目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)同源盒D基因簇反义生长相关长非编码RNA(HAGLR)对前列腺癌DU145细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测人前列腺癌DU145细胞和正常前列腺上皮RWPE-1细胞中HAGLR的表达水平。将体外培养的DU145细胞分为对照组(未转染)、siNC组(转染阴性对照)和siHAGLR组(转染靶向HAGLR的小干扰RNA)，采用实时荧光定量PCR检测各组细胞中HAGLR和微小RNA(miR)-6516-5p的表达水平，噻唑蓝(MTT)法、Transwell小室实验和流式细胞仪检测各组细胞增殖、侵袭和凋亡。采用双荧光素酶报告基因实验检测HAGLR和miR-6516-5p的靶向结合关系。将miR-6516-5p抑制剂(anti-miR-6516-5p)、miRNA抑制剂阴性对照(anti-miR-NC)分别与HAGLR-siRNA共转染后观察下调miR-6516-5p表达对HAGLR低表达的DU145细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。多组间比较使用单因素方差分析和LSD- t检验，两组间比较采用独立样本 t检验。 结果:DU145细胞中HAGLR的表达水平(4.38±1.15比1.00±0.06， t＝8.727， P<0.05)明显高于RWPE-1细胞，差异有统计学意义。siNC组细胞吸光度值(1.01±0.08比0.98±0.06， t＝0.900， P>0.05)、穿膜细胞数[(119.75±8.86)个比(124.56±11.35)个， t＝1.002， P>0.05]和细胞凋亡率[(6.62±1.06)%比(6.85±1.12)%， t＝0.447， P>0.05]与对照组比较差异均无统计学意义。siHAGLR组细胞吸光度值(0.73±0.05比0.98±0.06，1.01±0.08， t对照＝9.603， tsiNC＝8.904， P<0.05)、穿膜细胞数[(55.64±4.28)个比(124.56±11.35)个，(119.75±8.86)个， t对照＝17.043， tsiNC＝19.543， P<0.05)]明显低于对照组、siNC组，而细胞凋亡率[(19.92±3.25)%比(6.85±1.12)%，(6.62±1.06)%， t对照＝11.406； tsiNC＝11.672， P<0.05]均明显高于对照组、siNC组，差异均有统计学意义。双荧光素酶报告基因实验证实miR-6516-5p可与HAGLR靶向结合降低细胞的荧光素酶活性(0.32±0.02比1.00±0.06， t＝32.255， P<0.05)，差异有统计学意义。siHAGLR+ anti-miR-6516-5p组细胞吸光度值(0.87±0.06比0.65±0.05， t＝8.450， P<0.05)、穿膜细胞数[(93.73±6.18)个比(54.05±3.83)个， t＝16.373， P<0.05]显著高于siHAGLR+anti-miR-NC组，细胞凋亡率[(9.32±1.15)%比(19.85±2.28)%， t＝0.575， P<0.05]显著低于siHAGLR+anti-miR-NC组，差异均有统计学意义。 结论:HAGLR低表达可通过靶向调控miR-6516-5p抑制前列腺癌DU145细胞增殖和侵袭并促进其凋亡。

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)HAGLR通过靶基因微小RNA(miR)-93-5p调控胃癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法:采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胃癌细胞株(HS-746T、BGC823、SGC7901、MGC803)和正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)中HAGLR的表达水平。选择HAGLR表达最低的细胞株分别转染阴性对照质粒(阴性对照组)和HAGLR高表达质粒(HAGLR组)。分别采用MTS法和划痕愈合实验检测转染后细胞的增殖情况和迁移能力。生物信息学软件miRcode数据库预测HAGLR的靶基因，双荧光素酶报告基因实验验证HAGLR与靶基因的结合。qRT-PCR检测HAGLR靶基因的表达。Western blot检测Hippo信号通路的表达。采用SPSS 21.0软件进行统计分析，组间比较应用 t检验，多组间比较应用单因素方差分析。 结果:与GES-1细胞相比，胃癌细胞株HAGLR的表达水平均降低(均 P<0.05)，HAGLR表达最低的细胞株是SGC7901细胞( P<0.01)。HAGLR组和阴性对照组SGC7901细胞中HAGLR表达分别为1.03±0.13和9.75±1.10，阴性对照组HAGLR的表达水平明显低于HAGLR组( t＝7.87， P<0.01)。与阴性对照组比较，HAGLR组SGC7901细胞的吸光度值明显降低( P<0.05)，划痕愈合率明显减少( P<0.01)。miRcode数据库显示HAGLR与miR-93-5p存在互补结合位点。双荧光素酶报告基因实验显示HAGLR可互补结合miR-93-5p( P<0.01)。与阴性对照组比较，HAGLR组SGC7901细胞中miR-93-5p表达明显降低( P<0.01)，Hippo信号通路蛋白表达明显降低(均 P<0.01)。 结论:HAGLR在胃癌细胞株中呈低表达，HAGLR通过靶向负调控miR-93-5p抑制胃癌SGC7901细胞的增殖和迁移能力。

