背景与目的:阐明介导肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)与肿瘤细胞之间通讯的信号分子仍然是一个巨大的挑战,这些信号分子对癌症转移至关重要.本研究旨在探讨普列克底物蛋白2(pleckstrin-2,PLEK2)/miR-196a信号轴介导肿瘤微环境中肺癌细胞的通讯机制.方法:选择人肺腺癌细胞系H1299和人胚胎肺细胞MRC-5作为研究对象.用表达PLEK2的慢病毒(PLEK2)和载体对照(Vector)转染H1299细胞,并在转染24 h后分离外泌体(Vector_exo、PLEK2_exo).采用miR-196a模拟物或抑制剂转染MRC-5细胞.通过蛋白质印迹法(Western blot)分析PLEK2和上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白水平,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)分析miR-196a表达,采用transwell实验测定细胞转移和侵袭能力.将6只雌性BALB/c-nu小鼠随机分为Vector组和PLEK2组,每组3只.通过尾静脉向各组小鼠注射转染Vector或PLEK2的H1299细胞.4周后,取出肺组织进行H-E染色和免疫组织化学染色分析α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达.所有动物实验均经长沙市第一医院(中南大学湘雅医学院附属长沙医院)伦理委员会批准(伦理编号为EI-2021-103).结果:与Vector组相比,PLEK2组小鼠肺结节数和转移灶中α-SMA表达显著增加(P＜0.001).与Vector组相比,PLEK2组H1229细胞中miR-196a表达水平显著增加(P＜0.05),并且PLEK2_exo中miR-196a表达水平显著高于Vector_exo(P＜0.05).与Vector_exo组相比,PLEK2_exo组MRC-5细胞中miR-196a、α-SMA和成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)表达水平显著增加(P＜0.05).与阴性对照(negative control,NC)相比,miR-196a转染的MRC-5细胞中α-SMA和FAP表达水平显著增加(P＜0.05).相反,通过miR-196a抑制剂(si-miR-196a#1、si-miR-196a#)转染,α-SMA和FAP表达水平被显著抑制(P＜0.05).与NC-CM组相比,miR-196a-CM组H1299细胞的转移、侵袭细胞数和波形蛋白(vimentin)表达均显著增加(P＜0.001),E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达显著降低(P＜0.001).此外,与Vector_exo-CM组相比,PLEK2_exo-CM组H1299细胞的转移、侵袭细胞数和vimentin表达均显著增加(P＜0.01),E-cadherin表达显著降低(P＜0.001).结论:PLEK2上调能够增强肺癌细胞来源的外泌体miR-196a水平,从而促进CAFs激活.激活的CAFs能够进一步增强肺癌细胞的侵袭能力.

目的:探讨miR-1229-5p对SW480 细胞生物学功能的影响和作用机制.方法:采用瞬时转染在SW480 细胞中过表达miR-1229-5p,进行细胞克隆、EdU实验、MTT、细胞划痕、Transwell小室迁移及侵袭实验,检测miR-1229-5p mimics组与对照组结直肠癌细胞SW480 生物学功能变化.转染过表达miR-1229-5p慢病毒后进行裸鼠皮下成瘤实验,观察miR-1229-5p在体内对细胞增殖能力的影响.通过预测软件TargetScan筛选出X连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1)作为miR-1229-5p的潜在下游靶基因,并检测miR-1229-5p对其蛋白表达的影响.在SW480 细胞中转染XAF1 过表达质粒,共转染miR-1229-5p后进行回复实验验证miR-1229-5p通过靶向XAF1 促进SW480 细胞增殖及侵袭.结果:miR-1229-5p mimics组较miR-NC组细胞的增殖、迁移及侵袭能力均提高(P＜0.01);miR-1229-5p组瘤体体积高于miR-NC组(P＜0.01);miR-1229-5p组对靶基因XAF1 表达量低于miR-NC组(P＜0.01),转染XAF1 质粒后可逆转miR-1229-5p mimics对细胞增殖及侵袭的促进作用(P＜0.01).结论:miR-1229-5p可通过靶向XAF1 促进结直肠癌细胞SW480 的增殖和侵袭能力.

目的:探讨卵巢子宫内膜异位症(ovarian endometriosis,OEM)外泌体微小RNA(microRNA,miRNA)的表达谱.方法:采用芯片技术对3例OEM患者及3例健康对照者的在位内膜间质细胞外泌体miRNA进行分析,筛选出组间差异miRNA.结果:获得存在差异表达miRNA共12条,其中hsa-miR-6829-5p、hsa-miR-5188、hsa-miR-4430、hsa-miR-584-5p、hsa-miR-4485-5p、hsa-miR-4257在实验组表达上调,hsa-miR-188-5p、hsa-miR-4741、hsa-miR-4516、hsa-miR-1229-5p、hsa-miR-7150、hsa-miR-5787表达下调.对表达差异较大的外泌体miRNA进行靶基因预测及其基因功能(gene ontology,GO)分析和信号通路(pathway)分析,发现靶基因聚集的生物学功能多数参与生物进展过程的调控.结论:OEM患者与健康对照者的在位内膜间质细胞外泌体miRNA存在着差异性表达.差异性表达的miRNA特异性很高,对进一步阐明该疾病的发病机制和寻找新的诊断标记物具有重要意义.

目的 分析循环miR-1229在原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者血清中的表达特征,并分析其作为HCC诊断与预后生物标志物的潜在价值.方法 收集HCC患者与体检健康者各150例的外周血标本并成功分离血清.采用qRT-PCR检测血清中循环miR-1229的表达水平.分析循环miR-1229的表达水平与HCC临床病理特征的关系.通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估循环miR-1229对HCC诊断的敏感度和特异度.通过Kaplan-Meier法绘制生存曲线,并利用Log-rank检验评估循环miR-1229与HCC患者预后的关系.结果 HCC患者血清中循环miR-1229的表达水平高于健康者(P<0.05).淋巴结转移阳性HCC患者血清中循环miR-1229的表达水平高于淋巴结转移阴性患者(P<0.05).循环miR-1229的表达水平在淋巴结转移及远处转移方面比较,差异均具有统计学意义(均P<0.05),但在年龄、性别、乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)、甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)水平、肿瘤体积、分化程度、TNM分期及巴塞罗那(barcelona-clinic liver cancer,BCLC)分期方面比较,差异均无统计学意义(均P>0.05).循环miR-1229对HCC及淋巴结转移具有较高的诊断价值,曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.79和0.86,敏感度分别为68.5％和71.9％,特异度分别为77.5％和82.2％(均P<0.05).高表达循环miR-1229患者5年总体生存率低于低表达循环miR-1229患者(20.0％vs26.7％,P<0.05).结论 循环miR-1229在HCC中表达上调,并与淋巴结转移及远处转移相关.循环miR-1229对HCC与淋巴结转移具有较高的诊断价值并与预后相关.