目的:观察Wnt诱导分泌蛋白-2(WISP-2)对胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响并探讨其分子机制。方法:选取2015年6月到2018年6月收集的112例胃癌组织和对应的癌旁组织作为研究对象。采用免疫组织化学观察胃癌组织和癌旁组织中WISP-2蛋白的表达。采用携带WISP-2基因和空载体的慢病毒感染胃癌细胞株MKN-28，建立WISP-2过表达细胞株(WISP-2组)和对照细胞株(对照组)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析两组细胞的增殖能力；采用异种肿瘤移植模型分析两组细胞在体内的生长；采用流式细胞术分析两组细胞的凋亡水平；采用Transwell分析两组细胞的迁移能力。采用蛋白质印迹法(Western blot)分析两组细胞WISP-2蛋白、凋亡相关蛋白与迁移相关蛋白的表达。采用 t检验和方差分析。 结果:胃癌组织中WISP-2蛋白的表达水平(89.43±7.51)较癌旁组织中WISP-2蛋白表达水平(193.42±12.09)显著下调，差异有统计学意义( t＝6.019， P<0.05)。WISP-2组细胞增殖(1.21±0.14)明显低于对照组(1.79±0.21)，差异有统计学意义( t＝2.916， P<0.05)。WISP-2组细胞在裸鼠中的肿瘤体积[(1 029.32±101.58) mm 3]明显小于对照组[(1 930.60±198.44) mm 3]，差异有统计学意义( t＝3.001， P<0.05)。WISP-2组细胞凋亡水平(21.45±4.91)较对照组(3.41±0.56)显著增加，差异有统计学意义( t＝2.819， P<0.05)。WISP-2组细胞迁移数量[(231.23±19.32)个]明显低于对照组细胞迁移数量[(98.21±10.32)个]，差异有统计学意义( t＝4.013， P<0.05)。WISP-2组细胞半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)蛋白表达水平(1.94±0.34、1.53±0.19)较对照组Caspase-3和bax表达水平(0.98±0.24、0.55±0.10)显著增加，差异有统计学意义( t＝2.193、3.018， P<0.05)。WISP-2组细胞黏着斑激酶(FAK)蛋白表达水平(0.58±0.10)较对照组细胞FAK蛋白表达水平(1.27±0.17)显著下降，差异有统计学意义( t＝2.990， P<0.05)。 结论:WISP-2蛋白在胃癌组织中低表达，参与胃癌细胞增殖、凋亡和迁移。

目的:探讨WNT1诱导信号通路蛋白2对棕榈酸以及脂多糖诱导的炎症中巨噬细胞极化的调节作用。方法:用不同浓度的WISP2蛋白处理巨噬细胞系RAW264.7，采用Cell-Titer发光法测定细胞活力，确定WISP的作用浓度。将细胞分为对照组、棕榈酸处理组、棕榈酸联合不同浓度WISP2处理组(10 μg/L及100 μg/L)以及脂多糖处理组、脂多糖联合不同浓度WISP2处理组(10 μg/L及100 μg/L)。应用实时定量聚合酶链式反应检测各组巨噬细胞中M1及M2表型分子的mRNA水平；应用酶联免疫吸附实验检测巨噬细胞分泌的重要炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6的蛋白水平。