目的:探究长链非编码RNA（lncRNA）HAGLR在乳腺癌中的表达情况及其对乳腺癌预后的影响，并构建竞争性内源RNA（ceRNA）网络。方法:采用Atlas of Genetics and Cytogenetics in Oncology and Haematology网站检索HAGLR基因染色体定位及转录本表达情况。采用lnclocater网站预测HAGLR亚细胞定位。通过lnCAR数据库分析HAGLR在乳腺癌组织和癌旁组织的差异表达情况，按HAGLR表达水平，将lnCAR数据库患者分为HAGLR高表达组和HAGLR低表达组，采用Kaplan-Meier法分析两组间总生存（OS）及无转移生存情况，并通过UCSC Xena数据库进行验证。通过lnCAR数据库检索HAGLR共表达基因，将排位前200个共表达基因提交至Metascape网站，进行基因本体（GO）、京都基因和基因组百科全书（KEGG）功能富集分析，构建蛋白互作网络（PPI）。采用生物信息学在线分析网站starbase预测HAGLR靶向的微RNA（miRNA）和可直接编码蛋白的mRNA，通过Cytoscape3.8软件构建HAGLR的ceRNA网络。结果:HAGLR基因定位于2q31.1，主要分布于细胞质；HAGLR在乳腺癌组织中的表达水平高于癌旁组织，差异有统计学意义（ P<0.001）。对lnCAR数据库和UCSC Xena数据库分析均显示，HAGLR高表达组OS较低表达组均差（均 P<0.01）；lnCAR数据库中HAGLR高表达组无转移生存较低表达组差（ P＝0.030）。前200个HAGLR共表达基因中与HAGLR负相关基因129个，与HAGLR正相关基因71个。KEGG通路分析显示，HAGLR与代谢通路、MAPK信号通路、JAK-STAT信号通路及癌症通路有关；GO注释分析显示，HAGLR主要富集在细胞周期、着丝粒复合体组装、有丝分裂进程、蛋白激酶结合、激酶活性的调节、细胞对DNA损伤刺激的反应等多种功能中。hsa-miR-130b-3p、hsa-miR-1245b-5p、hsa-miR-182b-5p、hsa-miR-512-3p、hsa-miR-302b-3p、hsa-miR-185b-5p、hsa-miR-106b-5p为HAGLR靶向miRNA。 结论:HAGLR在乳腺癌组织中高表达，其可能是乳腺癌预后预测的生物标志物。

目的:通过筛选与胃癌铁死亡相关的长链非编码RNA(LncRNA),构建预后风险模型,协助评估胃癌患者预后.方法:在癌症基因数据库(The Cancer Genome Atlas TCGA)下载胃癌的转录组和临床数据,从NCBI网站获得103 个铁死亡相关基因.采用R软件进行Kaplan-Meier(KM)生存分析和单因素COX回归分析筛选出关键的LncRNA,将临床样本按7∶3 的比例随机分为训练集和验证集,利用多因素COX回归分析建立胃癌铁死亡相关LncRNA的预后模型.两组分别进行生存分析、风险曲线分析、单因素和多因素独立预后分析、多指标受试者操作特征(ROC)曲线的绘制及列线图分析,最后对训练集进行GSEA的 KEGG 分析.结果:单因素 Cox 回归分析得到 13 个 LncRNA(LINC00106、TNFRSF10A-AS1、AC244153.1、AC005586.1、AP001318.2、MAGI2-AS3、AP001528.2、MSC-AS1、PVT1、AC037198.1、AC010719.1、HAGLR),经多因素回归分析筛选出5 个胃癌铁死亡相关的LncRNA(AC005586.1、AP001318.2、AP001528.2、AC010719.1、HAGLR),训练集和验证集构建的预后模型趋势一致,且ROC评估风险模型的预测能力大于其他临床指标.构建的 5 个LncRNA列线图,预测 1 年、2 年、3年校准曲线也基本和 45 °的对角线重合,模型预测性能良好.结论:LncRNA AC005586.1、AP001318.2、AP001528.2、AC010719.1、HAGLR胃癌铁死亡相关LncRNA可有效预测胃癌患者的预后.

