水菜花(Ottelia cordata)是珍稀濒危的沉水植物,现仅分布在中国海南岛北部海口至文昌一带的淡水湿地,其造型优美,极具园艺观赏价值.然而,受人类活动影响,水菜花的生境急剧退缩且更加破碎化,濒临灭绝.为探究水菜花的繁殖特征和繁殖规律,该研究分析了水菜花的花部形态、性比、花粉活性、柱头可授性、反射光谱、花粉限制与无融合生殖及其传粉者类型与行为.结果表明:(1)水菜花雌雄异株,雌、雄个体的性比约为1∶2;水菜花雌、雄花形态相似,但雌花略大于雄花.(2)水菜花花粉活性和柱头可授性在花蕾期和开放期均较高.(3)中华蜜蜂(Apis cerana)是水菜花的主要传粉者,传粉效率较高且访问雄花的频率显著高于雌花.(4)水菜花雄蕊、雌蕊间的花色距离显著高于中华蜜蜂辨别的阈值(P＜0.001).(5)在自然授粉和人工授粉下,水菜花坐果率分别为95.29％和98.42％,并且不存在无融合生殖现象.综上所述,水菜花两性模拟的欺骗性传粉并不完美,传粉者可以从视觉上区分雌花和雄花;而由于水菜花雄花数量较多,传粉者低频率的"错访"足以达到水菜花雌花的繁殖需求.因此,在今后开展水菜花迁地保护、人工种群恢复等保育工作时,应重视水菜花种群大小、性别比例和当地传粉者种群数量.

研究对从江西省抚州市南丰县某中华鳖养殖基地患病中华鳖(Trionyx sinensis)组织中分离培养得到的一株按蚊伊丽莎白菌(Elizabethkingia anophelis)疑似菌株进行鉴定和药敏特性研究.在无菌环境中解剖患病中华鳖得到肝脏、脾脏组织,匀浆后接种在LB培养基上,分离得到优势菌株EJX2021.对该菌株进行形态学观察、16SRNA基因序列测定和生理生化鉴定以鉴定菌株种类;进行人工回归感染、组织病理学观察、毒力因子分析和抗生素药物敏感性试验研究其致病能力和药物敏感性特征.从患病中华鳖中分离出一株优势菌株EJX2021,结合其表型特征、16SRNA基因序列测定和生理生化鉴定,确定其为按蚊伊丽莎白菌.在人工回归感染后,该菌株对中华鳖15d的LD50为1.62×108 CFU/mL,95％置信区间为(0.78-3.37)×108 CFU/mL;组织病理学观察肠道、肺脏、脾脏、肝脏等组织出现不同程度病变.毒力因子分析显示该菌株包含246个潜在毒力基因.药物敏感性试验显示该菌株为多重耐药菌株,对多西环素、米诺环素、卡那霉素、哌拉西林、恩诺沙星、氟苯尼考敏感,对头孢曲松、头孢哌酮中度敏感,对新霉素等15种抗生素具有耐药性.研究证明了按蚊伊丽莎白菌是能够导致中华鳖病害的一种病原菌,为该细菌导致中华鳖病害的检测、鉴别和防治提供科学依据.

目的:建立一种鳖甲配方颗粒特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法.方法:根据中华鳖Trionyx sinen-sis及其混伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COXⅠ)基因序列,筛选出中华鳖的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,设计鳖甲鉴别专属引物BJ-5F及BJ-5R.通过优化PCR反应条件,确定最佳的PCR反应体系,并对该方法进行耐受性、适用性考察和测序验证.结果:当退火温度为 60℃,循环 33 次时,鳖甲药材、标准汤剂冻干粉及配方颗粒均可在约 236 bp处得到清晰单一的中华鳖条带,其混伪品及阴性对照品均无此条带.结论:该研究所建立的特异性PCR鉴别方法适用于快速鉴定鳖甲药材、标准汤剂冻干粉及配方颗粒的真伪,且具有专属性强、准确性高、简便易行等特点,为鳖甲配方颗粒质量标准的制定提供了参考依据.

