目的 探讨新生小鼠双酚A染毒对小鼠睾丸结构及Boule基因表达的长期影响及机制.方法 将12只清洁级妊娠ICR母鼠,待分娩后随机分为空白对照组、阴性对照组(玉米油)和双酚A(100 μg/kg)组.仔鼠从出生第1天开始按4μL/gBW颈背部皮下注射药物,直到出生第21天停止注射,出生第35和70天处死取材.苏木精-伊红染色观察小鼠睾丸组织形态学变化,采用RT-PCR法测定睾丸BoulemRNA表达量变化,免疫荧光和Western blot法检测睾丸内Boule蛋白的表达水平.结果 与空白对照组、阴性对照组相比,出生第35和70天的双酚A组睾丸曲细精管直径与生精上皮厚度显著减小,管腔显著增大(P＜0.05),睾丸中Boule mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P ＜0.05,P＜0.01).结论 新生期双酚A染毒可通过降低睾丸组织内Boule mRNA和蛋白质的表达水平进而影响睾丸发育.

Y染色体上“无精子因子”区(azoospermia factor,AZF)的微缺失已是男性生精障碍的重要遗传因素之一[1-2].AZF分为AZFa、AZFb和AZFc 3个区域,约80％的微缺失出现在AZFc区[3].该区域主要有两大功能基因家族,DAZ和CDY基因家族.DAZ家族由3个同源性基因组成,包括BOULE、DAZL和DAZ.AZFc区的微缺失中DAZ基因拷贝数差异是影响男性遗传性生精障碍的主要因素之一[4].但其具体表型以及在男性生精障碍中的缺失率存在群体差异,在不同地域与人种间存在差异性[2,5].本研究选取本地区男性生精障碍病患者,进行AZFc微缺失率与DAZ基因拷贝数定量分析,并结合一原发不育病例家系分析,进一步阐述DAZ缺失类型在男性生精障碍中的分子遗传特征.

boule基因为DAZ基因家族成员之一,是动物生殖细胞特异表达基因.在哺乳动物中,boule基因的缺失会引起精子生成障碍而导致雄性不育.在无脊椎动物秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)中,boule基因同源物的缺失会引起其卵子发生障碍而导致雌性不育.龟鳖动物是最古老的爬行类,是从无羊膜卵到羊膜卵动物飞跃的过渡物种.相比于哺乳类及一些无脊椎动物,目前关于龟鳖动物生殖细胞发育模式的研究还非常有限.因此,本文以中华鳖(Pelodiscus sinensis)为研究对象,以期揭示boule基因对龟鳖动物生殖细胞发育分化的调控作用.首先,利用特异引物克隆获得中华鳖boule基因的cDNA序列,共1 005bp,其中,3'端非编码区57 bp,开放阅读框948 bp,共编码315个氨基酸.氨基酸序列多重比对分析显示,中华鳖与绿海龟(Chelonia mydas)同源性最高,达92％,与小鼠(Mus musculus)的同源性达83％,与果蝇(Drosophila melanogaster)的同源性达53％,与青鳉(Oryzias latipes)的同源性达42％.反转录实时定量PCR (RT-qPCR)分析结果显示,中华鳖boule mRNA主要在性腺组织精巢和卵巢中表达,而在其他体细胞组织中几乎检测不到表达.原位杂交结果显示,中华鳖boule mRNA在两性生殖细胞中特异表达,且在不同分化时期的生殖细胞中呈动态表达.在精巢中,boule mRNA在初级精母细胞中表达最强,在精原细胞和次级精母细胞中表达较弱,在精子细胞和精子中难以检测到表达信号;在卵巢中,boule mRNA在初级卵母细胞中表达信号最强且信号在初级卵母细胞胞质中均匀分布,生殖细胞发育进入卵母细胞生长期后,信号开始聚集在核周胞质,随着卵母细胞的成熟,信号逐渐变弱.本研究结果表明,boule基因可能在中华鳖两性生殖细胞的减数分裂过程中均具有重要的调控作用.

目的 研究新生小鼠暴露于邻苯二甲酸二丁酯(Dibutyl phthalate,DBP)对雄性小鼠睾丸组织结构的损伤作用以及对小鼠精子发生的影响.方法 怀孕ICR母鼠分娩后,将新生小鼠随机分为对照组和DBP组,每组12只.新生仔鼠从第1天开始每天颈背部皮下注射给药(DBP 100 mg/kg·bw)或溶剂(玉米油),直至出生第35天终止给药,取6只小鼠分离其睾丸组织,剩余6只继续饲养至70 d后分离其睾丸组织及附睾.检测附睾尾精子数量及活率并通过苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠睾丸组织结构的变化情况,Western blot和RT-PCR检测睾丸中Boule蛋白和Boule mRNA表达量的变化情况.结果 与对照组相比,出生第70天的DBP组精子数量下降,精子活率降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,第35天和第70天的DBP组睾丸生精小管直径和生精上皮厚度降低且生精小管管腔直径明显增大,差异具有统计学意义(P＜0.05);第35天和第70天的DBP组睾丸中Boule基因的表达产物mRNA和蛋白水平下降,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 新生期暴露于DBP会损伤小鼠睾丸组织结构,抑制睾丸组织内Boule基因的表达,进而影响精子发生.