目的:探讨血清血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)及外周血微RNA-126(microRNA-126, miR-126)与脑微出血(cerebral microbleeds, CMBs)数量和分布的关系。方法:连续纳入2019年6月至2020年6月期间包头医学院第一附属医院神经内科收治的非急性缺血性脑血管病患者。收集患者临床资料，并进行3.0 T MRI检查，应用磁敏感加权成像检测CMBs。采用酶联免疫吸附法检测血清VEGF浓度，采用荧光定量聚合酶链反应对miR-126进行定量检测。应用多变量 logistic回归分析确定CMBs的独立影响因素，应用多元线性回归分析确定血清VEGF浓度和外周血miR-126与CBMs数量的相关性。应用受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线评价血清VEGF浓度和外周血miR-126相对表达量对CMBs的预测价值。 结果:共纳入193例非急性缺血性脑血管病患者，非CMBs组110例(57.0%)，单纯脑叶CMBs组20例(10.4%)，非单纯脑叶CMBs组63例(32.6%)。3组间比较显示，年龄可能是单纯脑叶CMBs的危险因素，VEGF较高、胱抑素C水平较高、外周血miR-126相对表达量较低、高血压以及既往卒中或短暂性脑缺血发作史可能是非单纯脑叶CMBs的危险因素。多变量 logistic回归分析显示，血清VEGF浓度较高是非单纯脑叶CMBs的独立危险因素(优势比1.186，95%置信区间1.035～1.358； P＝0.014)，而miR-126相对表达量较高是非单纯脑叶CMBs的独立保护因素(优势比0.154，95%置信区间0～0.269； P＝0.026)。多元线性回归分析显示，血清VEGF浓度较高( r＝0.848， P<0.001)和miR-126相对表达量较低( r＝-0.043， P＝0.035)可显著增加CMBs数量。ROC曲线分析显示，血清VEGF预测非单纯CMBs的曲线下面积为0.803(95%置信区间0.741～0.865)，最佳截断值为120.55 ng/L，敏感性为70.7%，特异性为75.5%。 结论:在非急性缺血性脑血管病患者中，血清VEGF和外周血miR-126相对表达量与CMBs数量及其分布存在显著相关性，血清VEGF可作为预测非单纯脑叶CMBs存在的生物标志物。

目的:探讨动脉瘤性蛛网膜下腔出血（aSAH）患者高压氧治疗后血清miR-193b-3p水平的变化及其意义。方法:选择2019年1月至2020年9月商丘市第一人民医院急诊科收治的176例aSAH患者作为研究对象，根据治疗90 d后患者的改良Rankin量表评分（mRS）将其分为预后良好组（ n=128）和预后不良组（ n=48）。采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-193b-3p相对表达水平；用Logistic回归分析aSAH患者预后的风险因素；用受试者工作特征（ROC）曲线评价miR-193b-3p诊断aSAH患者预后的价值；用限制性立方样条拟合Logistic回归分析miR-193b-3p与aSAH患者预后的量效关系。 结果:预后良好组患者治疗前后血清miR-193b-3p的相对表达水平均高于同期预后不良组（ P<0.05），治疗后2组患者血清miR-193b-3p的相对表达水平均明显降低（ P<0.05）。治疗后miR-193b-3p诊断aSAH预后的ROC曲线下面积（AUC）、灵敏度和特异度分别为0.818、68.75%和85.94%。Hunt-Hess Ⅲ~Ⅳ级、脑血管痉挛、高格拉斯哥昏迷评分（GCS）和高C反应蛋白（CRP）水平是aSAH预后的独立危险因素（ P<0.05），治疗后miR-193b-3p相对表达水平高是aSAH预后的独立保护因素（ P<0.05）。治疗后miR-193b-3p与aSAH预后呈非线性关系（ P<0.05）。 结论:aSAH患者高压氧治疗后血清miR-193b-3p相对表达水平明显降低，与aSAH预后不良有关。

