目的:探究人体中与结核分枝杆菌( Mycobacterium tuberculosis， Mtb)Rv1705c蛋白相互作用的蛋白质。 方法:原核表达Rv1705c蛋白基因，收集包涵体，裂解后透析纯化Rv1705c并测定其浓度，ELISA法检测细菌Rv1705c刺激巨噬细胞后细胞因子IFN-γ的分泌量，使用纯化并带有生物素标记的Rv1705c孵育人蛋白质组芯片HuProt?，筛选与Rv1705c相互作用的人类蛋白质，使用GenePix Pro 6.0软件对蛋白质芯片的信号图像进行数据提取，使用GO、KEGG等多个数据库进行生物信息学分析，GST pulldown验证Rv1705c与PSMA3、RSAD2的相互作用。结果:纯化结果显示，Rv1705c在包涵体中表达，Rv1705c刺激巨噬细胞后IFN-γ分泌量显著上升。芯片结果显示共筛选出了29个与Rv1705c相互作用的潜在阳性蛋白质，其中PSMA3、NLN、THOP1、UPF3A、RSAD2、OMG、PNKD、STEAP3、MED8共9个蛋白质的信噪比(signal-to-noise ratio，SNR)>1.6。进一步的生物信息学分析发现候选蛋白PSMA3、RSAD2、C1QBP参与固有免疫应答激活信号转导，并且PSMA3、RSAD2与干扰素存在交互作用，GST pulldown验证PSMA3、RSAD2与Rv1705c确有相互作用。结论:发现并验证PSMA3、RSAD2与Rv1705c存在相互作用，为 Mtb感染机制的研究提供参考。

目的:分析长链非编码RNA(lncRNA)ZFPM2-AS1在膀胱癌组织和细胞株中的表达，观察下调ZFPM2-AS1对膀胱癌细胞迁移和增殖的影响并探讨其分子机制。方法:实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测51对膀胱癌组织及癌旁组织、膀胱癌细胞株(J82、5637、BIU-87、T24)及人正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中ZFPM2-AS1的表达。选取表达最高的膀胱癌细胞，分别转染小干扰siRNA-ZFPM2-AS1质粒和阴性对照质粒，定义为实验组和对照组。qRT-PCR检测两组细胞ZFPM2-AS1的表达。Transwell迁移实验和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分别检测两组细胞迁移能力和增殖能力。qRT-PCR检测两组细胞中上游移码突变体1(UPF1)mRNA的表达。Western blot检测两组细胞中UPF1和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路蛋白的表达。结果:膀胱癌组织中ZFPM2-AS1的表达量明显高于癌旁组织( P<0.01)，膀胱癌细胞株中ZFPM2-AS1的表达量明显高于人正常膀胱上皮细胞( P<0.01)，BIU-87细胞中ZFPM2-AS1的表达量最高( P<0.01)。与对照组相比，实验组BIU-87细胞中ZFPM2-AS1表达量明显降低[(1.01±0.06) vs (0.16±0.04)， t＝12.28， P<0.01]。与对照组相比，实验组BIU-87细胞迁移能力降低( P<0.05)，从第2天开始BIU-87细胞增殖能力明显降低( P<0.05)。与对照组相比，实验组BIU-87细胞中UPF1 mRNA表达量明显降低[(1.00±0.02) vs (0.28±0.04)， t＝15.49， P<0.01]。Western blot结果提示，实验组BIU-87细胞中UPF1蛋白表达量降低( P<0.05)，mTOR、GRB2、IRS1和p-PI3K等mTOR信号通路蛋白表达量降低( P<0.05)。 结论:ZFPM2-AS1在膀胱癌组织和细胞株中高表达，下调ZFPM2-AS1可抑制BIU-87细胞的迁移能力和增殖能力，其分子机制可能与抑制UPF1基因表达有关。

目的:通过生物信息学方法探索与白癜风进展相关的信号通路和基因。方法:从GEO数据库中下载白癜风芯片检测数据集GSE75819，利用R语言软件中limma包的LMFit和eBayes函数筛选15例印度白癜风患者皮损与非皮损组织间的差异表达基因（DEG）。通过京都基因与基因组数据库（KEGG）、基因本体论（GO）分析和基因集富集分析（GSEA）评估DEG的富集途径和功能。通过蛋白-蛋白相互作用网络从DEG中筛选中心基因。2019年1 - 6月于新疆维吾尔自治区维吾尔医医院收集8例汉族寻常型白癜风患者皮损及非皮损皮肤组织标本，采用实时定量PCR法验证上述上调及下调差异最大的10个DEG的表达。结果:与15例非皮损组织相比，在15例白癜风皮损组织中共发现148个DEG，其中KRT9、CXCL10、C8ORF59、TPSAB1、RPL26为前5位上调基因，SILV、RPPH1、TYRP1、MLANA、LOC401115为前5位下调基因，且经实时定量PCR在8例汉族白癜风患者皮损及非皮损组织中验证。GO分析显示，DEG主要富集于翻译起始、细胞对脂多糖的反应、核糖体、核糖体亚基和核糖体的结构组成等。KEGG通路分析显示，DEG主要富集于酪氨酸代谢、PPAR信号通路、氧化磷酸化和Toll样受体信号通路。蛋白-蛋白相互作用分析筛选出UPF3B、SNRPG、MRPL13和RPL26L1 4个中心基因。结论:KRT9、CXCL10、C8ORF59、TPSAB1、RPL26、SILV、RPPH1、TYRP1、MLANA及LOC401115可能作为白癜风潜在的诊断标记分子和治疗靶点。