为了研究Sox8基因在中华鳖性别分化中的功能,研究利用慢病毒介导的过表达载体,在性别分化前的雌性中华鳖中过表达Sox8.通过组织学分析和生殖细胞标记蛋白VASA的免疫荧光染色发现在Sox8过表达后,50％的ZW性腺髓质区发育出睾丸特有的、含有生殖细胞的性索结构;qRT-PCR和免疫荧光结果显示雌性特异性基因Foxl2和Cyp19a1表达量显著降低,而调控睾丸发育的Dmrt1、Sox9和Amh基因表达上调.实验结果表明Sox8的过表达诱导ZW胚胎性腺往雄性方向分化,揭示了Sox8在中华鳖睾丸分化过程中的作用.

目的:挖掘京帮中药炮制特色,发扬京帮炮制文化,丰富炮制地域特色研究内容.方法:以1986年版《北京市中药炮制规范》与2020年版《中华人民共和国药典》(《中国药典》)为研究对象,从辅料使用、炮制方法与特殊炮制工艺3个方面系统分析961味中药,对比总结京帮中药炮制特点.结果:①京帮中药炮制在醋、酒、蜜辅料用量及适用范围上显著多于《中国药典》,麦麸用量与适用范围显著少于《中国药典》;其特有辅料9种,包括米泔水、面粉、铅、卞罗卜、牛乳、麻油、朱砂、鳖血、灶心土;②京帮炮制方法在净制、研粉、捣碎、煅(炭)4个方面的应用多于《中国药典》两倍以上,且鲜药、切制、砂烫、炒焦、炒炭的使用也多于《中国药典》;③京帮特殊炮制工艺以发酵居多.结论:京帮中药炮制特色鲜明,具有独特的炮制内容与文化,是中药地域特色炮制的重要组成部分,应予更多研究与关注.

目的:评估饲料中添加姜黄渣对中华鳖存活率及抗高温应激能力的改善作用;通过中华鳖的抗氧化能力分析,探讨姜黄渣的生化作用机制.创新点:证实了饲料中添加姜黄渣对中华鳖具有增强抗高温能力,提高存活率的作用,为姜黄渣作为新的水产饲料添加剂的资源开发应用提供了重要科学依据.方法:将320只雌性中华鳖(体重约250 g)随机分为对照组(标准饲料)和实验组(饲料中添加10％的姜黄渣).在2013年7月到10月分别考察实验组和对照组中华鳖的体重、存活率;分析试验地海盐县的气温变化与中华鳖存活率的相关性;用超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒分别检测了两组中华鳖肝组织的SOD酶活力及MDA含量;用高效液相色谱分别测定比较了两组中华鳖皮肤的姜黄素含量.结论:补充姜黄渣的中华鳖皮肤呈现金黄色,皮肤所含色素为姜黄素,平均含量为(0.14±0.03)μg/g.存活率调查显示,实验组的中华鳖存活率比对照组高135.5％;SOD和MDA分析显示,实验组中华鳖肝组织的SOD酶活比对照组高112.8％,MDA含量比对照组低36.4％.根据气温资料分析推测,持续高温容易导致中华鳖死亡,补充姜黄渣可有效降低高温造成的死亡率.综合分析显示,补充姜黄渣能显著提高中华鳖的存活率及抗高温应激能力,其作用与姜黄渣所含姜黄素的抗氧化活性相关.

为探究GHRL基因多态性对中华鳖(Pelodiscus sinensis)生长性状的影响, 采用直接测序法在GHRL基因上检测到14个单核苷酸多态性位点C289T、G501T、T738C、G776T、A841G、T885C、T2960C、A2987T、G3390A、A3857C、G4718A、T4820C、A4850C、T4979C.随机选取同批繁殖的120只中华鳖用飞行时间质谱法进行SNPs位点的分型, 并分析与生长性状的相关性.检测结果显示, 所有SNP位点均符合Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05).方差分析结果显示, C289T位点CT、CC基因型的5项生长数据均显著高于TT基因型(P<0.05).S2位点AB基因型的体重、背甲长、背甲宽和裙边宽4项数据均显著高于AA基因型(P<0.05).G3390A位点AG基因型的背甲长、背甲宽2项数据显著高于AA基因型(P<0.05).G4718A位点AG基因型的背甲长、背甲宽、裙边宽3项数据显著高于AA基因型(P<0.05).在GHRL基因上获得的SNP位点可能影响着中华鳖的生长性状或与之紧密连锁, 可为中华鳖分子辅助育种提供助力与参考.