目的:研究X射线辐射诱导非小细胞肺癌（NSCLC) A549细胞凋亡的适应性反应，并筛选适应性反应相关的微RNA (miRNA）。方法:将NSCLC A549细胞分为6组，包括50 mGy+20 Gy、200 mGy+20 Gy、20 Gy、50 mGy、200 mGy照射组及对照组（0 Gy），前2组细胞分别用50、200 mGy初始剂量进行照射，培养6 h后用20 Gy的效应剂量进行照射，20 Gy、50 mGy、200 mGy照射组同时进行照射。培养24 h后使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。利用小RNA测序技术筛选差异表达miRNA，并对其靶基因进行基因本体（GO）及京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路的功能富集分析。采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR）对部分差异表达miRNA进行验证。2组间数据的比较采用Welch t检验。 结果:50 mGy+20 Gy照射组和200 mGy+20 Gy照射组的A549细胞早期凋亡率分别为（1.81±0.11）%和（2.17±0.19）%，低于20 Gy照射组的（4.54±0.23）%，且差异均有统计学意义（ t=10.680、8.006，均 P<0.01）。与20 Gy照射组相比，50 mGy+20 Gy照射组和200 mGy+20 Gy照射组共同差异表达趋势miRNA有1个上调（miR-3662）、15个下调（miR-185-3p、miR-1908-5p、miR-1307-5p、miR-182-3p、miR-92a-3p、miR-582-5p、miR-501-3p、miR-138-5P、miR-1260b、miR-484、miR-378d、miR- 193b-3P、miR-127-3p、miR-1303及miR-654-5p）。GO富集分析结果显示，差异表达miRNA调控靶基因功能显著富集于细胞通讯调节、代谢过程的正向调节、代谢信号的调节、酶结合及催化活性等过程。KEGG富集分析结果显示，靶基因相关信号通路显著富集于溶酶体、丝裂原活化蛋白激酶、Ras和内吞作用等信号通路。qRT-PCR检测结果显示，miRNA表达情况与基因芯片结果趋势一致（10个miRNA表达水平得到验证）。 结论:X射线50、200 mGy照射剂量均能诱导NSCLC A549细胞凋亡的适应性反应，并筛选到一组共同差异表达的miRNA，可能在X射线辐射诱导细胞凋亡的适应性反应中发挥了重要作用，有可能成为调节电离辐射生物效应的潜在靶点。

目的:初步探讨miRNA（miR）-193b-5p对黑素合成的影响及可能机制。方法:从健康男性包皮环切术后废弃的正常包皮组织中分离培养人原代黑素细胞。分别转染miR-NC模拟物（miR-NC mimics组）和miR-193b-5p模拟物（miR-193b-5p mimics组）至人原代黑素细胞及人黑素瘤MNT1细胞，转染48 h时实时定量PCR（RT-qPCR）检测miR-193b-5p的过表达效率，转染72 h时Western印迹检测黑素合成相关蛋白酪氨酸酶和小眼畸形相关转录因子的表达，转染1周时采用氢氧化钠法测定细胞中黑素含量。通过TargetScan网站预测miR-193b-5p的靶基因并采用双荧光素酶报告实验验证，RT-qPCR及Western印迹检测miR-193b-5p过表达后该靶基因mRNA和蛋白表达水平的变化。两组间比较采用两独立样本 t检验。 结果:人原代黑素细胞及人黑素瘤MNT1细胞中，miR-193b-5p mimics组miR-193b-5p的表达水平均显著高于miR-NC mimics组， t值分别为65.57、22.49，均 P < 0.001，且miR-193b-5p mimics组黑素含量（0.091 ± 0.007、0.130 ± 0.004）显著低于miR-NC mimics组（0.117 ± 0.002、0.188 ± 0.032）， t值分别为5.98、3.24， P值分别< 0.01、< 0.05。Western印迹检测显示，人原代黑素细胞及人黑素瘤MNT1细胞中，miR-193b-5p mimics组黑素合成相关蛋白酪氨酸酶及小眼畸形相关转录因子的表达均显著低于miR-NC mimics组（均 P < 0.05）。通过TargetScan预测及双荧光素酶报告实验验证，转录调节因子CITED2的3′非翻译区存在miR-193b-5p的结合位点。人原代黑素细胞及人黑素瘤MNT1中上调miR-193b-5p表达后，CITED2 mRNA及蛋白的表达水平均显著低于miR-NC mimics组（均 P<0.05）。 结论:miR-193b-5p过表达可下调黑素合成相关蛋白酪氨酸酶及小眼畸形相关转录因子的表达，抑制黑素合成，该过程与靶向抑制CITED2的表达有关。