目的 研究长链非编码RNA同源盒D基因簇反义生长相关长链非编码RNA(lncRNA HAGLR)通过调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族pyrin结构域蛋白3(NLRP3)炎症小体对卵巢癌细胞生长和上皮-间充质转化(EMT)的调控作用.方法 培养卵巢正常细胞IOSE-80(IOSE-80组)以及卵巢癌细胞A2780(A2780组).然后将A2780随机分为lncRNA HAGLR沉默组(siHAGLR组)、沉默阴性对照组(siNC组)、siHAGLR联合NLRP3抑制剂MCC950处理组(siHAGLR+MCC950组).qRT-PCR法检测lncRNA HAGLR的表达.Western blot检测NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、caspase-1、ASC和EMT相关蛋白Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1的表达.CCK-8法检测A2780细胞的增殖活性.Transwell法检测A2780细胞的迁移和侵袭能力.细胞克隆形成实验检测A2780细胞的生长能力.TUNEL染色检测A2780细胞的凋亡.结果 与IOSE-80组相比,A2780组lncRNA HAGLR、Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1表达均上调(P<0.05),但NLRP3、caspase-1、ASC的表达均下调(P<0.05).与siNC组相比,siHAGLR组的lncRNA HAGLR、Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1表达均下调(P<0.05),但NLRP3、caspase-1、ASC的表达均上调(P<0.05),细胞增殖率、细胞克隆数以及迁移和侵袭数均明显减少(P<0.05),细胞凋亡数则增加(P<0.05).与siHAGLR组相比,siHAGLR+MCC950 组的lncRNA HAGLR表达无明显变化(P>0.05),而Vimentin、Snail1、α-SMA、Twist1表达均上调(P<0.05),但NLRP3、caspase-1、ASC的表达均下调(P<0.05),细胞增殖率、细胞克隆数以及迁移和侵袭数均显著增加(P<0.05),细胞凋亡数则减少(P<0.05).结论 lncRNA HAGLR通过抑制NLRP3炎症小体促进卵巢癌细胞的生长和EMT.

目的 研究骨质疏松(OP)-胫骨骨折(TF)大鼠长链非编码RNA同源盒D基因簇反义生长相关长链非编码RNA(lncRNA HAGLR)与其下游靶基因的表达情况,并探讨lncRNA HAGLR对大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)成骨分化的作用与机制.方法 30只SD雌性大鼠随机分为sham组、OP组、OP-TF组,每组10只.ELISA法检测大鼠血清碱性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的水平.对大鼠MSC细胞系R7500 使用成骨分化诱导培养基进行诱导,并分为MSC组和成骨诱导组(Osteogenic-MSC组).分别转染pcDNA-HAGLR、pcDNA-NC、miR-19a-3p的模拟物(miR-19a-3p mimic)、mimic的阴性对照(NC mimic)、miR-19a-3p的抑制剂(miR-19a-3p inhibitor)、miR-19a-3p inhibitor的阴性对照(NC inhibitor)至R7500后进行相应分组.双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA HAGLR和miR-19a-3p以及骨形态发生蛋白2(BMP2)和miR-19a-3p的靶向关系.qRT-PCR检测各组lncRNA HAGLR和miR-19a-3p的表达.Western blot检测BMP2、ALP、胶原蛋白Ⅰ(COL-Ⅰ)、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的表达.ALP染色和AR染色检测MSC的成骨分化能力.结果 OP组和OP-TF组的血清ALP和TRAP水平均高于sham组,差异有统计学意义(P<0.05).而OP组与sham组胫骨组织中lncRNA HAGLR、miR-19a-3p、BMP2 的表达水平比较差异均无统计学意义(P>0.05),而OP-TF组胫骨组织中lncRNA HAGLR、BMP2的表达水平均明显低于sham组和OP组(P<0.05),OP-TF组胫骨组织中miR-19a-3p的表达水平高于sham组和OP组(P<0.05).与MSC组相比,Osteogenic-MSC组的lncRNA HAGLR表达水平明显升高(P<0.05),而miR-19a-3p的表达降低(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验表明lncRNA HAGLR与miR-19a-3p具有靶向关系,miR-19a-3p与BMP2具有靶向关系.pcDNA-HAGLR组的miR-19a-3p的表达水平低于pcDNA-NC组(P<0.05).miR-19a-3p mimic组与NC mimic组的lncRNA HAGLR的表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05).与NC mimic组相比,miR-19a-3p mimic组BMP2的表达水平降低(P<0.05),miR-19a-3p表达水平升高(P<0.05).pcDNA-HAGLR组细胞较pcDNA-NC组具有更强的成骨分化能力和更高的ALP活性(P<0.05).miR-19a-3p inhibitor组细胞较NC inhibitor组具有更强的成骨分化能力和更高的ALP活性(P<0.05).结论 胫骨骨折大鼠lncRNA HAGLR和BMP2表达降低,miR-19a-3p表达增高.过表达lncRNA HAGLR通过靶向调控miR-19a-3p/BMP2轴促进大鼠MSC的成骨分化.