目的:探讨UPF1甲基化和miR-744-5p/CCND1在甲状腺乳头状癌中的作用机制研究.方法:将人甲状腺乳头状癌细胞株TCP-1和正常甲状腺上皮细胞Nthy-ori-3分别用去甲基化试剂5-Aza-CdR进行干预,分别在干预前后采用甲基化特异性PCR技术检测UPF1基因甲基化变化,采用Western-Blotting检测干预UPF1、DNMT1、miR-744-5p、CCND1蛋白相对表达,采用transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭情况.结果:PCR扩增显示,UPF1基因在Nthy-ori-3组仅出现非甲基化引物扩增条带(U条带),在TCP-1组仅出现甲基化引物扩增条带(M条带).经5-Aza-Cdr作用后,UPF1基因甲基化扩增条带减少,甲基化表达降低.各组UPF1、DNMT1、miR-744-5p、CCND1蛋白相对表达差异具有统计学意义(P＜0.05).与Nthy-ori-3组比较,TCP-1组DNMT1、UPF1蛋白相对表达明显提高,miR-744-5p、CCND1蛋白相对表达明显降低(P＜0.05);与TCP-1组比较,TCP-1干预组DNMT1、UPF1蛋白相对表达明显降低,miR-744-5p、CCND1蛋白相对表达明显提高(P＜0.05).与TCP-1组比较,TCP-1干预组细胞侵袭、迁移数量明显减少(P＜0.05).结论:UPF1甲基化存在于甲状腺乳头状癌中,UPF1基因甲基化的表达缺失可能抑制miR-744-5p/CCND1轴,在甲状腺乳头状癌发生发展中发挥关键作用.

目的 探讨上游移码蛋白1(UPF1)对人乳腺癌细胞AU565侵袭、迁移及上皮间充质转化(EMT)的影响及机制研究.方法 收集2021年9月—2022年3月于我院接受乳腺切除术43例乳腺癌患者新鲜癌组织及正常乳腺组织,制备石蜡块,免疫组织化学法检测UPF1表达情况.购置人乳腺癌细胞系AU565及人乳腺上皮细胞系DU4475,激光共聚焦扫描显微镜法测定UPF1水平.采用小干扰RNA(siRNA)技术构建UPF1低表达的重组细胞,分析转染siR-NA-UPF1对AU565细胞侵袭、迁移能力以及EMT相关蛋白表达和蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)信号通路的影响.结果 乳腺癌组织UPF1的吸光度值显著高于正常乳腺组织(P＜0.05).AU565细胞UPF1荧光强度显著大于DU4475细胞(P＜0.05).与siRNA-NC组比较,转染siRNA-UPF1后AU565细胞中UPF1蛋白及mRNA表达水平均显著降低(P＜0.05).与siRNA-NC组比较,转染siRNA-UPF1后AU565细胞穿膜率和细胞迁移率均显著增加(P＜0.05).转染siRNA-UPF1后AU565细胞E-candherin蛋白表达水平显著降低,Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平显著升高(P＜0.05).转染siRNA-UPF1后AU565细胞p-Akt和p-mTOR水平显著升高(P＜0.05).结论 UPF1在乳腺癌中表达上调,但沉默UPF1可能通过激活Akt/mTOR通路传导,促进乳腺癌细胞AU565的侵袭和迁移,并诱导EMT发生.

目的:提升急救效率,探索院前-院内急救转运医疗服务新模式.方法:利用 5G网络对原有重症救护车进行改造,在救护车内装载 5G脉搏一号,基于用户面功能锚点(UPF)对 5G网络进行弹性切片,实现与转运系统的稳定高效互联.结果:在物理终端层实现了心电、床旁监护仪参数快速数据采集,网络传输层实现了数据传输到院内急诊 5G抢救室,并同步到医院 5G指挥中心.结论:5G互联转运系统提升了院前急救的时效性,实现了院前-院内急诊救治一体化.

目的 制备小鼠上游移码因子1(UPF1)蛋白多克隆抗体并探讨脂肪细胞分化过程中UPF1蛋白的表达.方法 构建UPF1蛋白表达载体,制备并纯化兔抗小鼠UPF1抗体;诱导3T3-L1细胞分化,并用免疫共沉淀(CoIP)方法观察脂肪细胞分化过程中UPF1蛋白的表达.结果 1)制备了效价≥64万且与重组mUPF1蛋白和天然mUPF1蛋白均有很强的特异性结合能力的兔抗小鼠UPF1的多克隆抗体;2)小鼠3T3-L1细胞成脂诱导过程中UPF1蛋白表达量未发生明显变化;3)脂肪细胞分化过程中UPF1蛋白与UPF2蛋白相互作用增加.结论 1)以mUPF1蛋白C端550个氨基酸为抗原制备的抗体能够有效识别mUPF1蛋白;2)在脂肪细胞分化过程中UPF1蛋白与UPF2蛋白互作增强.