目的:观察微小RNA(miRNA，miR)-193a-5p靶向调控Ras相关结构域家族蛋白2(RASSF2)表达抑制炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素(IL)-1β水平及其对心力衰竭模型大鼠心脏功能的影响。方法:取60只12～16周龄的清洁级Wistar大鼠(30只雄鼠，30只雌鼠)。2.5%戊巴比妥钠(35mg/kg)麻醉大鼠，暴露大鼠心脏后，随机选择15只大鼠进行缝合(对照组)，15只注射磷酸盐缓冲液(PBS)为PBS组，15只注射空白AAV质粒载体为AAV组，15只注射AAV-miR-193a-5p为miR-193a-5p组。PBS组、AAV组和miR-193a-5p组的大鼠冠状动脉左前降支行冠状动脉结扎构建心力衰竭模型。术后4周，彩色多普勒超声心动图检测舒张期和收缩期左心室后壁厚度(LVPWT)、室间隔厚度(IVST)、左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室收缩末期内径(LVESd)和左心室射血分数(LVEF)。应用双荧光素酶报告基因实验探索miR-193a-5p是否与RASSF2的3’非翻译区相互作用。结果:术后4周，与对照组比较(4.79±0.33)，PBS组(1.57±0.16)和AAV组(1.66±0.18) miR-193a-5p表达降低，而miR-193a-5p组(9.02±0.76) miR-193a-5p表达增高( P<0.05)。与对照组[IVST：(1.88±0.15) mm；LVPWT：(1.93±0.22) mm；LVEDd：(5.44±0.79) mm；LVEF：(52.72±4.98)%]和miR-193a-5p组[IVST：(1.97±0.16) mm；LVPWT：(2.09±0.21) mm；LVEDd：(5.98±0.81) mm；LVEF：(48.83±4.17)%]比较，PBS组[IVST：(2.69±0.28) mm；LVPWT：(2.74±0.36) mm；LVEDd：(6.87±0.84) mm；LVEF：(37.45±3.55)%]和AAV组[IVST：(2.63±0.25) mm；LVPWT：(2.68±0.34) mm；LVEDd：(6.93±0.90) mm；LVEF：(36.10±3.42)%]左心室IVST、LVPWT和LVEDd显著增高，LVEF显著降低( P<0.05)，对照组与miR-193a-5p组间差异无统计学意义( P>0.05)。与对照组[TNF-α：(2.01±0.18) μg/L；IL-1β：(8.76±1.48) ng/L；RASSF2：(1.23±0.21)]和miR-193a-5p组[TNF-α：(2.23±0.21) μg/L；IL-1β：(8.90±1.54) ng/L；RASSF2：(1.30±0.25)]比较，PBS组[TNF-α：(5.67±0.52) μg/L；IL-1β：(11.34±2.55) ng/L；RASSF2：(7.44±0.89)]和AAV组[TNF-α：(5.88±0.58) μg/L；IL-1β：(10.99±2.49) ng/L；RASSF2：(7.89±0.97)]血清TNF-α、IL-1β和RASSF2显著增高( P<0.05)，而对照组与miR-193a-5p组间差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:通过上调心力衰竭模型大鼠miR-193a-5p表达可抑制RASSF2蛋白表达，并显著抑制炎性因子TNF-α与IL-1β水平，进而提高心力衰竭模型大鼠心脏功能。

