目的 研究mazEF基因在肠球菌临床分离株的分布特征,并探讨其与肠球菌耐药的相关性.方法 收集包头地区2013年1月-2016年12月临床来源的肠球菌187株,随机选出90株作为实验菌株,采用聚合酶链反应(PCR)法及基因测序技术检测mazEF基因,VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定及药敏系统鉴定肠球菌并同步测定10种抗菌药物(氨苄西林、青霉素、四环素、替加环素、左氧氟沙星、环丙沙星、万古霉素、利奈唑胺、高水平庆大霉素和红霉素)最低抑菌浓度(minimal inhibititory concentration,MIC),分析mazEF基因在肠球菌基因组中的分布及与耐药之间的关联.结果 90株肠球菌属,mazEF基因在肠球菌属基因组的阳性率为86.7％.在对氨苄西林、左氧氟沙星、青霉素、四环素、高水平庆大霉素、红霉素、环丙沙星和万古霉素耐药的肠球菌中,mazEF基因阳性率分别为88.7％、86.2％、89.1％、84.6％、81.5％、85.0％、89.4％和60.0％,敏感的肠球菌中,mazEF基因阳性率分别83.7％、87.5％、82.6％、92.0％、94.4％、100.0％、87.1％和88.2％,耐药株和敏感株中,mazEF基因阳性率无统计学差异(P＞0.01).结论 mazEF基因在肠球菌基因组中分布的阳性率为86.7％(78/90),其分布与对氨苄西林、左氧氟沙星、青霉素、四环素、高水平庆大霉素、红霉素和环丙沙星耐药无显著相关性,与天然耐万古霉素也无显著相关性.

2018年4月21至24日,第28届欧洲临床微生物和感染病大会在西班牙马德里隆重召开.本次大会聚焦多个临床微生物与感染性疾病相关热点话题,包括欧洲药敏试验委员会折点系统更新、 血培养直接药敏试验的标准化、 铜绿假单胞菌菌血症新型预后标志物HeIP、 革兰阴性菌菌血症抗菌药物治疗7 d不逊于14 d、 西尼罗河病毒在希腊南部再次出现、 荷兰感染危险扫描系统助力感染控制、 磷霉素新型耐药机制-uhpB和uhpC突变、 耳念珠菌在英国重症监护病房暴发、mazEF毒素-抗毒素系统可作为新型抗菌药物的靶点等.此次会议也发出了多个中国声音,包括中国细菌耐药监测网首次在大会亮相以及华人抗菌药物敏感性试验委员会第二次工作会议暨全球华人临床微生物和感染学会中欧论坛成功举办.

目的 研究北京与非北京基因型结核分枝杆菌的生长曲线、mazEF3,6,9系统表达有无差异.方法 测绘上述菌株及其mazEF3,6,9基因缺失和过表达菌株在标准、低氧和营养饥饿培养条件下的生长曲线.使用qRT-PCR技术检测各菌株的mazEF3,6,9、mazF3,6,9和mazE3,6,9基因mRNA表达水平;利用Western Blot技术检测MazF9蛋白表达水平.结果 在标准和低氧条件下培养的第4、6、8、10 d,营养饥饿条件下培养的第2、4、6、8d,北京基因型菌株的OD值(细菌数量)均高于非北京基因型菌株,差异有统计学意义(P＜0.05);在上述3种培养条件下,北京和非北京基因型mazEF3,6,9缺失突变株和过表达株菌数均低于其亲本株.在mRNA、蛋白水平上,与非北京基因型菌株相比,北京基因型菌株mazEF3高表达9.55倍、mazF3高表达4.86倍、mazF6高表达2.64倍、mazF9高表达5.27倍和mazE9低表达0.16倍;mazF9蛋白高表达1.62倍,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 北京与非北京基因型结核分枝杆菌的生长曲线、mazEF3,6,9系统表达存在差异,mazEF系统与北京基因型菌株流行相关.

[背景]植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)广泛存在于植物、乳制品、肉制品、哺乳动物和昆虫的肠道等多种生态环境中.[目的]探究不同分离源 L.plantarum基因组与其所在环境是否存在潜在的联系.[方法]利用比较基因组学对 126株分离自植物、乳制品、肉制品、果蝇及哺乳动物肠道和口腔等部位的 L.plantarum菌株基因组进行系统发育分析和功能基因组分析,解析不同分离源菌株间的亲缘关系和进化历程.[结果]果蝇分离株的基因组大小显著高于植物、哺乳动物肠道、肉制品和乳制品分离株(P＜0.05),植物和哺乳动物肠道、口腔等部位与肉制品分离株的基因组大小和编码基因数量无显著差异(P＞0.05).基于单拷贝基因串联和核心基因系统发育树分析均发现,果蝇分离株和乳制品分离株分别集中聚集分布在某一分支中,其余分离源均匀分布在各个分支中.附属基因分析结果与系统发育树分析结果一致.功能基因注释结果发现,果蝇分离株的环境特异性基因参与低聚果糖和几丁质代谢,乳制品分离株的环境特异性基因参与 mazEF毒素-抗毒素系统和CRISPR系统.[结论]植物乳杆菌分离株为适应较为独特的果蝇和乳制品生境而发生了适应性进化.本研究为植物乳杆菌适应性进化提供了新见解,同时为解析菌株的进化历程提供了理论基础.

目的 探索mazG基因参与调控mazEF毒素-抗毒素系统(TAs)介导的细菌生长抑制与程序性死亡的分子机制,明确MazG蛋白真正的生理功能.方法 以大肠杆菌MC4100为原型,通过relA基因的回复突变,获得relA野生型的菌株MC4200.通过同源重组的方法,构建大肠杆菌mazG、mazEF、mazEFG基因敲除菌株,测试mazG基因在不同基因背景菌株中过表达对细菌存活率的影响;通过rifampicin、H2O2及serine hydroxamate(SHT)等胁迫条件处理细菌,研究mazG及mazEFG操纵子缺失菌株的生长曲线与存活率;克隆大肠杆菌mazG基因,构建诱导型过表达质粒pET28a-mazG及突变体pET28a-mazG E38A,在BL21菌株中表达纯化MazG蛋白,通过酶学实验验证了MazG蛋白的去磷酸酶活性;测试突变体过表达对细菌存活率的影响.结果 mazG过表达对大肠杆菌MC4200的生长无显著影响,但对mazEFG基因敲除株具有显著抑制作用;MazG的细胞毒性依赖于其NTP-PPase酶活性;mazEF的存在会显著抑制mazG的表型;mazEF/mazG/mazEFG敲除不影响大肠杆菌正常环境下的生长曲线;在胁迫条件下,mazG敲除菌株的存活率与mazEFG的敲除菌株基本一致,显著高于野生型.结论 mazG基因参与mazEF诱导的细菌程序性死亡调控,并对细菌的生长抑制具有重要作用.本研究为TAs的研究提供了新的角度,有助于进一步理解TAs在细菌生长与死亡调节中的作用机制.