结果:和对照组相比，10 μg/L、100 μg/L WISP2处理组均未对RAW264.7细胞的活性产生影响，却显著上调 Tnfα(1.877±0.039、2.202±0.034， F＝309.7， P<0.001)、 Il6(1.418±0.056、1.506±0.059， F＝81.39， P<0.001)、单核细胞趋化蛋白1( Mcp1)(1.620±0.014、1.982±0.125， F＝71.45， P<0.001)、趋化因子c-c配体( Ccl3)(1.892±0.118、1.942±0.132， F＝32.93， P<0.001)和诱导型-氧化氮合酶( iNos)(1.691±0.201、1.548±0.090， F＝13.60， P<0.05)mRNA表达，显著下调抗炎因子 Tgfβ(1.376±0.025、2.152±0.107， F＝1.846， P<0.05)、 CD206(2.123±0.031、3.139±1.663， F＝8.037， P<0.05)、 Il4(2.098±0.464、2.494±0.141， F＝48.68， P<0.01)、 Il10(1.303±0.216、1.574±0.274， F＝5.774， P<0.05)mRNA表达，使其向M1型巨噬细胞极化；与对照组相比，100 μmol/L棕榈酸能在转录及蛋白水平温和而显著地增加TNF-α、IL-6等炎症因子的表达；与棕榈酸单独刺激相比，给予WISP2联合处理进一步促进巨噬细胞炎症因子TNF-α[(589.4±17.0)ng/L、(692.6±83.4)ng/L， F＝56.38， P<0.05]、IL-6[(15.13±1.14)ng/L、(13.33±1.22)ng/L， F＝23.32， P<0.001]的蛋白表达及趋化因子 Mcp1(160.0±9.8、140.0±18.9， F＝141.1， P<0.0001)和 Ccl3(17.76±1.92、14.41±1.27， F＝125.2， P<0.0001)的mRNA的表达。与对照组相比，100 μg/L脂多糖在蛋白水平强烈刺激巨噬细胞TNF-α[(3444±423)ng/L， F＝71.20， P<0.0001]、IL-6[(497.0±41.2)ng/L， F＝63.50， P<0.0001]等炎症因子的高表达；与脂多糖单独刺激相比，给予WISP2联合处理进一步显著上调趋化因子 Mcp1(106.8±8.7、118.7±4.6， F＝251.5， P<0.0001)和 Ccl3(35.3±12.5、116.4±4.5， F＝160.1， P<0.0001)的mRNA的表达。 结论:脂肪因子WISP2能在棕榈酸以及脂多糖诱导的炎症中促进巨噬细胞向M1型极化，并且在不同炎症反应条件下其对巨噬细胞极化的调节作用不同。

目的:探讨WNT2B基因高表达成纤维细胞通过激活巨噬细胞促进克罗恩病肠道组织损伤的机制。方法:生物信息分析、病理组织研究及细胞实验研究。生物信息分析方面，收集课题组前期炎症性肠病（IBD）患儿结肠组织细胞生物信息研究数据，再次进行单细胞测序分析。病理组织研究方面，以2022年7至9月于广州市妇女儿童医疗中心消化科住院行结肠镜检查确诊为克罗恩病的10例患儿为研究对象，每例患儿均分别取结肠炎症明显或溃疡部位组织及邻旁炎症轻微或正常部位组织，根据结肠镜下外观显示炎症明显或溃疡部位组织为炎症组，炎症轻且无溃疡部位组织为非炎症组。结肠组织行HE染色观察其病理情况，组织免疫荧光检测巨噬细胞浸润和CXCL12的表达情况。细胞实验研究方面，转染了WNT2B质粒或空载质粒的成纤维细胞分别与有或无经盐霉素处理的巨噬细胞共培养，蛋白质印迹法检测Wnt经典通路蛋白表达情况；使用SKL2001处理的巨噬细胞作为实验组，磷酸盐缓冲液处理的巨噬细胞为对照组，采用实时荧光定量PCR（qPCR）反应、酶联免疫吸附试验检测巨噬细胞CXCL12的表达及分泌情况。组间比较采用 t检验或秩和检验。 结果:单细胞测序分析提示巨噬细胞是IBD结肠组织的主要细胞，高表达WNT2B基因的成纤维细胞和巨噬细胞存在相互作用关系。