无义介导的mRNA降解(NMD)是一种重要的真核生物mRNA质量监控途径.NMD可识别并降解含有提前终止密码子(PTC)的异常mRNA(PTC-mRNA).但NMD途径对PTC-mRNA的识别和降解机制尚无阐明.蓝氏贾第虫(Giardia lamblia)是一种寄生性的原生动物,进化上处于真核生物基部,对其NMD途径的研究有利于了解NMD途径的机制与进化.本研究通过双分子荧光互补实验、酵母双杂交实验和体外pull-down实验,分析了贾第虫的UPF1 (GlUPF1)、SMG1 (GlSMG1)和肽链释放因子(GleRF1、GleRF3)之间的相互作用关系.结果表明,贾第虫的肽链释放因子都能够与GlUPF1发生相互作用,且GlUPF1的CH结构域与GleRF3能够形成较稳定的复合体,而GlSMG1的激酶结构域PIKK能与UPF1的C端和N端结构域相互作用.进一步研究证实,GlSMG1的PIKK结构域能使GlUPF1两种截短体GlUPF1(1～500 aa)和GlUPF1(501 ～1 304 aa)发生磷酸化修饰,说明GlUPF1的N端和C端均有GlSMG1的磷酸化位点.进一步分析证实,T111是GlUPF1上的1个磷酸化位点.我们的研究结果表明,贾第虫NMD途径起始阶段,首先在mRNA的PTC处的核糖体上形成SMG1-UPF1-eRF1-eRF3 (SURF)复合体,并且GlSMG1磷酸化修饰GlUPF1,由此激活NMD途径,可能招募XRN1和SKI7d等酶参与无义mRNA的降解.

无义介导的mRNA降解(nonsense-mediated mRNA decay,NMD)是一种重要的mRNA质量监测机制,可以识别和降解含有提前终止密码子(premature termination codons,PTCs)的异常转录本,但其详细的分子机制还没有完全阐释清楚.纤毛虫是真核生物进化最早的一个分支,对其NMD途径的研究有助于阐明高等生物基因表达调控的进化与分子机制.该研究从纤毛虫八肋游仆虫(Euplotes octocarinatus)基因组中鉴定并克隆得到NMD因子EuUPF1、EuUPF2、Eu Y14a、EuY14b和EuMA GO的基因.酵母双杂交和体外pull-down实验分析证实了各因子间的相互作用关系:EuUPF1的CH结构域与EuUPF2的C-端结构域相互作用;Y14的两个同源体(paralogs)EuY14a和EuY 14b,作为mRNA结合蛋白,均与EuMAGO发生相互作用,形成真核生物mRNA外显子连接复合体(exon-exon junction complex,EJC)的核心.一方面,EuUPF1的CH结构域与EuY14a直接相互作用,结合到异常mRNA上;另一方面,EuUPF1可以通过EuUPF2与EuMAGO相互作用,后者再与EuY 14a和EuY 14b相互作用,把EuUPF1锚定到异常mRNA上.总之,EuUPF1通过两种方式结合在mRNA上,招募各种核酸酶,降解异常的mRNA.因为游仆虫基因组中内含子含量低于高等真核生物,而又远高于酵母真菌,因此研究者认为,依赖EJC和不依赖EJC的两种NMD途径可能共存于游仆虫细胞中,但这两种NMD途径具体的分子机制有待深入研究.

Intrinsically disordered proteins (IDPs)/intrinsically unstructured proteins are characterized by the lack of fixed or stable tertiary structure,and are increasingly recognized as an important class of proteins with major roles in signal transduction and transcriptional regulation.In this study,we report the identification and functional characterization of a previously uncharacterized protein (UPF0258/KIAA1024),major intrinsically disordered Notch2-associated receptor 1 (MINAR1).While MINAR1 carries a single transmembrane domain and a short cytoplasmic domain,it has a large extracellular domain that shares no similarity with known protein sequences.Uncharacteristically,MINAR1 is a highly IDP with nearly 70％ of its amino acids sequences unstructured.We demonstrate that MINAR1 physically interacts with Notch2 and its binding to Notch2 increases its stability and function.MINAR1 is widely expressed in various tissues including the epithelial cells of the breast and endothelial cells of blood vessels.MINAR1 plays a negative role in angiogenesis as it inhibits angiogenesis in cell culture and in mouse matrigel plug and zebraflsh angiogenesis models.Furthermore,while MINAR1 is highly expressed in the normal human breast,its expression is significantly downregulated in advanced human breast cancer and its re-expression in breast cancer cells inhibited tumor growth.Our study demonstrates that MINAR1 is an IDP that negatively regulates angiogenesis and growth of breast cancer cells.