目的:探究微小RNA-140-5p(miR-140-5p)通过靶向调控组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)基因表达在胃癌转移中的作用及机制。方法:收集2020年4月至2020年10月齐齐哈尔医学院附属第三医院院胃癌患者手术切除癌组织以及癌旁组织(52例)；细胞实验对象为购买人胃正常上皮黏膜细胞系GES-1和胃癌细胞系MGC-803、SGC-7901和HGC-27。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)以及蛋白质印迹法(Western blot)检测胃癌患者肿瘤组织中HDAC4的表达。在线网站Targetscan预测HDAC4上游调控miRNA。双荧光素酶报告实验验证miR-140-5p和HDAC4的靶向关系。胃癌细胞依据不同转染处理分组为si-NC组、si-HDAC4组、mimic-NC组、miR-140-5p mimic组、inhibitor-NC组和miR-140-5p inhibitor组。采用RT-qPCR检测胃癌细胞miR-140-5p的表达，Western blot检测HDAC4蛋白表达。Transwell实验检测细胞迁移和侵袭；流式细胞术检测细胞凋亡，组间比较采用 t检验。 结果:胃癌组织中的HDAC4的mRNA和蛋白表达高于癌旁组织(1.024±0.099比1.512±0.065；0.916±0.160比1.734±0.289， t＝29.71、17.86，均 P<0.05)。在胃癌细胞中miR-140-5p与HDAC4存在结合位点，双荧光素酶报告实验验证miR-140-5p结合在HDAC4的3’端非编码区(3’UTR)(0.986±0.050比0.436±0.039， t＝15.02， P<0.05)。胃癌细胞中miR-140-5p表达显著低于正常细胞(1.021±0.054比0.362±0.029， t＝18.62， P<0.05)。miR-140-5p mimic组细胞迁移(180.000±5.890比54.000±3.230， t＝32.49， P<0.05)和侵袭(94.000±5.430比43.000±3.420， t＝13.77， P<0.05)能力显著低于mimic-NC组，而凋亡能力显著高于mimic-NC组(11.250±1.560比30.240±3.550， t＝8.48， P<0.05)；miR-140-5p inhibitor组细胞迁移(192.000±6.000比284.000±8.430， t＝15.37， P<0.05)和侵袭(89.000±5.110比153.000±6.990， t＝12.80， P<0.05)能力显著高于inhibitor-NC组，而凋亡能力显著低于inhibitor-NC组(13.200±1.620比5.350±1.000， t＝7.14， P<0.05)。miR-140-5p mimic+Jagged1/FC组细胞迁移(60.000±3.430比196.000±7.230， t＝29.44， P<0.05)和侵袭(48.000±3.750比97.000±4.890， t＝13.77， P<0.05)能力显著高于miR-140-5p mimic+DMSO组，而细胞凋亡能力显著低于miR-140-5p mimic+DMSO组(28.950±3.240比12.050±1.430， t＝8.27， P<0.05)。 结论:胃癌细胞的miR-140-5p上调表达可通过抑制HDAC4/Notch信号轴进而抑制胃癌转移进程。

目的:探讨microRNA-140（miR-140）是否有独立于其宿主基因WWP2的转录启动子，从而为骨性关节炎的治疗提供新的思路。方法:通过共转染CRISPR-dCas9-VP64和ACAN gRNA慢病毒的SW1353细胞验证软骨细胞特征性基因ACAN的转录水平。通过构建能稳定表达CRISPR-dCas9-VP64的SW1353细胞并结合多条sgRNA（single guide RNA, sgRNA/gRNA）、人类髋关节软骨RNA测序结果验证miR-140是否与WWP2基因共表达，是否有独立的转录启动位点。结果:共转染CRISPR-dCas9-VP64和ACAN gRNA慢病毒的SW1353细胞能显著提高软骨细胞特征性基因ACAN的转录水平。从基因水平、蛋白水平证实成功构建能稳定表达CRISPR-dCas9-VP64的SW1353细胞。通过人类髋关节软骨RNA测序结果设计多条WWP2 gRNA以及miR-140启动子gRNA。实时定量PCR结果显示miR-140的表达既受其宿主基因WWP2调控，同时也有其独立的转录位点。结论:运用CRISPR-Cas9基因编辑技术成功构建稳定表达CRISPR-dCas9-VP64蛋白的SW1353细胞能极大减少实验中样本间的差异化，保证实验结果的一致性。结合多条gRNA证明了miR-140既与WWP2共表达，同时也受其独立的转录启动子调控转录。运用CRISPR-dCas9-VP64d-gRNA能单独调控miR-140的表达，同时其宿主基因的表达不受影响，有潜力作为新兴的基因治疗方法治疗骨性关节炎。