Systemic sclerosis (SSc) is characterized by immune dysfunction, vasculopathy, chronic fibrosis of skin and internal organs with complex etiology. With the rapid development and the application in biomedicine of epigenetics, accumulating evidence has shown that epigenetics plays an important role in the pathogenesis of SSc. Environmental factors via epigenetics are needed to trigger and maintain for the disease in the subjects with genetic predisposition to SSc. The role of epigenetics in the pathogenesis of SSc includes hypermethylation of the promoter region of nitric oxide synthase and bone morphogenetic protein receptors II, up-regulation of histone deacetylases 4 and 5 expression, and down-regulation of miR-193b and miR-152 in endothelial cells inducing vascular dysfunction; DNA hypermethylation and hypoacetylation of histone H3 and H4 in Friend leukemia virus integration 1 and Kruppel-like factor 5 genes, and the abnormal expression of miR-29, miR-129-5p and miR-135b in fibroblasts causing excessive fibrosis; DNA hypomethylation in the promoter regions of CD11a and CD70 genes in CD4+T cells resulting in immune dysfunction. Studies on the role of epigenetics in SSc are of great significance for better understanding the pathogenic machanism of SSc, which is helpful to find new molecular targets for treating SSc, and consequently, improve the prognosis of SSc.

目的 探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)与大鼠小胶质(RM)细胞活化的关系.方法 体外培养RM细胞,并随机分为正常组和氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)组,RT-qPCR检测各组细胞内circHIPK3表达水平.构建具有嘌呤霉素抗性的circHIPK3慢病毒载体,设置过表达(OE)组和阴性对照(NC)组,根据荧光表达强度选择RM细胞最佳感染复数(MOI),采用嘌呤霉素筛选稳定表达circHIPK3的RM细胞.将OE组和NC组细胞置于OGD/R条件下培养,Western blot检测各组细胞中小胶质细胞活化标志蛋白钙结合衔接分子1(Iba-1)、肿瘤坏死因子受体超家族成员5(CD40)表达水平.通过circRNAdb数据库分析circHIPK3翻译蛋白潜能,利用circBank和Starbase数据库预测circHIPK3潜在结合的微小RNA(miRNA).结果 与正常组相比,OGD/R组RM细胞中circHIPK3的表达水平显著下调(P<0.0001).测序比对结果正确,成功构建cir-cHIPK3过表达慢病毒载体.感染RM细胞最佳MOI=80,以2μg/ml嘌呤霉素筛选得到稳定过表达circHIPK3的RM细胞.RT-qPCR结果显示,OE组细胞中circHIPK3表达水平较NC组显著增高(P<0.01).Western blot结果显示,在OGD/R培养条件下,OE组细胞中Iba-1和CD40蛋白表达水平较NC组显著降低(P<0.05).蛋白翻译分析显示,cir-cHIPK3具有2个内部核糖体进入位点(IRES)和1个开放阅读框(ORF),可编码由404个氨基酸组成的多肽.miRNA结合分析显示,circHIPK3可能与8个靶向miRNAs结合:hsa-miR-3529-5p、hsa-miR-379-5p、hsa-miR-506-3p、hsa-miR-33、hsa-miR-450b-5p、hsa-miR-551b-3p、hsa-miR-193、hsa-miR-508-3p.结论 过表达circHIPK3显著抑制OGD/R诱导的RM细胞活化、circHIPK3有编码多肽潜能,可能通过海绵miRNA发挥功能.

目的:探究甲状腺癌组织中C-kit、miR-193b-3p的表达及临床意义.方法:收集2020年1-7月首都医科大学附属北京积水潭医院甲状腺癌患者术中切除的甲状腺癌组织、癌旁组织标本103例.采用免疫组织化学法(IHC)检测C-kit蛋白表达,采用qRT-PCR法检测miR-193b-3p的相对表达水平;采用Spearman分析C-kit与miR-193b-3p在癌组织中表达相关性;采用Kaplan-Meier法分析C-kit和miR-193b-3p表达与患者预后之间的关系;采用多因素Cox分析影响患者预后的因素.结果:与癌旁组织相比,甲状腺癌组织中的miR-193b-3p的相对表达量及C-kit阳性表达率显著降低(P＜0.05);且TNM分期、淋巴结转移以及分化程度不同的甲状腺癌患者的miR-193b-3p、C-kit表达差异均具有统计学意义(P＜0.05);在癌组织中C-kit和miR-193b-3p表达呈正相关(P＜0.05);甲状腺癌组织中miR-193b-3p高表达患者3年生存率(90.57％)高于低表达患者(70.00％);C-kit阳性表达患者3年生存率(93.1％)高于阴性表达患者(75.68％);且C-kit、miR-193b-3p为影响甲状腺癌患者预后不良的保护因素(P＜0.05).结论:在甲状腺癌组织中,C-kit、miR-193b-3p表达降低,对甲状腺癌患者的预后具有敏感性,可作为诊断标志物应用.

