目的:评价肺复张联合肱动脉峰流速变异度(ΔVp)预测患者术中容量反应性的准确性。方法:择期全麻下行开腹胃肠手术患者64例，年龄18～64岁，性别不限，BMI 19～26 kg/m 2，ASA分级Ⅰ或Ⅱ级，NYHA分级Ⅰ或Ⅱ级。麻醉诱导后依次进行肺复张(保持30 cmH 2O气道正压10 s)和容量负荷试验。于肺复张开始时采用超声测量ΔVp。于肺复张前(T 1)、肺复张时(T 2)、容量负荷前(T 3)、容量负荷后(T 4)记录MAP、HR、CVP、SV，计算各指标肺复张前后变化率(ΔMAP LRM、ΔHR LRM、ΔCVP LRM、ΔSV LRM)和容量负荷试验前后变化率(ΔMAP VE、ΔHR VE、ΔCVP VE、ΔSV VE)。以ΔSV VE≥15%定义容量负荷试验阳性，分为有反应组(≥15%，R组)和无反应组(<15%，NR组)。 结果:R组34例，NR组30例。与NR组比较，R组T 2时MAP和T 1，2时SV降低，ΔMAP LRM、ΔMAP VE、ΔSV LRM和ΔSV VE升高，ΔVp升高( P<0.05)。ΔVp与ΔSV VE呈正相关( r＝0.829， P<0.05)，ΔSV LRM与ΔSV VE呈负相关( r＝－0.876， P<0.05)，ΔVp与ΔSV LRM呈负相关( r＝－0.819， P<0.05)。肺复张联合ΔVp预测患者容量反应性的受试者工作特征曲线下面积为0.808，诊断阈值32.3%，灵敏度75.3%，特异度88.2%。 结论:肺复张联合ΔVp(≥32.3%)可准确预测患者术中容量反应性。

目的:探讨microRNA-140（miR-140）是否有独立于其宿主基因WWP2的转录启动子，从而为骨性关节炎的治疗提供新的思路。方法:通过共转染CRISPR-dCas9-VP64和ACAN gRNA慢病毒的SW1353细胞验证软骨细胞特征性基因ACAN的转录水平。通过构建能稳定表达CRISPR-dCas9-VP64的SW1353细胞并结合多条sgRNA（single guide RNA, sgRNA/gRNA）、人类髋关节软骨RNA测序结果验证miR-140是否与WWP2基因共表达，是否有独立的转录启动位点。结果:共转染CRISPR-dCas9-VP64和ACAN gRNA慢病毒的SW1353细胞能显著提高软骨细胞特征性基因ACAN的转录水平。从基因水平、蛋白水平证实成功构建能稳定表达CRISPR-dCas9-VP64的SW1353细胞。通过人类髋关节软骨RNA测序结果设计多条WWP2 gRNA以及miR-140启动子gRNA。实时定量PCR结果显示miR-140的表达既受其宿主基因WWP2调控，同时也有其独立的转录位点。结论:运用CRISPR-Cas9基因编辑技术成功构建稳定表达CRISPR-dCas9-VP64蛋白的SW1353细胞能极大减少实验中样本间的差异化，保证实验结果的一致性。结合多条gRNA证明了miR-140既与WWP2共表达，同时也受其独立的转录启动子调控转录。运用CRISPR-dCas9-VP64d-gRNA能单独调控miR-140的表达，同时其宿主基因的表达不受影响，有潜力作为新兴的基因治疗方法治疗骨性关节炎。

目的 探讨卡维地洛、普萘洛尔对肝硬化食管静脉曲张出血(EVB)患者再出血的预防价值.方法 将肝硬化EVB患者分为试验组和对照组.试验组给予卡维地洛分散片,起始剂量6.25 mg,bid,口服;对照组给予盐酸普萘洛尔片,起始剂量20 mg,bid,口服,2组疗程均为1年.比较2组患者的临床疗效,2组患者治疗6个月、治疗1年的再出血率、血流动力学,观察治疗期间安全性.结果 试验组入组64例,对照组入组61例.治疗后,试验组和对照组的总有效率分别为93.75％(60例/64例)和91.80％(56例/61例),治疗6个月的再出血率分别为4.69％(3例/64例)和9.84％(6例/61例),在统计学上差异均无统计学意义(均P＞0.05).试验组和对照组治疗1年的再出血率分别为10.94％(7例/64例)和24.59％(15例/61例),在统计学上差异有统计学意义(P＜0.05).治疗6个月,试验组和对照组的门静脉内径(PVD)分别为(12.39±2.41)和(13.88±1.76)mm,脾静脉内径(SVD)分别为(7.56±1.52)和(8.35±1.69)mm,门静脉平均血流速度(Vp)分别为(35.26±7.04)和(38.12±7.60)cm·s-1,脾静脉平均血流速度(Vs)分别为(20.03±4.11)和(22.34±4.69)cm·s-1,试验组的上述指标与对照组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).治疗1年,试验组和对照组PVD分别为(11.87±2.52)和(13.15±2.04)mm,SVD 分别为(7.33±1.48)和(8.22±1.55)mm,Vp 分别为(33.96±6.75)和(37.46±6.83)cm·s-1,Vs 分别为(19.26±4.33)和(21.55±4.47)cm·s-1,试验组的上述指标与对照组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).试验组的药物不良反应有心动过缓、低血压、头晕、恶心呕吐,对照组的药物不良反应有心动过缓、低血压、头晕、嗜睡、恶心呕吐、皮疹.试验组和对照组的总药物不良反应发生率分别为12.50％和27.87％,在统计学上差异有统计学意义(P＜0.05).结论 卡维地洛相比普萘洛尔,预防再出血的效果更好,更能减轻食管静脉曲张.