通过对松阳花鳖、德清花鳖、黄沙鳖、黄河鳖和洞庭湖鳖5个群体体色、背部花纹和腹部黑斑的观察,同时测量这5个群体的29项生物学外部形态指标,采用聚类分析和主成分分析方法进行统计分析.结果表明:与其他中华鳖群体相比,松阳花鳖在体色上与其他4个群体存在着差异,其背部主要呈青黑色或青褐色,甲壳上雪花样斑点较多且明显,腹部斑块图案较小,颜色较浅呈青色,腹部7个斑块出现的概率均较低,出现无斑块的概率为31.82％.其中斑块1出现的概率最低.聚类分析显示5个中华鳖群体可分为三支,松阳花鳖与黄沙鳖相距最近,聚为一支;黄河鳖和德清花鳖聚为一支;洞庭湖鳖与其他4个群体相距较远,单独聚为一支.主成分分析结果与聚类分析结果一致,且群体间形态差异主要表现在中华鳖背甲周长、裙边宽、头部和尾部的形态变化.其中松阳花鳖、德清花鳖和黄河鳖的后侧裙边宽/背甲长较大,与其他群体差异显著.

为了解墨鳖的营养价值, 对墨鳖、野生中华鳖、淮河鳖和日本鳖肌肉的一般营养成分、氨基酸含量、脂肪酸含量及裙边胶原蛋白进行测定和比较.结果显示: (1) 4个品系鳖肌肉水分含量分别为80.84%、79.48%、81.57%和79.25%, 墨鳖显著高于野生鳖和日本鳖(P＜0.05); 粗蛋白含量分别是17.82%、17.60%、15.93%和16.40%, 墨鳖含量最高, 显著高于淮河鳖和日本鳖(P＜0.05); 粗脂肪含量分别是0.42%、1.43%、0.65%和1.06%, 墨鳖显著低于其他鳖(P＜0.05); 4个品系鳖灰分含量差异不显著(P＞0.05).(2) 4个品系鳖肌肉中总氨基酸和呈味氨基酸含量均以墨鳖最高.(3)4个品系鳖不饱和脂肪酸含量分别为65.19%、56.44%、59.32%和54.73%, 墨鳖显著高于其他鳖(P＜0.05), 其中墨鳖单不饱和脂肪酸含量显著低于野生鳖(P＜0.05), 多不饱和脂肪酸含量显著高于其他3个品系(P＜0.05); 饱和脂肪酸含量分别为32.50%、41.85%、39.41%和39.98%, 墨鳖显著低于其他鳖(P＜0.05).(4)墨鳖肌肉中DHA和EPA含量与野生鳖差异不显著(P＞0.05), 显著高于淮河鳖和日本鳖(P＜0.05), 花生四烯酸(AA)含量显著高于其他3个品系鳖(P＜0.05).(5) 4个品系鳖裙边胶原蛋白含量均较高, 为160.6—170.4 mg/g.结果表明墨鳖是一种营养价值高、肉味鲜美的地方品系.

对患病中华鳖(Pelodiscus sinensis)进行病原分离、鉴定及药敏实验, 从患病中华鳖皮肤、肝肾脾重要器官分离纯化病原菌, 经理化特性测定及16S rRNA序列分析对其进行鉴定及人工感染试验, 并利用K-B及二倍稀释法进行药敏特性分析.结果表明分离株J22是为中华鳖腐皮病病原,其对中华鳖的LD50为3.30×104CFU/g.J22株理化特性与产吲哚金黄杆菌(Chryseobacterium indologenes)一致, 16S rRNA序列与产吲哚金黄杆菌同源性为99%, 综合判定J22株是产吲哚金黄杆菌.分离株对新霉素、庆大霉素及阿莫西林等12种抗生素高度敏感, 对氟苯尼考及多西环素等抗生素耐药; 二氧化氯、漂白粉及高铁酸钾对分离株消毒效果较好.分离菌株J22是中华鳖病原菌, 养殖时可选用庆大霉素、新霉素或者阿莫西林内服, 配合使用二氧化氯、漂白粉及高铁酸钾等外用进行防控.