目的 预测广州地区人巨细胞病毒(HCMV)临床低传代UL144基因B细胞表位.方法 应用生物信息学方法,改进型自我优化预测结构(SOPMA),Garnier-Osguthorpe-Robson (GOR),人工神经网络预测法(HNN)预测二级结构,隐马尔可夫模型(TMHMM)预测跨膜结构,分别用Hopp&Woods、Zimmerman、Janin、Welling、Flexibility预测亲水性、极性、可及性、抗原性、柔韧性.结果 预测HCMV UL144编码产物包含176个氨基酸残基,等电点为8.97.二级结构预测结果显示:3-转角及无规则卷曲主要位于31-42、57-63、71-78、87-93、96-100、127-131氨基酸区域.TMHMM预测UL144氨基酸序列为一次跨膜蛋白,其跨膜区域为134-156氨基酸区域,胞外及胞内区域分别为:1-133、157-176氨基酸区域.亲水性位于39-47、108-117、124-131、157-164区域;表面可及性区域为22-30、39-50、94-103、105-132、156-164;极性区域位于17-37、39-54、69-77、81-89、94-104、106-136、156-164;抗原性区域位于21-26、97-102、107-125、127-136;柔韧性区域位于27-47、56-71、85-95、101-106、108-118、123-131、156-172.结论 综合各项参数,UL144基因106-125、94-102、21-30氨基酸区域抗原指数(AI)较高,预测该区域内或其附近为B细胞表位的位点.

目的 利用带有多个启动子的质粒pGenesil10-3p,构建针对HSV-2靶基因UL27和UL54的双短发卡RNA(Duo-shRNA)表达载体,探讨双shRNA表达载体对双靶基因的干扰作用以及对HSV-2病毒增殖的影响.方法 Duo-shRNA通过脂质体转染HEK293细胞后接种HSV-2,采用四唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率,终点滴定法检测细胞上清液中病毒滴度,QPCR(Quantitative Real-time PCR,QPCR)检测对靶基因mRNA的抑制率,蛋白质印迹(Western blot,WB)检测靶蛋白的表达量.结果 结果表明Duo-shRNA对于细胞存活率、抑制HSV-2复制以及干扰靶基因表达方面都优于单-shRNA,可以达到多个单基因-shRNA联合作用的干扰效果.结论 利用双启动子的方法构建了针对HSV-2的UL27和UL54的shRNA质粒表达载体,更好的抑制HSV-2病毒靶基因mRNA表达水平以及病毒在HEK293细胞中增殖,实现了多个单基因的shRNA干扰效应的相互作用.

土贝母苷甲(Tubeimoside 1,TBMS1),简称苷甲,是一种独特的,由贝号苷元和4种单糖(葡萄糖、鼠李糖、木糖和阿拉伯糖)组成的五环三萜皂苷.以前的研究证实,苷甲具有抗人免疫缺陷病毒的活性.本文研究苷甲对单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus,HSV)1型和2型增殖和基因组复制的影响.从土贝母块茎中提取、分离苷甲(在本实验中使用的纯度大于95％),以空斑法测定病毒滴度,通过观察致细胞病变效应和空班形成抑制试验来检测苷甲的抗病毒活性,用实时定量PCR技术检测苷甲对HSV-1和HSV-2基因组复制的影响.结果 显示,苷甲显著抑制HSV-1和HSV-2毒株的增殖,显著抑制HSV-1和HSV-2的UL27、UL52和UL54三个基因的拷贝数,且其抑制作用呈明显量效依赖关系.无毒高浓度(0.39μg/mL ～ 0.78μg/mL)的苷甲对阿昔洛韦(acyclovir,ACV)耐药毒株HSV-1/106的增殖也显示抑制活性.本研究结果揭示苷甲具有显著抑制HSV-1和HSV-2增殖及基因组复制的活性,无毒高浓度苷甲对HSV-1/106耐药毒株的增殖也显示抑制活性.

目的 构建单纯痕疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)UL27和UL29双基因shRNA慢病毒表达载体,并检测其在HEK293细胞中的表达.方法 针对HSV-2 UL27、UL29基因,各筛选干扰效率最佳的shRNA片段相连接,构建双基因共表达慢病毒载体,并转染HEK293细胞作为干扰组,另设空白对照组(不做任何处理)和阴性对照组(转染不针对任何基因的慢病毒载体).转染48或24 h后接种HSV-2,RT-PCR和Western blot法检测各组细胞中目的基因mRNA和蛋白的表达水平,MTT法检测各组细胞的存活率.结果 干扰组UL27和UL29基因mRNA的表达抑制率可达(78.61±2.14)％和(84.86±1.52)％,同时gB和ICP8蛋白的相对表达量明显下降(P均＜0.05),细胞的存活明显率提高(P均＜0.05).结论 构建的HSV-2 UL27、UL29双基因shRNA重组慢病毒表达载体能在HEK293细胞中表达,为后续HSV-2的基因治疗奠定了实验基础.

为探讨单纯疱疹病毒-2型(Herpes simplex virus type 2,HSV-2)UL27、UL54基因的重组表达载体shRNA(small hairpin RNA,shRNA)联合干扰对HSV-2复制的影响,将重组质粒表达载体转染HEK293细胞,利用流式细胞术检测重组质粒转染HEK293的效率,实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)和蛋白免疫印迹(Western Blot)方法检测UL27、UL54基因及其蛋白的表达情况.此外,采用TICD50(50％tissue culture infective dose,TCID50)法和噻唑蓝(methyl thiazolyl terazolium,MTT)比色法检测病毒的滴度变化和HEK293细胞的存活率.结果检测显示:UL27 shRNA75+UL54shRNA1081联合干扰组的UL27、UL54基因mRNA的表达抑制率分别为(88.10±1.95)％和(85.53±2.28)％,gB蛋白、ICP27蛋白表达及子代病毒滴度均明显降低,HEK293细胞的存活率为(97.30±2.91)％,与单干扰组比较差异均有统计学意义(P<0.05).说明UL27shRNA75和UL54 shRNA1081这两个靶点联合干扰能显著抑制HSV-2在HEK293细胞中复制,为今后的HSV-2多基因的治疗提供研究基础.

目的 探讨延胡索酸水合酶(fumarate hydratase,FH)缺陷型子宫平滑肌瘤(fumarate hydratase-deficiency in uterine leio-myomas,FH-DUL)的临床病理学特征.方法 回顾性分析29例FH-DUL的临床病理学特征及免疫表型等,并复习相关文献.结果 患者年龄27～52岁,平均43岁.镜检:肿瘤有两种类型,经典型占62.1％(18/29),可见数量不等的核大深染细胞和局灶或多灶的奇异型细胞,有嗜酸性核仁及核周空晕;类似"普通型平滑肌瘤(usual leiomyomas,UL)"样型占37.9％(11/29),细胞轻度异型性,无明显嗜酸性大核仁.免疫表型:28例FH完全缺失,1例FH和29例2-琥珀酸-半胱氨酸(2-succino-cyste-ine,2SC)均弥漫阳性.1例行分子遗传学检测,未检测到FH基因胚系突变.29例均行手术切除,术后均无瘤生存.结论 FH-DUL属于子宫平滑肌瘤的罕见亚型,诊断依赖于临床影像学、病理形态学及免疫表型,必要时行FH基因检测辅助诊断,需与UL及其它子宫间叶源性肿瘤鉴别,治疗以手术切除为主,预后较好.