病理组织研究中，10例患儿［年龄（9.3±3.8）岁，男7例、女3例］的结肠组织HE染色显示，炎症组结肠组织病理评分高于非炎症组［4（3，4）比2（1，2）分， Z=3.05， P=0.002］，组织免疫荧光提示每高倍镜视野中炎症组巨噬细胞浸润数明显高于非炎症组［（72.8±10.4）比（8.4±3.5）个， t=25.10， P<0.001］，炎症组每高倍镜视野中表达CXCL12的细胞明显多于非炎症组［（14.0±3.5）比（4.7±1.9）个， t=14.68， P<0.001］。细胞实验中，蛋白质印迹法提示与转染了WNT2B质粒的成纤维细胞共培养的巨噬细胞磷酸化的糖原合成酶激酶3β（p-GSK3β）水平升高，而盐霉素可逆转这一现象；qPCR提示实验组中CXCL12的转录水平高于对照组（6.42±0.04比1.00±0.03， t=183.00， P<0.001），酶联免疫吸附试验显示实验组中CXCL12的表达及分泌水平高于对照组［（465±34）比（77±9）ng/L， t=13.21， P=0.006］。 结论:WNT2B基因高表达成纤维细胞分泌WNT2B蛋白，激活巨噬细胞Wnt经典信号通路，从而促进巨噬细胞CXCL12的表达和分泌，诱导克罗恩病肠道炎症的发展。

目的:观察人参皂苷Re对体外高糖培养的原代心肌成纤维细胞（CFs）增殖与蛋白分泌的影响，以及对Wnt/β-连接蛋白（β-catenin）信号通路的调控作用。方法:采用体外高糖诱导CFs增殖模型，经不同浓度的人参皂苷Re干预后，采用MTT法检测CFs细胞增殖能力，流式细胞仪检测细胞增殖周期，ELISA法检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及TGF-β 1水平，Western blot检测β-catenin、糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）、磷酸化糖原合成酶激酶3β（p-GSK-3β）蛋白表达情况。 结果:与模型对照组比较，人参皂苷Re各剂量组吸光度值降低（ P<0.01），G 0+G 1期细胞百分比增加（ P<0.01）、S+G 2+M期细胞百分比降低（ P<0.01），TGF-β 1水平降低（ P<0.01），人参皂苷Re高、中剂量组Ⅲ型胶原［（6.566±1.620）ng/ml、（7.170±0.470）ng/ml比（11.241±2.234）ng/ml］水平降低（ P<0.01），人参皂苷Re高、中剂量组β-catenin［（0.281±0.016）、（0.301±0.021）比（0.409±0.037）］表达降低（ P<0.01），人参皂苷Re高剂量组p-GSK-3β［（0.369±0.049）比（0.268±0.048）］表达升高（ P<0.01）。 结论:人参皂苷Re可调控Wnt/β-catenin 信号转导通路异常表达，有效抑制CFs增殖，减少高糖条件下CFs胶原和TGF-β 1合成，具有延缓糖尿病心肌纤维化的作用。

目的:探讨热休克蛋白22（Hsp22）对TGFβ1刺激的心脏成纤维细胞激活的影响，以及其可能的分子机制。方法:分离培养小鼠成体心脏成纤维细胞，采用TGFβ1刺激诱导成纤维细胞激活。采用不同浓度的Hsp22（1，2，4，8，10 μg/mL）孵育成纤维细胞24 h，观察其对心脏成纤维细胞活化、增殖和分泌的影响；采用CCK8试剂盒检测细胞增殖活性；采用RT-PCR检测促纤维化因子的转录水平；采用免疫荧光染色检测a-SMA蛋白的表达；采用免疫印迹检测可能的信号蛋白的改变。结果:CCK8结果显示，TGFβ1刺激后成纤维细胞增殖明显增加（ P<0.05）；TGFβ1刺激后成纤维细胞α-SMA表达增多（ P<0.05），纤维化相关的基因转录明显增加（ P<0.05）。1，2，4，8，10 μg/mL的Hsp22均能够显著抑制成纤维细胞的增殖（ P<0.05）。8 μg/mL和10 μg/mL的Hsp22能够抑制α-SMA表达（ P<0.05），减少纤维化相关的基因的转录水平（ P<0.05）。