目的 探讨微小RNA-140(miR-140)靶向高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对胰腺癌细胞增殖的影响.方法 本文选择miR-140及HMGB1作为研究对象.首先我们在胰腺癌细胞中转染miR-140 mimics或miR-140 inhibitor以实现miR-140过表达或miR-140沉默,并检测了miR-140过表达或沉默时HMGB1蛋白的表达水平;其次构建了在HMGB1的3'端非编码区(3'UTR)含有或不含有6对碱基突变的荧光酶报告基因质粒(mut-HMGB1/wt-HMGB1),与miR-140 mimics或miR-140 inhibitor共转染后检测荧光酶活性变化;接着构建pcDNA3.1/HMGB1质粒,与miR-140 mimics或miR-140 inhibitor共转染后检测HMGB1及RAGE蛋白表达水平变化;最后检测pcDNA3.1/HMGB1和mimics NC/miR-140 mimics共转染后对胰腺癌细胞生长和增殖的影响.结果 miR-140过表达抑制HMGB1蛋白表达(0.406 3 ±0.018 9,t=11.250,P=0.000),miR-140沉默促进HMGB1蛋白表达(1.975 8±0.069 3,t=9.121,P=0.001);miR-140可靶向结合HMGB1调控其表达;pcDNA3.1/HMGB1可实现HMGB1过表达(5.458 9±0.463 7,t=16.140,P=0.000),并可减弱miR-140对HMGB1和晚期糖基化终产物受体(RAGE)的抑制作用;miR-140可抑制胰腺癌细胞的生长和增殖(P=0.042),HMGB1可促进胰腺癌细胞的生长和增殖(P=0.008),HMGB1可恢复miR-140对胰腺癌细胞生长和增殖的抑制作用(与miR-140 mimics+ pcDNA3.1组比较,P=0.020).结论 miR-140靶向HMGB1基因抑制胰腺癌细胞的增殖.

MicroRNA是真核生物中一类小分子非编码RNA,长约22个核苷酸,通过影响mRNA的稳定性及其翻译过程而在转录后水平调节基因的表达.研究发现,microRNA在多种肿瘤中表达失调,与肿瘤的发生、发展密切相关,在肿瘤中发挥抑癌或促癌作用.miR-140在乳腺癌、肺癌、肝癌、结肠癌和骨肉瘤等多种肿瘤中呈低表达,通过调控多种靶基因参与调节肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭和转移等,被认为是一种具有抑癌作用的microRNA.本文就miR-140在常见肿瘤中的研究现状作一综述.

miRNA(微小RNA,microRNA)是含有大约22个核苷酸的非编码单链RNA,主要通过调控靶基因的表达来参与胚胎发育.近年来,越来越多的报道表明miRNA在细胞分化增殖、组织器官发育、疾病发生转归等方面发挥着重要作用.研究显示,在颌面部异常表达的miRNA可能与唇腭裂的形成密切相关.目前已发现miR-200、miR-17-92、miRNA-140等家族基因广泛参与唇腭发育的调控机制,且更多的miRNA基因正在被逐渐挖掘,因此本文就miRNA在唇腭裂方面的研究进展进行综述.