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)HOXD反义生长相关长链非编码RNA(HOXD antisense growth-associated long non-coding RNA,lncHAGLR)对大鼠膝关节退行性软骨细胞C518 细胞的炎症反应和凋亡的作用与潜在机制.方法 采用StarBase和荧光素酶报告基因法预测和确认ln-cHAGLR和微小RNA(microRNA,miR)-26a之间的相互作用.为研究lncHAGLR对miR-26a表达的调控作用,将C518 细胞分为沉默lncHAGLR的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)载体质粒(si-ln-cHAGLR)组、siRNA的阴性对照(negative control of siRNA,si-NC)组、miR-26a抑制剂阴性对照(nega-tive control of miR-26a inhibitor,inhibitor-NC)组、miR-26a的抑制剂(miR-26a-inhibitor)组.此外,为研究lncHAGLR是否通过调控miR-26a对C518 细胞的炎症和凋亡具有调控作用,将C518 细胞分为5 组:Control组、白细胞介素(interleukin,IL)-1β 组、IL-1β + si-NC 组、IL-1β + si-lncHAGLR 组和 IL-1β + si-lncHA-GLR +miR-26a-inhibitor组.采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)分析 lncHAGLR和miR-26a的水平.采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)、乳酸脱氢酶(lactate dehydro-genase,LDH)和流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测C518 细胞的增殖、细胞毒性和凋亡情况.蛋白质印迹检测切割模式的半胱天冬酶3(CLEAVED-CASPASE3)、核因子κB P65(nuclear factor-κB P65,NF-κB P65)、磷酸化的NF-κB P65(phosphorylated NF-κB P65,P-NF-κB P65)的表达.ELISA法检测白细胞介素(interleukin,IL)-6 和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的释放.结果 lncHAGLR直接靶向miR-26a.在IL-1β组,lncHAGLR 水平明显较 Control 组增高,miR-26a 水平较 Control 组降低(P均<0.05).此外,IL-1β +si-lncHAGLR组减轻了IL-1β诱导的C518 细胞的炎症并抑制了凋亡,而且细胞的活力增加,LDH释放减少,CLEAVED-CASPASE3 的表达被抑制,TNF-α和IL-6 的分泌减少,且p-NF-κB P65表达减少(P均<0.05).IL-1β+ si-lncHAGLR + miR-26a-inhibitor组逆转了 IL-1β + si-lncHAGLR 组的结果(P均<0.05).结论 lncHAGLR通过抑制miR-26a激活NF-κB促进C518 细胞的炎症反应和细胞凋亡,表明lncHAGLR可能是治疗骨关节炎的一个有价值的靶点.

