目的:利用生物信息学方法分析糖皮质激素对晶状体上皮细胞(LECs)生物学功能的影响，并预测相关的微小RNA(miRNA)。方法:下载GSE3040数据集，设置1 μmol/L地塞米松处理的人LECs细胞株HLE-B3细胞为实验组，1 μmol/L二甲基亚砜(DMSO)处理的HLE-B3细胞为对照组，利用GEO2R工具分析2个组间的差异表达基因。利用Metascape网站进行差异基因功能富集分析，通过EdU细胞增生实验检测2个组间细胞增生差异。通过STRING网站和cytoscape软件构建蛋白互作网络图，cytohubba app计算出hub基因，采用实时荧光定量PCR法检测2个组间hub基因的表达差异。利用mirCode数据库预测与hub基因相关的miRNA。结果:实验组与对照组间分析出341个差异基因，其中上调基因为300个，下调基因为41个。下调基因中差异最显著的5个基因是 SLC12A1、 MED13L、 ALDH5A1、 SLC15A3和 WWC1基因；上调基因中差异最显著的5个基因是 SCNN1A、 ANKRD36、 FKBP5、 PYY和 ADH1B基因。列出了富集量排名前20的生物学功能关键词，结果显示富集量最大的是对HLE-B3细胞增生的负向调节。实验组细胞增生率为(8.09±0.20)%，低于对照组的(39.63±0.80)%，差异有统计学意义( t＝38.43， P<0.01)。前10位hub基因分别是 SST、 CXCL8、 GRM1、 GNRH1、 CXCL5、 PPBP、 CX3CR1、 PYY、 EDNRA和 GRK5，实时荧光定量PCR结果显示2个组间SST、CXCL8、GRM1、PYY、EDNRA和GRK5 mRNA相对表达量比较差异均有统计学意义(均 P<0.05)。与hub基因相关性强的前6位miRNA分别是miR-15abc、miR-214、miR-23abc、miR-129-5p、miR-132和miR-24。 结论:1 μmol/L地塞米松即可对HLE-B3细胞的增生产生负性调控作用。 SST、 CXCL8、 GRM1、 PYY、 EDNRA和 GRK5基因可能是糖皮质激素的作用靶点，miR-15abc、miR-214、miR-23abc、miR-129-5p、miR-132和miR-24最可能与hub基因相关。

目的:探讨微小RNA-129-3p(miR-129-3p)通过靶向E2F转录因子5(E2F5)影响肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的恶性生物学行为。方法:荧光定量聚合酶链反应检测不同肝癌细胞株与正常肝细胞株中miR-129-3p及E2F5的表达；构建过表达miR-129-3p的HepG2细胞株，噻唑蓝细胞增殖实验、平板克隆实验检测细胞增殖及克隆形成能力；细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力，蛋白质印迹法检测蛋白表达；双荧光素酶报告基因法和蛋白质印迹法验证miR-129-3p和E2F5的靶向关系。实验分组如下：细胞未经转染(NC)组；转染对照miR-con(miR-con)组；转染miR-129-3p(miR-129-3p)组；共转染miR-129-3p和空载体pcDNA (miR-129-3p+pcDNA)组；共转染miR-129-3p和pcDNA-E2F5(miR-129-3p+pcDNA-E2F5)组。结果:肝癌细胞株MHCC-97H、HepG2、LM3、Hep3B、PLC、Huh7中miR-129-3p的表达量均低于正常肝细胞株HL-7702，差异具有统计学意义(均 P<0.05)。与NC组和miR-con组相比，miR-129-3p组的细胞克隆数[(86.56±20.84)比(511.29±45.03)和(509.78±40.81)]、细胞迁移率[(3.03±1.29)%比(15.01±2.30)%和(14.99±2.31)%]、迁移相关蛋白MMP-2相对表达量[(0.51±0.22)比(1.87±0.30)和(1.84±0.35)]和穿膜细胞数[(33.10±1.58)比(101.23±0.31)和(100.96±3.44)个]均降低，差异有统计学意义(均 P<0.05)。双荧光素酶报告实验表明miR-129-3p可负性靶向调控抑制E2F5表达。 结论:miR-129-3p在肝癌细胞中低表达，过表达miR-129-3p可通过靶向E2F5抑制肝癌细胞恶性生物学行为。

