目的:探索结核分枝杆菌( Mycobacterium tuberculosis， Mtb)WhiB2蛋白的作用机制。 方法:构建 Mtb中pET28a-WhiB2重组表达载体，异源表达并纯化WhiB2蛋白和包涵体WhiB2蛋白；圆二色谱和核磁共振分析包涵体WhiB2与非变性WhiB2蛋白的差异；加入Fe 2+恢复WhiB2蛋白的铁硫簇；核磁谱图分析WhiB2与WhiBMtb基因上游的启动子序列相互作用；生物信息学分析其三级结构、三级结构比对和相互作用蛋白质。 结果:复性的WhiB2与非变性WhiB2的结构基本一致，在破坏了铁硫簇的WhiB2中加入Fe 2+能够成功恢复自身的铁硫簇，WhiB2可以与WhiBMtb/WhiB2Ms基因上游的启动子序列结合。 结论:Mtb WhiB2蛋白在结核病发病机制中起关键作用，为进一步探索抗 Mtb的新型靶点提供基础资料。

目的 激活南海红树林来源的链霉菌Streptomyces youssoufiensis OUC6819中不表达或表达水平低的隐性基因簇,进一步挖掘新颖的次级代谢产物.方法 采用PCR-targeting策略敲除WhiB-like(Wbl)家族的wblAyo基因,通过HPLC分析野生株和突变株发酵产物的差异,检测发酵液粗提物和C18开放柱层析组分对5种多重耐药(MDR)菌(Staphylococcus aureus CCARM 3090,Salmonella typhimurium CCARM 8250,Escherichia coli CCARM 1009,Enterococcus faecium CCARM 5203,Enterococcus faecalis CCARM 5172)的抑制活性,通过固体平板实验和光学显微镜观察链霉菌形态分化的改变.结果 得到了正确的AwblAyo阻断突变株,HPLC分析结果表明:与野生株相比,突变株中化合物峰1和2分别提高了15.6和9.3倍;突变株发酵液粗提物和组分11对E.faecium CCARM 5203、E.faecalis CCARM 5172和S.aureus CCARM 3090的抗菌活性与野生株相比明显提高,而且突变株丧失了产生孢子的能力.结论 wblAyo参与了S.youssoufiensis OUC6819的次级代谢和形态分化过程.wblAyo的阻断激活了S.youssou iensis OUC6819中抗MDR菌活性次级代谢产物的产生,为继续挖掘活性化合物提供了必要基础,还为其他海洋链霉菌中隐性基因簇的激活提供了参考.

目的 探究异烟肼(INH)对耻垢分枝杆菌(MS) MC2155的基因表达调控水平的干预作用,以期发现INH诱导的耐药基因突变形成的新分子机制.方法 实验组使用1/2最小抑菌浓度(MIC)的INH处理,对照组用相同稀释倍数的二甲基亚砜(DMSO),培养72 h后,提取各组MS MC2155的总RNA,用illumina Hiseq平台进行全转录组测序.用bowtie2软件将测定结果同MS MC2155标准株的参考基因组序列进行比对,获得INH干预前后的差异基因(differ-ent expression gene,DEG),用GO及KEGG数据库注释上述获得的unigene.结果 基因表达差异分析显示,在INH干预后发现1537个DEG(P≤0.05,|log2 FC[≥1),其中805个上调(52.37％),732个下调(47.63％).GO富集分析显示差异基因主要涉及结构分子活动、囊泡等分子功能以及细胞大分子合成、细胞酰胺代谢等生物学过程,包括whiB4、rplM、gmK和nuoC基因;KEGG富集分析显示差异表达基因主要集中在万古霉素耐药通路,包括whiB4、nrdB、rpmB-3和pth;以及核糖体合成、氧化磷酸化和肽聚糖合成等生物合成过程的通路.STRING分析显示,共有391个基因编码的蛋白质存在相互作用,其中处于中心节点的蛋白包括rpsD、rpsB和rplM.结论 全转录组水平分析表明INH能促进MS MC2155对万古霉素耐药相关基因的表达,并可抑制细胞壁合成相关基因的表达,可为进一步阐明INH在结核病治疗过程中诱导形成耐药突变的分子机制提供参考.