目的 探讨麦芽酚铝暴露对miR-193a-3p、去甲基化酶AlkB同源蛋白5(ALKBH5)、第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)和蛋白激酶B(AKT)的影响,以及miR-193a-3p是否通过调控ALKBH5/PTEN/AKT信号通路参与铝致认知障碍的机制.方法 将无特定病原体级健康雄性SD大鼠随机分为对照组和低、中、高剂量组,每组8只.3个剂量组大鼠分别予浓度为10.00、20.00和40.00μmol/kg体质量的麦芽酚铝溶液腹腔注射染毒,对照组大鼠予等体积0.9％氯化钠溶液;每周连续染毒5 d,持续3个月.染毒结束后,以新物体识别实验检测大鼠学习记忆能力,以实时荧光定量聚合酶链反应法检测大鼠海马组织中miR-193a-3p和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的mRNA相对表达水平,以蛋白质印迹法检测大鼠海马组织中ALKBH5、PTEN和AKT2蛋白的表达.结果 高剂量组大鼠辨别指数和偏好指数分别低于对照组和低剂量组(P值均＜0.05).高剂量组大鼠海马组织中miR-193a-3p和Bcl-2 mRNA相对表达水平分别低于对照组和低剂量组(P值均＜0.05),Bax mRNA相对表达水平分别高于对照组和低剂量组(P值均＜0.05),Caspase-3 mRNA相对表达水平分别高于其他3组(P值均＜0.05).高剂量组大鼠海马组织中ALKBH5蛋白相对表达水平低于对照组(P＜0.05),PTEN蛋白相对表达水高于对照组和低剂量组(P值均＜0.05),AKT2蛋白相对表达水平低于对照组和低剂量组(P值均＜0.05).结论 亚慢性铝暴露可抑制大鼠海马组织中miR-193a-3p的表达,从而破坏ALKBH5/PTEN/AKT通路,影响正常的神经元稳态和细胞功能;此机制可能在铝诱导的认知障碍过程中发挥重要作用.

目的 探讨miR-193a-3p、miR-146b-5p在早期宫颈癌(ECC)血清中的表达量及其对术后复发的预测价值.方法 选取汉中市人民医院门诊收治的ECC患者(研究组)82例,另选取同期本院体检的健康女性(对照组)74例,比较2组血清miR-193a-3p、miR-146b-5p的表达量.根据是否复发将研究组分为复发亚组(n=23)和未复发亚组(n=59),单因素分析比较2亚组的临床资料和实验室指标;Logistic多因素回归分析影响术后复发的因素;ROC分析血清miR-193a-3p、miR-146b-5p表达量预测术后复发的价值.结果 研究组血清miR-193a-3p、miR-146b-5p表达量均低于对照组(P＜0.05).复发亚组高危型HPV阳性率、FIGO分期、宫颈浸润深度、淋巴结转移及鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)水平均高于未复发亚组(P＜0.05),而血清miR-193a-3p和miR-146b-5p的表达量均低于未复发亚组(P＜0.05);血清miR-193a-3p和miR-146b-5p的低表达、高危型HPV阳性、SCC-Ag均是影响术后复发的独立危险因素(P＜0.05);血清miR-193a-3p、miR-146b-5p表达量预测术后复发的最佳截断值分别为0.57和2.12,二者联合预测的灵敏度、特异度和AUC分别为82.61％,96.61％和0.932.结论 血清miR-193a-3p、miR-146b-5p的表达在ECC患者呈低表达;二者均可作为预测ECC术后复发的敏感指标,且联合预测价值更高.