目的:探究长链非编码RNA（lncRNA）HAGLR在乳腺癌中的表达情况及其对乳腺癌预后的影响，并构建竞争性内源RNA（ceRNA）网络。方法:采用Atlas of Genetics and Cytogenetics in Oncology and Haematology网站检索HAGLR基因染色体定位及转录本表达情况。采用lnclocater网站预测HAGLR亚细胞定位。通过lnCAR数据库分析HAGLR在乳腺癌组织和癌旁组织的差异表达情况，按HAGLR表达水平，将lnCAR数据库患者分为HAGLR高表达组和HAGLR低表达组，采用Kaplan-Meier法分析两组间总生存（OS）及无转移生存情况，并通过UCSC Xena数据库进行验证。通过lnCAR数据库检索HAGLR共表达基因，将排位前200个共表达基因提交至Metascape网站，进行基因本体（GO）、京都基因和基因组百科全书（KEGG）功能富集分析，构建蛋白互作网络（PPI）。采用生物信息学在线分析网站starbase预测HAGLR靶向的微RNA（miRNA）和可直接编码蛋白的mRNA，通过Cytoscape3.8软件构建HAGLR的ceRNA网络。结果:HAGLR基因定位于2q31.1，主要分布于细胞质；HAGLR在乳腺癌组织中的表达水平高于癌旁组织，差异有统计学意义（ P<0.001）。对lnCAR数据库和UCSC Xena数据库分析均显示，HAGLR高表达组OS较低表达组均差（均 P<0.01）；lnCAR数据库中HAGLR高表达组无转移生存较低表达组差（ P＝0.030）。前200个HAGLR共表达基因中与HAGLR负相关基因129个，与HAGLR正相关基因71个。KEGG通路分析显示，HAGLR与代谢通路、MAPK信号通路、JAK-STAT信号通路及癌症通路有关；GO注释分析显示，HAGLR主要富集在细胞周期、着丝粒复合体组装、有丝分裂进程、蛋白激酶结合、激酶活性的调节、细胞对DNA损伤刺激的反应等多种功能中。hsa-miR-130b-3p、hsa-miR-1245b-5p、hsa-miR-182b-5p、hsa-miR-512-3p、hsa-miR-302b-3p、hsa-miR-185b-5p、hsa-miR-106b-5p为HAGLR靶向miRNA。 结论:HAGLR在乳腺癌组织中高表达，其可能是乳腺癌预后预测的生物标志物。

目的:探讨环状RNA真核起始因子6(circEIF6)调节miR-129-5p/肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)轴对胰腺癌细胞增殖、凋亡和吉西他滨(GEM)敏感性的影响.方法:将胰腺癌细胞SW1990分为对照组(正常培养)、si-NC组(转染si-NC)、si-circEIF6组(转染si-circEIF6)、si-circEIF6+inhibitor-NC组(si-circEIF6和inhibitor-NC共转染)、si-circEIF6+miR-129-5p inhibitor组(si-circEIF6和miR-129-5p inhibitor共转染);RT-qPCR检测circEIF6、miR-129-5p的表达水平;MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹检测TRAF6、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达;MTT法检测不同浓度GEM对细胞增殖抑制率的影响;双荧光素酶报告基因实验分别验证circEIF6和miR-129-5p、miR-129-5p和TRAF6的关系.结果:与对照组、si-NC组比较,si-circEIF6组circEIF6表达、OD490值、TRAF6、PCNA蛋白表达降低,miR-129-5p表达、细胞凋亡率、Bax、caspase-3蛋白表达升高;与si-circEIF6组、si-circEIF6+inhibitor-NC组比较,si-circEIF6+miR-129-5p inhibitor组OD490值、TRAF6、PCNA蛋白表达升高,miR-129-5p表达、细胞凋亡率、Bax、caspase-3蛋白表达降低;细胞增殖抑制率在GEM处理下以剂量依赖性的方式显著增加;与对照组比较,GEM处理下细胞的增殖抑制率、凋亡率显著升高,敲低circEIF6可提高GEM处理下细胞的增殖抑制率、凋亡率,而miR-129-5p inhibitor可减弱敲低circEIF6发挥的上述作用;circEIF6靶向负调控miR-129-5p的表达,miR-129-5p靶向负调控TRAF6的表达;双荧光素酶报告实验证实miR-129-5p与circEIF6和TRAF6存在靶向关系.结论:敲低circEIF6可能通过靶向miR-129-5p下调TRAF6表达,进而抑制胰腺癌细胞增殖、促进细胞凋亡、提高胰腺癌细胞对GEM的敏感性.

