组处理12 h后TLR4、p-p65的表达明显升高,而模型+高剂量BBR组、模型+抑制剂组、模型+抑制剂+高剂量BBR组的TLR4、p-p65蛋白的表达均明显下降.⑥生化检测结果:与对照组比较,模型组MDA含量明显升高,SOD活力明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05),模型+低、中、高剂量BBR组MDA含量明显下降,SOD活力明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:BBR能够调控TLR4信号通路,抑制由AngⅡ诱导TLR4信号通路的异常激活和NF-κB、MAPK信号转导,降低促炎因子的水平,调控炎性应答;此外,BBR还能够改善AngⅡ诱导ANA-1细胞的脂质过氧化程度及抗氧化能力,降低AngⅡ造成的氧化应激损伤,保护ANA-1细胞.