免疫印迹结果显示TGFβ1刺激后WNT和β-catenin激活水平增加，GSK3β的磷酸化增高，β-catenin的核转位增多（ P<0.05）；10 μg/mL的Hsp22处理能够抑制WNT和β-catenin的激活水平，减少GSK3β的磷酸化表达，减少β-catenin的核转位（ P<0.05），减少smad2和smad3的磷酸化水平（ P<0.05）。 结论:Hsp22可以通过抑制WNT/β-catenin信号通路阻断TGFβ1诱导的成纤维细胞活化、增殖和分泌。

目的 探讨矢车菊素-3,5-O-双葡萄糖苷(cyanidin-3,5-O-diglucoside,C35G)对改善五氟尿嘧啶(5-FU,30 mg/kg)诱导化疗性小鼠肠黏膜炎作用机制.方法 将BALB/c雄性小鼠随机分成正常组、模型组、C35G组.以连续 4 d腹腔注射 5-FU诱导肠黏膜损伤小鼠模型,C35G低高剂量组连续 7 日分别灌胃C35G(50、150 mg/kg).末次给药后,CO2 处死小鼠,取血和结肠组织.采用酶联免疫吸附试法(ELISA)检测各组小鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-10(IL-10)水平.苏木精-伊红(H&E)、过碘酸-雪夫(PAS)、阿利新蓝(Alcian Blue)染色观察各组小鼠结肠组织病理变化、杯细胞分布及黏蛋白 2(mucin2,MUC2)的分泌情况.Western blot 法检测结肠中Wnt、c-Myc蛋白表达水平.荧光实时定量PCR检测各组小鼠结肠组织中紧密连接蛋白mRNA表达水平.结果 与5-FU组相比,C35G处理能显著降低 5-FU造成的小鼠结肠肠黏膜损伤,并显著降低小鼠血清中TNF-α与IL-1β水平(P＜0.05),且升高IL-10 水平(P＜0.01).C35G能显著促进结肠组织中Wnt和c-Myc的蛋白表达,并显著提高紧密连接蛋白(Zo1、claudin1、claudin7、occludin)mRNA表达水平.结论 C35G对 5-FU诱导的小鼠化疗性肠黏膜炎具有明显改善作用.[营养学报,2024,46(2):146-154]

红景天苷是从红景天分离得到的一种苯丙素苷,具有耐缺氧、抗氧化、抗炎、保护神经、抗疲劳、抗衰老及调节免疫等广谱药理特性.红景天苷具有多靶点—多途径的整体调节特征,通过激活磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路和单磷酸腺苷活化蛋白激酶途径、B淋巴细胞瘤-2基因/B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白通路和内源性抗氧化酶的活性及环氧合酶/前列腺素E2信号通路保护糖尿病性视网膜病变视网膜血管内皮细胞、视网膜色素上皮细胞及Müller细胞;激活调控转化生长因子信号通路、磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路和分泌性糖蛋白/β-连环蛋白通路,从而抑制青光眼小梁网细胞和神经节细胞凋亡,并调节眼内压的稳定;激活蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3信号通路抑制年龄相关性黄斑变性视网膜色素上皮细胞氧化损伤,降低血管内皮生长因子和缺氧诱导因子-1的表达水平抑制脉络膜新生血管的形成;发挥抗氧化活性,保护白内障晶状体上皮细胞免受氧化损伤;改善近视所致的巩膜缺氧;以及通过激活单磷酸腺苷活化蛋白激酶—沉默信息调节因子1信号通路促进自噬等来抑制机体氧化应激,缓解干眼症引起的角膜上皮细胞氧化损伤等.红景天苷在眼科应用研究涉及的范围越来越广,本文就国内、外红景天苷治疗相关眼科疾病的最新研究进展予以综述.