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)HAGLR互补链LncRNA(HAGLROS)调控微小RNA((miRNA,miR)-26b/非受体型酪氨酸蛋白激酶(janus kinase 2,JAK2)/信号传导和转录激活因子 3(signal trans-ducer and activator of transcription3,STAT3)通路对肝癌细胞上皮间质转化的影响.方法 获取正常肝细胞系及肝癌细胞系,依据转染情况分组,即si-NC组、si-HAGLROS组、miR-26 inhibitor组、si-HAGLROS + miR-26 inhibitor组.MTT实验检测各组细胞增殖活性,细胞划痕实验检测各组细胞迁移情况,细胞侵袭实验检测各组细胞侵袭能力,qPCR法检测HA-GLROS、miR-26b、上皮钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)、N-钙黏素(N-cadherin)、纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)、抗凋亡蛋白(Bcl-2)表达,双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA-HAGLROS与miR-26b的靶向关系.结果 肝癌细胞系Hep3B、MHCC-LM3、Huh7、SMMC-7721 中HAGLROS表达均显著高于LO2 细胞(P<0.05),miR-26b表达与之相反.生物信息学软件显示,HAGLROS可与miR-26b靶向结合.肝癌细胞功能实验显示,与si-NC组比较,si-HAGLROS组细胞增殖活性、细胞划痕愈合率、细胞穿膜数目、N-cadherin、FN、Bcl-2、p-JAK2、p-STAT3 表达均更低,E-Cadherin表达更高;而miR-26b inhibitor组细胞增殖活性、细胞划痕愈合率、细胞穿膜数目、N-cadherin、FN、Bcl-2、p-JAK2、p-STAT3 表达均更高,E-Cadher-in表达更低;si-NC组与si-HAGLROS +miR-26b inhibitor组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 LncRNA-HA-GLROS可通过靶向下调miR-26b促进肝癌细胞生物行为,如迁移、侵袭及EMT过程,同时可调控JAK2/STAT3 通路活性,LncRNA-HAGLROS可作为肝癌治疗靶点.

目的:基于铜死亡相关的LncRNAs(cuproptosis-related LncRNAs,CRLs)建立胃癌(gastric cancer,GC)预后模型,预测调控铜死亡相关基因(cuproptosis-related genes,CRGs)的中药.方法:从癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库获取 443例GC的临床资料及RNA-seq,通过Pearson分析、Cox回归、最小绝对收缩和选择算子(least absolute shrinkage and selection operator,LASSO)回归等方法筛选CRLs构建预测GC预后的风险模型,结合风险评分和临床特征构建列线图.通过受试者工作特征曲线、Kaplan-Meier曲线和C-指数验证模型的准确性.评估风险评分与免疫浸润、免疫检查点基因表达和化疗/靶向药的相关性.应用Coremine Medical数据库预测调控CRGs的潜在中药.结果:基于 7个CRLs(AP001107.9、VCAN-AS1、AC016394.2、LINC02675、AC100814.1、HAGLR和LINC01094)的风险评分构建GC风险模型.风险模型预测GC患者1、3、5年生存率的AUC分别为0.720、0.682、0.711,其预后价值优于年龄、Grade分级、TNM分期.结合年龄、TNM分期的风险模型预测GC患者 1 年生存率的AUC为0.793.风险评分与肿瘤浸润淋巴细胞、调节性T细胞等免疫细胞富集程度及LAG3、ICOS、CD28、NRP1等22个免疫检查点基因表达和13种化疗/靶向药的敏感性具有相关性.对CRGs具有潜在调节作用的中药有58种,其功效以清热解毒、活血止痛为主,主归肝、脾、肺经,螺旋藻和蛇床子对铜死亡机制的关键基因FDX1具有潜在调控作用.结论:基于7个CRLs构建的风险模型可评估GC的预后、免疫,螺旋藻及蛇床子可能对铜死亡机制具有重要的调控效能.

基于生物信息学分析构建预后相关的预测模型,探讨铜死亡相关LncRNA与胃癌(GC)在免疫和预后方面的关系.从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载胃癌患者的RNA测序和临床数据,基于共表达分析筛选出铜死亡相关LncRNA,通过LASSO回归和多因素Cox回归分析构建出与胃癌预后密切相关的铜死亡相关LncRNA风险预测模型,并计算所有胃癌患者样本的风险评分.通过Kaplan-Meier生存分析、回归分析和受试者工作特征(ROC)曲线等证实模型的预后预测性能,并分析风险评分与通路富集分析、免疫浸润细胞、免疫检查点基因、体细胞基因突变及抗癌药物敏感性的相关性.差异表达分析结果表明,LncRNA HAGLR在肿瘤组织中的表达上调.通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LncRNA HAGLR在69例行根治性手术胃癌患者的癌组织及癌旁组织的表达.结果表明,相比于癌旁组织,胃癌组织中HAGLR表达上调,且与肿瘤大小、浸润深度、肿瘤TNM分期、分化程度及淋巴结转移成明显相关性(P＜0.05).本研究构建的铜死亡相关LncRNA预后模型具有较高的预测价值,并且与免疫细胞浸润异质性明显相关,在预测患者免疫治疗效果及指导化疗药物选择方面具有一定的临床价值.