目的:开发用于甲型流感病毒快速分型的Taqman低密度芯片(Taqman low density array，TLDA)，可以同时开展甲型流感病毒通用、H1-H16及N1-N9亚型高通量快速鉴定，适用于流感样病例及禽流感标本中甲型流感病毒的快速分型鉴定。方法:设计甲型流感病毒通用、H1-16亚型、N1-9亚型的引物探针，并将其预先定制在TLDA反应芯片上；优化TLDA退火温度；用多种亚型的甲型流感病毒核酸进行10倍梯度稀释，结合微滴式数字PCR定量方法评价TLDA检测灵敏度；用乙型流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞等其他多种常见的呼吸道病毒验证该TLDA检测特异性，同时选用多种已经明确分型的甲型流感病毒评价该TLDA的特异性和有效性；采集16例流感样病例标本及24例禽流感外环境标本用该芯片开展检测。结果:该TLDA的最佳退火温度为60 ℃；针对甲型流感病毒H1N1、H3N2、H5N6、H7N9和H9N2，其检测灵敏度为1.52~8.00拷贝/μl；能特异性检测甲型流感病毒，与其他常见呼吸道病毒无交叉反应，并能精准鉴定多种甲型流感病毒的亚型；应用该方法检测16例流感样病例标本和24例禽流感外环境监测标本，均可分型。结论:基于TLDA技术建立的甲型流感病毒高通量快速分型检测方法具有较好的灵敏度和特异性，适用于流感样病例和禽流感标本的病原快速检测，特别是对目前用常规商业化试剂尚无法鉴定的新型甲型流感病毒能够进行快速的亚型筛查与鉴定。

目的 使用Taqman低密度微流体芯片技术(TAC)建立顺义区多种呼吸道传染病病原体构成谱,为制定有效防控措施提供依据.方法 利用Taqman低密度微流体芯片技术,对2017年收集的372份呼吸道感染病例标本进行42种呼吸道传染病病原体的检测.结果 372份呼吸道感染患者病例标本共检出16种病原体,检出阳性病原体125例,阳性率为33.6％(125/372).在所检出的病原体构成谱中,肺炎支原体检出阳性率最高;其次为流感病毒及肺炎链球菌,肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌等其他病原体也有检出,并随着年龄和季节变化感染病原体有一定的流行规律.结论 肺炎支原体、流感病毒、肺炎链球菌是顺义区呼吸道感染病的主要病原体,今后应继续加强病原学的监测,注重病原体在不同人群、季节感染分布以及防治工作.

目的 探究血清微RNAs(miRNAs)水平检测在尘肺筛查中的作用,建立用于尘肺诊断的多个血清miRNAs联合应用模型.方法 选取天津市工人疗养院就诊的152例男性尘肺患者作为病例组;正常对照组选取同社区健康体检人员152人,体检合格,无接触含游离二氧化硅的矿物粉尘,无心血管、肝肾等器质性病变以及肺部其他疾病.用TaqMan低密度芯片(TaqMan low density array)方法筛选出候选可作为尘肺早期筛查的miRNAs标志物,并采用RT-qPCR方法在152例尘肺较大样本中进行验证.根据曲线下面积(AUC)考察候选指标的灵敏度和特异性,采用二分类logistic回归模型前进法逐步回归建立尘肺和正常人群中诊断尘肺的logistic回归模型.结果 与对照组比较,miRNA-204、miRNA-206、miRNA-21、miRNA-16、miRNA-29a、miRNA-155、miRNA-200c 7个候选miRNAs在尘肺患者血清中的表达差异均有统计学意义(P＜0.05);分析上述7个miRNAs的受试者工作曲线(ROC)显示,miRNA-21、miRNA-200c、miRNA-16、miRNA-206、miRNA-155、miRNA-29a有统计学意义,其ROC-AUC为0.629～0.932.建立尘肺和正常人群中诊断尘肺的logistic回归模型:logitP=13.769+0.536×miRNA-21-0.878×miRNA-200c-0.012×miRNA-16-0.111×miRNA-206+0.117× miRNA-155-1.192×miRNA-29a.该回归模型在尘肺和正常人群中诊断尘肺ROC-AUC为0.980(95％CI:0.970～0.993,P＜0.01).结论 多个血清miRNAs联合应用模型可能用于尘肺患者的诊断.