背景 慢性炎症环境下人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)生物学功能受损是牙周炎患者组织再生治疗困难的关键原因.作为非经典Wnt/Ca2+信号通路的分泌型配体,Wnt5a在干细胞生长发育及炎症性疾病中发挥着关键作用,但炎症微环境下Wnt5a对hPDLSCs增殖和成骨分化的影响尚不明确.目的 探讨炎症微环境下过表达Wnt5a对人牙周膜干细胞增殖及成骨分化能力的影响.方法 收集健康离体牙,参照酶消化法分离培养原代hPDLSCs.使用肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激hPDLSCs,构建体外炎症微环境.按照阴性对照组、过表达组、TNF-α +阴性对照组、TNF-α +过表达组进行实验分组.成骨诱导条件下实时定量PCR检测炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、TNF-α、成骨关键基因Runt相关转录因子 2(recombinant runt related transcription factor 2,RUNX2)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Ⅰ型胶原(collagen-1,COL-1)和Wnt5a信号分子的mRNA表达变化;利用慢病毒转染技术获取过表达Wnt5a的hPDLSCs;CCK-8 法测定Wnt5a对hPDLSCs增殖的影响;成骨诱导培养后,ALP染色、茜素红S(alizarin red S,ARS)染色用于评价过表达Wnt5a对hPDLSCs成骨分化能力的影响,实时定量PCR和Western blot法检测过表达Wnt5a后hPDLSCs中成骨标志物RUNX2和COL-1 的mRNA及蛋白表达水平.结果 与正常组相比,炎症组中IL-1β、IL-6、TNF-α及Wnt5a的mRNA表达增加(P均＜0.01),而成骨相关基因RUNX2(P=0.031)、ALP(P＜0.01)、COL-1(P=0.014)的mRNA表达下降;慢病毒感染 48h后在荧光显微镜下观察到细胞呈GFP绿色荧光,与阴性对照组相比,过表达组中Wnt5a的mRNA及蛋白表达量显著增加(P均＜0.01);CCK-8结果表明过表达组细胞活力较阴性对照组增强(P＜0.01),但TNF-α +过表达组与TNF-α +阴性对照组相比,细胞增殖活力下降(P＜0.01);成骨诱导条件下,过表达组中成骨早期标志物COL-1、RUNX2的mRNA(P均＜0.01)和蛋白(P均＜0.01)表达水平及钙结节形成量降低;但在炎症微环境下,与TNF-α +阴性对照组相比,TNF-α +过表达组中COL-1和RUNX2的mRNA(P=0.022;P=0.016)和蛋白(P均＜0.01)表达水平升高,ARS染色显示其着色深度及钙结节形成量增加,ALP染色显示细胞体外矿化能力增强.结论 炎症微环境下hPDLSCs中Wnt5a表达上调.正常培养条件下过表达Wnt5a后,hPDLSCs增殖能力增强、骨向分化能力降低.但在TNF-α刺激的炎症微环境下,过表达Wnt5a抑制hPDLSCs增殖、促进hPDLSCs成骨分化.慢性牙周炎过程中,hPDLSCs可能通过Wnt5a非经典通路调节成骨和增殖过程.