目的:探讨化瘀散水煎剂通过调控微小RNA-129-5p/叉头框蛋白C1(FOXC1)轴对肝癌裸鼠移植瘤生长的影响.方法:建立肝癌裸鼠移植瘤模型,并分为裸鼠NC组、化瘀散水煎剂组、化瘀散水煎剂+ inhibitor-NC组、化瘀散水煎剂+miR-129-5p inhibitor组,每组8 只.qRT-PCR法检测miR-129-5p、FOXC1 mRNA表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-129-5p与FOXC1 靶向调控关系,观察记录裸鼠的瘤重及移植瘤体积,HE染色观察移植瘤组织形态,TUNEL检测肿瘤组织细胞凋亡,免疫组织化学染色检测瘤组织 Ki-67、Cleaved Caspase-3、FOXC1 表达,Western blot 检测 Ki-67、Cleaved Caspase-3、FOXC1 蛋白表达.结果:miR-129-5p在肝癌细胞中表达显著下降,FOXC1 mRNA表达显著升高,其中HepG2 细胞变化最显著(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验表明miR-129-5p与FOXC1 存在靶向调控关系;与NC组相比,化瘀散水煎剂组肿瘤细胞出现坏死,凋亡数增加,miR-129-5p、Cleaved Caspase-3显著升高,移植瘤质量和体积、FOXC1、Ki-67 表达显著降低(P<0.05);下调miR-129-5p逆转化瘀散水煎剂对肝癌移植瘤的抑制作用(P<0.05).结论:化瘀散水煎剂可能通过上调miR-129-5p从而下调FOXC1 表达,进而抑制肝癌移植瘤生长.

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)NUTM2A-AS1对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响及分子机制.方法 将人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)在DMEM培养基中培养,采用100 μg/mL oxLDL处理的HUVEC纳入oxLDL组,常规培养的细胞纳入Con组.将lncRNA NUTM2A-AS1干扰表达载体及阴性对照、miR-129-5p模拟物及阴性对照转染至 HUVEC 后采用 100μg/mL oxLDL 处理后的细胞分别纳入 oxLDL+si-NUTM2A-AS1 组、oxLDL+si-NC 组、oxLDL+miR-129-5p组、oxLDL+miR-NC组.将lncRNA NUTM2A-AS1干扰表达载体与微小RNA(miR)-129-5p抑制剂或阴性对照共转染至HUVEC 后采用 100 μg/mL 的 oxLDL 处理的细胞分别纳入 oxLDL+si-NUTM2A-AS1+anti-miR-129-5p 组、oxLDL+si-NUTM2A-AS1+anti-miR-NC组.采用试剂盒测量细胞中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用蛋白质印迹法检测蛋白表达;采用双荧光素酶报告实验及RNA下拉实验检测NUTM2A-AS1与miR-129-5p的靶向关系.结果 与Con组比较,oxLDL组lncRNA NUTM2A-AS1表达水平升高,miR-129-5p表达水平降低,MDA含量升高,SOD、GSH-Px活性降低,血管内皮细胞凋亡率和cleaved-caspase3、cleaved-caspase9表达水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05).干扰lncRNA NUTM2A-AS1表达或过表达miR-129-5p后,MDA含量降低,SOD、GSH-Px活性升高,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P＜0.05).lncRNA NUTM2A-AS1敲低介导的oxLDL条件下血管内皮细胞的损伤抑制可以被miR-129-5p下调逆转.lncRNA NUTM2A-AS1靶向调控miR-129-5p.结论 干扰lncRNA NUTM2A-AS1表达通过靶向上调miR-129-5p抑制oxLDL诱导的血管内皮细胞损伤.