目的:探讨前置血管（vasa previa，VP）伴低置胎盘（low-lying placenta，LP）的临床特征。方法:本研究为回顾性病例对照研究。研究对象为2015年1月至2021年8月在广州市妇女儿童医疗中心产前检查并分娩的VP患者。按照有无合并LP，将其分为VP+LP组和VP-LP组。以同期前置胎盘（placenta previa，PP）组（128例）作为对照。比较3组的临床特征及母胎临床结局的差异。采用 t检验、Mann-Whitney U检验、 χ2检验（或Fisher精确概率法）进行统计学分析。 结果:研究期间VP病例共116例，占同期分娩孕妇的0.085%（116/136 450）；VP+LP组64例，VP-LP组51例（排除1例孕晚期非前置血管导致胎儿宫内死亡者）。VP+LP占PP病例总数的2.9%（64/2 219），且经产妇及既往剖宫产比例高于VP-LP组［分别为62.5%（40/64）与39.2%（20/51）， χ 2= 6.17， P=0.013；31.3%（20/64）与13.7%（7/51）， χ 2= 4.85， P=0.028］，9.4%（6/64）存在Ⅲ型前置血管，产前超声诊断孕周延后［28.3周（23.6~31.7周）与23.9周（23.3~25.9周）， Z=2.61， P=0.007］。VP+LP组产前出血比例与VP-LP组差异无统计学意义，但产后24 h内出血量显著增加［550 ml（436~732 ml）与420 ml（300~540 ml）， Z=3.37， P=0.001］；VP+LP组新生儿5 min Apgar评分<7分［0.0%（0/64）与6.9%（4/58），Fisher精确概率法］及缺氧缺血性脑病的发生比例［0.0%（0/64）与8.6%（5/58），Fisher精确概率法］均低于VP-LP组（ P值均<0.05），且无新生儿死亡。与PP组比较，VP+LP组产前出血比例差异无统计学意义，但分娩孕周提前［36.0周（34.3~36.9周）与37.0周（35.7~37.3周）， Z=3.79， P<0.001］、胎心异常比例更高［10.9%（7/64）与3.1%（4/128），Fisher精确概率法， P=0.044］；且新生儿重症监护病房收住率［36.4%（24/66）与12.1%（16/132）， χ 2= 16.04， P<0.001］及呼吸窘迫综合征发生率更高［25.8%（17/66）与12.1%（16/132）， χ 2= 5.89， P=0.015］。 结论:VP伴LP存在特殊类型的Ⅲ型VP。VP伴LP患者产后24 h出血量更多，新生儿发生不良结局的风险更高，因此孕晚期诊断LP需关注伴发VP的可能。

目的 构建一种基于人工智能大语言模型(large language model,LLM)技术、可用于医学教育的新型虚拟患者(virtual patient,VP)系统,评价该系统在基层医生进修学习全科医学临床思维中的应用效果.方法 选取2021年1月至2024年2月在东南大学附属中大医院进修的基层社区医生为研究对象,随机分为试验组和对照组,分别采用基于LLM的VP系统教学、传统教学方法进行授课,通过临床思维理论知识考核、临床思维能力考核、课程满意度调查评估教学效果,并对结果进行相应的统计学分析.结果 共纳入124名基层社区医生,其中试验组60例、对照组64例,两组在一般基线资料上差异无统计学意义,具有可比性.课程结束后,试验组临床思维理论知识考核成绩显著高于对照组(83.83±3.15 vs.79.92±4.52,P＜0.01),且不及格率显著低于对照组(0.00％vs.9.38％,P＜0.05);试验组在临床思维能力3个维度(批判性、系统性、循证思维)方面教学后分数均显著高于教学前,而对照组仅在批判性思维维度上教学前后差异有统计学意义教学后试验组在系统思维、循证思维方面分数均显著高于对照组(P＜0.05),但在批判性思维上两组分数差异无统计学意义.试验组对授课的总体满意度也显著高于对照组(93.33％vs.85.48％,P＜0.05).结论 基于LLM的VP系统提升了学员对临床思维理论知识的掌握程度,也促进了其临床思维能力的培养,该教学方法可为其他医学教育群体提供新的教学工具和思路.

The clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)-Cas9 system has been widely used for genome engineer-ing and transcriptional regulation in many different organisms.Current CRISPR-activation(CRISPRa)platforms often require multi-ple components because of inefficient transcriptional activation.Here,we fused different phase-separation proteins to dCas9-VPR(dCas9-VP64-P65-RTA)and observed robust increases in transcriptional activation efficiency.Notably,human NUP98(nucleoporin 98)and FUS(fused in sarcoma)IDR domains were best at enhancing dCas9-VPR activity,with dCas9-VPR-FUS IDR(VPRF)outperforming the other CRISPRa systems tested in this study in both activation efficiency and system simplicity.dCas9-VPRF overcomes the target strand bias and widens gRNA designing windows without affecting the off-target effect of dCas9-VPR.These findings demonstrate the feasibility of using phase-separation proteins to assist in the regulation of gene expression and support the broad appeal of the dCas9-VPRF system in basic and clinical applications.

目的:比较动态对比增强磁共振(DCE-MRI)三种血流动力学模型定量灌注参数鉴别诊断富细胞型子宫平滑肌瘤的价值.方法:连续收集2015年9月至2016年9月绍兴市人民医院经病理学检查证实的子宫平滑肌瘤患者64例(普通型30例,富细胞型13例,退变型21例).所有患者术前行盆腔DCE-MRI扫描,应用Reference Region(RR)模型、Extended Tofts(ET)模型和Exchange(EC)模型测量子宫平滑肌瘤的定量灌注参数值,对比分析子宫平滑肌瘤不同病理类型间定量灌注参数的差异,并采用受试者工作特征(ROC)曲线评价其诊断富细胞型子宫平滑肌瘤的效能.结果:富细胞型子宫平滑肌瘤RR模型中容量转运常数(Ktrans)、速率常数(Kep),ET模型中Ktrans、Kep、血管间隙容积分数(Vp),EC模型中血管外细胞外间隙容积分数(Ve)、血浆流量(Fp)值高于普通型子宫平滑肌瘤(均P<0.05或P<0.01);富细胞型子宫平滑肌瘤RR模型中的Ktrans、Kep,ET模型中Ktrans、Kep、Ve、Vp,EC模型中的Ve、Vp、Fp值高于退变型子宫平滑肌瘤(均P <0.05或P <0.01),其余参数在三种亚型的肌瘤中差异均无统计学意义(均P>0.05).ROC曲线分析结果显示,ET模型中的Ktrans诊断富细胞型子宫平滑肌瘤的效率较高,曲线下面积为0.929,敏感度和特异度分别为92.3%和83.7%;此外,EC 模型中的Fp、RR模型中的Ktrans和ET模型中的Kep诊断富细胞型子宫平滑肌瘤的效率也较高,曲线下面积分别为0.867、0.849和0.837,敏感度分别为91.7%、84.6%和92.3%,特异度分别为78.0%、76.0%和73.5%.结论:三种血流动力学模型定量灌注参数鉴别富细胞型子宫平滑肌瘤均具有较高价值,其中以ET模型中的Ktrans诊断富细胞型子宫平滑肌瘤的敏感度和特异度最高.

User-friendly tools for robust transcriptional activation of endogenous genes are highly demanded in plants.We previously showed that a dCas9-VP64 system consisting of the deactivated CRISPR-associated protein 9 (dCas9) fused with four tandem repeats of the transcriptional activator VP16 (VP64)could be used for transcriptional activation of endogenous genes in plants.In this study,we developed a second generation of vector systems for enhanced transcriptional activation in plants.We tested multiple strategies for dCas9-based transcriptional activation,and found that simultaneous recruitment of VP64 by dCas9 and a modified guide RNA scaffold gRNA2.0 (designated CRISPR-Act2.0) yielded stronger transcriptional activation than the dCas9-VP64 system.Moreover,we developed a multiplex transcription activatorlike effector activation (mTALE-Act) system for simultaneous activation of up to four genes in plants.Our results suggest that mTALE-Act is even more effective than CRISPR-Act2.0 in most cases tested.In addition,we explored tissue-specific gene activation using positive feedback loops.Interestingly,our study revealed that certain endogenous genes are more amenable than others to transcriptional activation,and tightly regulated genes may cause target gene silencing when perturbed by activation probes.Hence,these new tools could be used to investigate gene regulatory networks and their control mechanisms.Assembly of multiplex CRISPR-Act2.0 and mTALE-Act systems are both based on streamlined and PCR-independent Golden Gate and Gateway cloning strategies,which will facilitate transcriptional activation applications in both dicots and monocots.