目的:分析144例女性子宫内膜癌微小RNA(microRNA,miRNA)的表达特点,对比其在维吾尔族与汉族女性子宫内膜癌中的表达差异及其与临床病理特点的内在关联性,阐述临床意义.方法:144例维吾尔族与汉族女性(包括62例维吾尔族和82例汉族),采用Taqman低密度芯片对比两者子宫内膜癌miRNA的表达特点,选取5种miRNA,采用实时定量PCR法验证并分析这些miRNA的表达特点.结果:miRNA表达谱分析显示,Ⅱ型癌突出的特点是许多miRNA在一个民族中表达升高或降低,而在另一个民族中不表达或变化轻微.144例女性的子宫内膜癌miR-141、miR-200a、miR-205表达均升高,维吾尔族女性I型癌miR-141/200a表达升高的肿瘤更具侵袭性,而汉族女性I型癌的特点相反,miR-200a表达升高的肿瘤侵袭性呈减弱趋势,但Ⅱ型癌miR-200a表达升高的肿瘤趋向更具侵袭性.miR-145、miR-143在维吾尔族与汉族女性子宫内膜癌中的表达特点相反,在维吾尔族表达升高,在汉族显著降低(P＜0.05).维吾尔族中Ⅱ型癌miR-145、miR-143升高更明显,侵袭性相对弱的肿瘤的miR-145表达水平更高,肌层浸润深度＜ 1/2组差异有统计学意义(P =0.042).汉族女性I/Ⅱ型癌中miR-145和miR-143的表达均降低,侵袭性强的I型癌中两者降低得更明显,但差异无统计学意义;Ⅱ型癌不具此特点.结论:维吾尔族与汉族女性子宫内膜癌miRNA表达存在一定差异性,miR-141/200a/205在子宫内膜癌中普遍表达升高,但miR-141/200a在维吾尔族与汉族I/Ⅱ型子宫内膜癌中扮演的角色可能不尽相同.miR-145/143在维吾尔族与汉族女性子宫内膜癌中的表达特点相反,但可能均发挥抑癌作用.

目的 建立并评估基于微流控芯片(MC)技术检测布鲁氏菌(简称布氏菌)核酸的方法,以提高布鲁氏病(简称布病)的诊断能力.方法 设计MC核酸提取、PCR和DNA反向斑点杂交相结合的检测布氏菌DNA的全自动技术流程.设计微流控全自动核酸检测(MC-PCR)与基因测序符合性测试、与实时荧光定量核酸扩增检测(qPCR)、TaqMan探针法检测比较实验;评估MC-PCR法检测布氏菌的重复性、准确性、特异性、最低检出限.结果 研究组与对照组核酸溶解曲线图纵坐标峰值所对应的横坐标一致,呈现单一的溶解峰,温度相同,表示为相同的扩增产物.核酸不同提取方法之间Ct值差异有统计学意义(P<0.05).经两两比较,NaI(机提)的Ct值低于AXYGEN、天净沙、济凡、NaI(手提),差异有统计学意义(P<0.05);NaI(机提)的Ct值与全式金、天根、德诺杰亿差异无统计学意义(P>0.05).基因测序的Kappa值为0.659,与MC-PCR具有高度的一致性,MC-PCR与基因测序阳性结果符合率100％,总符合率82.5％.准确性:结果符合率为100％;特异性:结果阴性率100％;重复性:结果均可以检出布氏菌;检出限:浓度为825 copies/mL时,MC-PCR与qPCR、TaqMan探针法检出率差异有统计学意义(x2=24.699,P<0.05),经两两比较,MC-PCR检出率高于qPCR和TaqMan探针法.精密度:结果均可以检出布氏菌.结论 MC-PCR检测布氏菌核酸的检测方法安全、快捷、及时、精准,可以应用于临床.这将提高布病诊断率,对布鲁氏菌病的防治起到重要作用.

目的 探讨外泌体微小RNA(miR)-133a在透明细胞肾细胞癌(ccRCC)中的表达及临床意义.方法 收集2015年9月至2019年1月在我院行根治性肾切除术的293例ccRCC患者的血清样本,另外收集200例健康体检者的血清样本作为对照组.提取血清及组织外泌体总RNA,采用TaqMan低密度芯片(TLDA)鉴定差异表达的miRNA,并通过实时荧光定量PCR(qPCR)进行验证.随访患者的总生存期(OS)和无病生存期(DFS).结果 与健康对照组血清和癌旁正常组织比较,TLDA筛选得到3个在ccRCC患者血清外泌体和肿瘤组织中差异表达的miRNAs(miR-133a、miR-210、miR-7-1).qPCR证实外泌体miR-133a表达在ccRCC患者中显著下调(P<0.001).ccRCC患者外泌体miR-133a表达与肿瘤组织表达呈正相关(r=0.467,P<0.001).受试者工作特征(ROC)曲线证实血清外泌体miR-133a诊断ccRCC曲线下面积(AUC)为0.78(95％CI:0.747～0.729).术前血清外泌体miR-133a表达与TNM分期、Fuhrman分级有关(P<0.05),与肾功能指标无关(P>0.05).术前血清外泌体miR-133a高表达患者的DFS和OS均长于低表达者(P<0.001).Cox风险比例回归分析显示血清外泌体miR-133a是影响ccRCC患者OS的独立预后因素[HR=0.486(95CI:0.226～1.043);P=0.034].结论 血清外泌体miR-133a与ccRCC的发生、发展及预后密切相关,可能是预测ccRCC患者预后的生物标志物.