目的:探讨miR-129-5p在肝细胞癌(HCC)发展中的作用及其机制.方法:通过实时荧光定量-PCR(qRT-PCR)检测miR-129-5p在正常血清及肝癌患者血清、人正常肝细胞L02和人肝癌细胞系中的表达情况.采用脂质体转染技术将miR-129-5p mimics转染至人肝癌细胞HCCLM3细胞,应用Western印迹检测人类婆罗双树样基因-4(SALL4)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)蛋白的表达.通过CCK-8实验、克隆形成实验、细胞周期检测、细胞划痕实验和Transwell实验等检测在体外过表达miR-129-5p对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响.此外,通过生物信息学工具、数据库分析和荧光素酶报告基因检测实验,探索miR-129-5p在HCC中的靶点,并探讨靶点SALL4是否介导miR-129-5p对HCC细胞的作用.结果:与正常血清相比,肝癌患者血清miRNA-129-5p表达量显著降低(t=13.32,P＜0.001),与LO2相比,肝癌细胞系HepG2、Hep3B、HCCLM3、BEL-7402和QGY-7703的miR-129-5p表达量均显著降低(t=30.35、33.08、37.11、32.87、8.2,均P＜0.05).miR-129-5p过表达可以抑制肝癌细胞增殖、侵袭和转移.StarBase预测显示miR-129-5p与SALL4有潜在结合位点,双荧光素酶报告基因检测证明miR-129-5p与SALL4直接结合.与对照组相比,miR-129-5p表达后SALL4和PD-L1的蛋白水平明显降低(t=12.68、t=8.798,均P＜0.05).miR-129-5p可以通过调控SALL4的表达,抑制HCC细胞的活力、增殖、迁移和侵袭(F=26.11、147.2、4.302、321.3,均P＜0.05).结论:过表达miR-129-5p通过抑制SALL4表达,抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭.

目的:探讨CircMATR3调节miR-129-5p/SOX2轴对鼻咽癌细胞恶性生物学行为的影响.方法:以鼻咽癌细胞系CNE1为研究对象,将CNE1细胞分NC组、si-NC组、si-CircMATR3组、miR-NC组、miR-129-5p mimic 组、si-CircMATR3+inhibitor NC 组、si-CircMATR3+miR-129-5p inhibitor 组、si-SOX2 组.RT-qPCR 检测细胞中 CircMATR3、miR-129-5p、SOX2 mRNA 的表达;Western blot 检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证CircMATR3与miR-129-5p、miR-129-5p与SOX2之间的靶向关系;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Hoechst33342实验观察细胞形态学变化;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡.结果:CircMATR3与miR-129-5p、miR-129-5p与SOX2之间存在靶向关系;沉默CircMATR3或过表达miR-129-5p或沉默SOX2可以抑制鼻咽癌细胞CNE1的克隆形成、侵袭和细胞周期转变,促进细胞凋亡和凋亡小体的形成;抑制miR-129-5p表达一定程度可以逆转沉默CircMATR3对于CNE1细胞的抑制作用.结论:沉默CircMATR3可以上调miR-129-5p表达,抑制SOX2表达,进而抑制鼻咽癌细胞CNE1的克隆形成、侵袭,促进细胞凋亡.

目的:研究miR-129-5p调控HMGB1表达在胰腺癌细胞凋亡中的作用.方法:以未处理的胰腺癌SW1990 细胞作为对照组(Control组),用脂质体转染法将mimics-NC(空载体)、miR-129-5p mimics、inhibitor-NC(空载体)、miR-129-5p inhibitor分别转染SW1990细胞作为mimics-NC组、miR-129-5p 过表达组(miR-129-5p mimics组)、inhibitor-NC组、miR-129-5p 低表达组(miR-129-5p inhibitor组),通过在线靶基因预测网站Target genes预测miR-129-5p与HMGB1是否存在结合位点,双荧光素酶基因报告实验验证miR-129-5p与HMGB1的靶向关系.采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-129-5p的表达水平,Western blot法检测HMGB1蛋白及凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2表达.Hoechst染色观察细胞凋亡变化.结果:与mimics-NC组及Control组比较,miR-129-5p mimics转染显著上调miR-129-5p水平(P<0.01),抑制HMGB1(P<0.01)、Bcl-2(P<0.05)蛋白表达,促进Caspase-3蛋白表达(P<0.05),促进细胞凋亡;与inhibitor-NC组及Control组比较,miR-129-5p inhibitor转染显著下调miR-129-5p水平(P<0.05),促进HMGB1、Bcl-2蛋白表达(均P<0.05),抑制Caspase-3蛋白表达(P<0.01),抑制细胞凋亡.双荧光素酶报告基因检测结果显示miR-129-5p可抑制野生型HMGB1 细胞的荧光活性,靶向调控HMGB1 的表达.结论:miR-129-5p通过靶向抑制HMGB1的表达进而促进胰腺癌SW1990细胞凋亡.