目的:探讨巨噬细胞外泌体长链非编码RNA(lncRNA)肝癌高表达转录本(HULC)在肝细胞癌(HCC)转移中的作用,并阐明其作用机制.方法:分离小鼠骨髓单核细胞,采用佛波酯诱导分化为骨髓源巨噬细胞(BMDM),并用白细胞介素4(IL-4)将BMDM诱导分化为M2巨噬细胞,即肿瘤相关巨噬细胞(TAM).差速离心法收集M2巨噬细胞外泌体(TAM-exos).在TAM中分别转染lncRNA HULC-siRNA或NC质粒后提取各组TAM分泌的外泌体(lncRNA HULC-siRNA-exos或NC-exos).将HepG2细胞按照实验目的分为对照组和TAM-exos组;NC-exos组和lncRNA HULC-siRNA-exos组;lncRNA HULC-siRNA-exos组和lncRNA HULC-siRNA-exos+SKL2001组.给予相应处理后,Transwell小室实验检测HepG2 细胞的迁移和侵袭细胞数,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测 HepG2 细胞中 lncRNA HULC 表达水平,Western blotting法检测 HepG2 细胞中Wnt3A、β-连环蛋白(β-catenin)、c-Myc和Cyclin D1蛋白表达水平.构建裸鼠原位肝癌移植模型,分为对照组、NC-exos组、TAM-exos组和lncRNA HULC-siRNA-exos组,检测M2 巨噬细胞外泌体lncRNA HULC作用后裸鼠原位移植瘤肺转移灶数.结果:TAM-exos符合外泌体的形态和生物学特征.与对照组比较,TAM-exos 组 HepG2 细胞的迁移和侵袭细胞数及细胞中 lncRNA HULC、Wnt3A、β-catenin、c-Myc和Cyclin D1蛋白表达水平升高(P<0.05).与NC-exos组比较,lncRNA HULC-siRNA-exos组HepG2细胞的迁移和侵袭细胞数及细胞中lncRNA HULC、Wnt3A、β-catenin、c-Myc和Cyclin D1蛋白表达水平降低(P<0.05).与lncRNA HULC-siRNA-exos组比较,lncRNA HULC-siRNA-exos+SKL2001组HepG2细胞的迁移和侵袭细胞数及细胞中Wnt3A、β-catenin、c-Myc和Cyclin D1蛋白表达水平升高(P<0.05).裸鼠实验,M2巨噬细胞外泌体lncRNA HULC作用后,TAM-exos组裸鼠原位移植瘤肺转移灶数较对照组增多(P<0.05);M2 巨噬细胞外泌体lncRNA HULC作用后,lncRNA HULC-siRNA-exos组裸鼠原位移植瘤肺转移灶数较 TAM-exos组和NC-exos组减少(P<0.05).结论:TAM外泌体lncRNA HULC具有促进HCC细胞侵袭和转移的作用,其作用机制可能与激活Wnt信号通路有关.

目的 探讨分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)在肾小管上皮细胞上皮—间质转化(EMT)中的作用及机制.方法 体外以转化生长因子(TGF)-β1刺激人近端肾小管上皮细胞系HK-2细胞,给予SFRP5与细胞共孵育,应用Western Blot法及RT-qPCR检测细胞中的EMT指标[E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)]的mRNA和蛋白表达水平,Western Blot法检测纤维化指标[Fibronectin(Fn)和Collagen Ⅰ(Col-Ⅰ)]的蛋白水平;并检测Wnt/β-catenin信号通路中细胞质中磷酸化β-catenin或细胞核中活化β-catenin蛋白水平,TOP/FOP-Flash荧光素酶试验评估β-catenin激活介导的转录及下游靶基因c-Myc和cyclin D1的mRNA水平.结果 TGF-β1刺激后上皮细胞固有E-cadherin水平下降,而a-SMA、Fn和Col-Ⅰ表达增多(P＜0.05);胞质中磷酸化(p-S37位点)β-catenin减少且核内β-catenin水平增加,TOP/FOP比率上升,靶基因c-Myc和cyclin D1转录增加(P＜0.05).加入SFRP5共培养细胞后,上述EMT及纤维化指标变化被逆转,异常激活的Wnt/β-catenin通路中各标志物被抑制,再加入SFRP5特异性中和抗体后SFRP5的抑制及保护作用被取消(P＜0.05).结论 本研究首次发现SFRP5可以减轻TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞EMT和纤维化,其机制与抑制异常激活的Wnt/β-catenin信号通路相关,这可能成为临床诊治及延缓慢性肾脏病进展的新靶点.