目的 探讨动态对比增强磁共振(DCE-MRI)渗透性参数早期监测肝转移瘤贝伐单抗和常规化疗联合治疗敏感性的价值.方法 对28例直结肠癌的肝转移瘤患者进行常规磁共振平扫、DCE-MRI检查,分别测量化疗前及化疗第1周期后靶病灶的DCE-MRI渗透性参数,即转运常数(Ktrans)、细胞外血管外间隙的体积百分数(Ve)、回流常数(Kep)、血浆体积百分数(Vp);将所有靶病灶分为高敏感组和低敏感组,采用t检验比较两组靶病灶化疗早期渗透性参数的差异,受试者工作特征曲线分析渗透性参数早期预测转移瘤化疗敏感性的诊断效能.结果 共64个肝转移瘤靶病灶,包括高敏感组29个和低敏感组35个.化疗前,高敏感组靶病灶的Ktrans0和Kep0值明显高于低敏感组,差异有统计学意义(P=0.040,P=0.049),而Ve0、Vp0值组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).化疗第1周期后高敏感组的Ktrans1、Kep1值较化疗前Ktrans0、Kep0值明显下降,差异有统计学意义(P =0.017,P=0.031),而Ve1、Vp1值无变化,各参数组间差异均无统计学意义(P＞0.05).Ktrans0取阈值0.149 min-1时,其敏感性、特异性和曲线下面积值分别为89.7％、62.9％和0.782;Kep0取阈值1.129 min-1时,其敏感性、特异性和曲线下面积值分别为65.5％、71.4％和0.726.结论 DCE-MRI渗透性参数有助于早期监测化疗疗效,Ktrans值可作为预测肝转移瘤对化疗敏感性的定量指标.

目的 探讨扩散峰度成像(DKI)联合动态对比增强MRI(DCE-MRI)诊断乳腺良、恶性病变的价值,以及对不同病理预后因素和分子亚型病变的鉴别诊断能力.方法 回顾性分析2016年11月至2017年5月上海市第一人民医院经手术或穿刺病理证实的64例乳腺疾病患者.均行横断面T1WI、DKI和DCE-MRI检查.获取DKI参数[包括扩散峰度值(MK)、平均扩散率(MD)]和DCE-MRI参数[包括容量转移常数(Ktrans)、血管外细胞外间隙容积比(Ve)、血浆分数(Vp)和速率常数(Kep)].进行病理分析,监测雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人类表皮生长因子受体2(HER-2)及细胞核增殖指数Ki67,并将乳腺癌分为Luminal A型、Luminal B型、HER-2阳性型和三阴性型4种亚型.采用两独立样本t检验(正态分布且方差齐性数据)或Mann-Whitney U检验(偏态分布或方差不齐)比较乳腺良、恶性病灶间DKI参数及DCE-MRI参数的差异.以病理结果为金标准,绘制ROC评价DKI及DCE-MRI参数鉴别诊断乳腺良、恶性病变的效能.采用Mann-Whitney U检验和Kruskal-Wallis H检验比较不同预后因素间、不同分子亚型乳腺癌间DKI及DCE-MRI参数的差异.采用Spearman秩相关分析评价DKI及DCE-MRI参数与不同预后因素的相关性.结果 64例病灶均为单发,乳腺癌23例,良性病变41例.乳腺癌中,Luminal A型9例、Luminal B型7例、HER-2阳性型3例、三阴性型4例;ER、PR和HER-2阳性者分别为14、11和10例;Ki67高表达19例,低表达4例.乳腺良、恶性病变的MK、MD、Ktrans和Kep值差异均有统计学意义(P均<0.05),Ve和Vp差异无统计学意义(P均>0.05).MK、MD、Ktrans、Kep鉴别诊断乳腺良、恶性病变的ROC下面积分别为0.897、0.808、0.844和0.842,联合多参数的鉴别诊断效能提高,联合上述4个参数,ROC下面积为0.950,诊断敏感度、特异度和准确度分别达0.870、0.951和0.922.ER阳性与阴性患者的Ktrans、Vp值,以及淋巴结转移阳性和阴性患者的Ve值差异均有统计学意义(P均<0.05),其余各预后因素组间参数值差异均无统计学意义(P均>0.05).ER与Ktrans、Vp值呈中度正相关,淋巴结表达状态与Ve值呈低度正相关(r值分别为0.6、0.5和0.4,P均<0.05),其他参数和预后因子均无相关性(P均>0.05).不同分子亚型乳腺癌患者间的DKI和DCE-MRI参数差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 DKI联合DCE-MRI可提高鉴别诊断乳腺良、恶性病变的效能,部分DCE-MRI参数与预后因子具有相关性.