目的 探讨二氯二苯基三氯乙烷(dichlorodiphenyltrichloroethane,DDT)诱导人结直肠癌增殖、侵袭与微小RNA-129(microRNA-129,miR-129)/细胞周期蛋白依赖性激酶-14(cyclin-dependent kinase-14,CDK-14)表达的关系.方法 5x106个/mL密度的人结直肠癌细胞分别用终浓度为0、100、250和500 nmol/L的DDT处理72 h,运用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]法及甲基紫染色测定细胞活力的和细胞细胞集落,流式细胞仪测定细胞凋亡水平,Transwell小室(transwell chamber,Transwell)侵袭室及划痕试验测定细胞侵袭迁移水平,实时荧光逆转录(real-time fluorescent reverse transcription,RT-PCR)法及蛋白印迹法测定细胞miR-129、CDK-14、卷曲螺旋结构域-34(coiled-coil domain-34,CCDC34)、半乳糖激酶 1(Galactokinase 1,GALK1)水平.结果 100、250 和 500 nmol/L DDT 组细胞增殖水平[(70.59±7.72、76.63±8.32、84.25±9.04 vs 62.58±6.83)％]、细胞集落[(99.95± 9.58、215.63±19.85、398.96±35.26vs62.63±6.52)个]、侵袭数目[(76.25±9.58、154.62±19.51、298.96±38.57vs49.65±6.65)个]、迁移水平(75.96±14.58、119.69±20.59、165.63±32.68 vs 11.59±2.28)、CDK-14、CCDC34、GALK1 mRNA 蛋白水平明显高于对照组(P＜0.01),凋亡率、miR-129水平明显低于对照组(P＜0.01);且500 nmol/L DDT组细胞增殖水平、细胞集落、侵袭数目、迁移水平、CDK-14 mRNA 蛋白[(1.60±0.28、2.14±0.33、2.99±0.51 vs 0.92±0.16),(0.42±0.07、0.85±0.14、1.20±0.20 vs 0.21± 0.03)]、CCDC34(0.48±0.08、0.87±0.15、1.18±0.18 vs 0.28±0.07)、GALK1(0.50±0.09、0.84±0.14、1.22±0.19 vs 0.30±0.08)蛋白水平均高于 250 nmol/L DDT 组,差异均有统计学意义(均 P＜0.01),凋亡率(1.70±0.31、1.00±0.16、0.60±0.11 vs 3.00±0.51)、miR-129(1.42±0.24、0.92±0.15、0.64±0.10 vs 1.78±0.28)水平均低于 250 nmol/L DDT组,差异均有统计学意义(均P＜0.01);250 nmol/L DDT组细胞增殖水平、细胞集落、侵袭数目、迁移水平、CDK-14、CCDC34、GALK1 mRNA蛋白水平均高于100 nmol/L DDT组,差异均有统计学意义(均P＜0.01),250 nmol/L DDT组细胞凋亡率、miR-129水平均低于100 nmol/L DDT组,差异均有统计学意义(均P＜0.01);DDT浓度与细胞增殖水平、细胞集落、侵袭数目、迁移水平、凋亡率、miR-129水平、CDK-14、CCDC34、GALK1 mRNA蛋白水平有明显剂量-反应关系(P＜0.01).结论 DDT下调miR-129表达靶向上调调控CDK-14以及CCDC34、GALK1的表达,从而促进结直肠癌细胞的增殖和侵袭,并抑制其凋亡.