目的 研究复方芩柏汤对细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)/c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路的调控作用,以及对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠血清中炎症因子的影响.方法 将60 只SPF级健康雄性BALB/C小鼠利用 3%葡聚糖硫酸(dextran sulfate sodium,DSS)建立UC模型,造模成功后随机分为模型组(以生理盐水灌肠)、美沙拉嗪组(以 0.196 g/kg美沙拉嗪药液灌肠)、复方芩柏汤组(以 1.092 g/kg复方芩柏颗粒剂药液灌肠),每组20只,每天保留灌肠 2次,连续 3 周.另取 20只正常饲养小鼠作为空白组.在治疗前和治疗后第 7、14、21天,观察小鼠体质量、大便性状、便血情况,并计算疾病活动指数(disease activity index,DAI),且于给药结束后进行麻醉取血并取结肠组织.采用HE染色观察各组小鼠结肠组织病理变化情况;ELISA法检测各组小鼠血清中炎症因子白细胞介素(interleukin)-22、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量变化情况;采用Western blot法检测各组小鼠结肠组织中的p90 核糖体蛋白S6 激酶(p90 ribosomal protein S6 kinase,p90RSK)、JNK、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)、细胞外调节蛋白激酶 1/2(extracellular regulated protein kinases 1/2,ERK 1/2)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶 1/2(phospho extracel-lular regulated protein kinases,p-ERK 1/2)蛋白的表达.结果 在治疗的第 7、14、21天,美沙拉嗪组、复方芩柏汤组小鼠体质量均明显高于模型组(P＜0.05,P＜0.01),DAI评分明显低于模型组(P＜0.05,P＜0.01).光镜下,与模型组相比,美沙拉嗪组及复方芩柏汤组小鼠结肠组织病理改变呈不同程度的恢复,炎症浸润减轻.给药结束后,与空白组比较,模型组p90RSK、p-JNK、p-ERK 1/2 蛋白以及IL-6、TNF-α蛋白表达明显升高(P＜0.01);与模型组比较,美沙拉嗪组和复方芩柏汤组p90RSK、p-JNK、p-ERK 1/2 蛋白以及IL-6、TNF-α蛋白表达明显降低(P＜0.05,P＜0.01),抗炎因子IL-22、IL-10 含量明显升高(P＜0.01).结论 复方芩柏汤可能通过抑制ERK/JNK信号通路,促进抗炎因子IL-22、IL-10 的表达,抑制促炎因子IL-6、TNF-α的表达,减少肠道炎症反应,促进肠上皮细胞增殖,改善肠黏膜屏障,促进UC小鼠肠道黏膜组织损伤修复.

我们通过转染P90核糖体S6激酶2(RSK2)小干扰RNA(siRNA)的方法,观察RSK2对结直肠癌细胞HCT-15生物学行为的影响.一、材料与方法1.材料:人结直肠癌细胞HCT-15细胞株、RSK2-siRNA、McCoy's 5A培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、、LipofectaminTM2000、Trizol、RSK2抗体、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)抗体、反转录试剂盒、实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)试剂盒、细胞周期和细胞凋亡试剂盒、细胞裂解液、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG抗体、二喹啉甲酸(BCA)蛋白浓度测定试剂盒、化学发光检测试剂盒等.

目的:探讨结直肠癌组织中P90核糖体S6激酶4(RSK4)蛋白、p53蛋白的表达及其临床病理意义.方法:选取我院病理科2014年1月～2016年5月既往收集的结直肠癌手术后标本70例及同期结直肠癌癌旁组织30例,采用免疫组化染色检测两组标本中RSK4蛋白、p53蛋白的表达情况,并分析其与结肠癌患者临床病理特征的相关性.结果:结直肠癌组织中RSK4蛋白、p53蛋白的阳性表达率分别为20.00％、55.71％,而癌旁组织中RSK4蛋白、p53蛋白阳性表达率分别为53.33％、10.00％,两组比较差异均具有统计学意义(P＜0.05).Ⅰ期+Ⅱ期、高分化和中分化结直肠癌组织RSK4蛋白的阳性表达率显著高于Ⅲ期、低分化结直肠癌(P＜0.05);Ⅰ期+Ⅱ期、浸润深度(T1、T2)、未发生淋巴结转移的结直肠癌组织中p53蛋白阳性表达率显著的低于Ⅲ期、浸润深度(T3、T4)、发生淋巴结转移的结肠癌组织(P＜0.05).结论:结直肠癌组织中RSK4蛋白表达下调、p53蛋白表达上调,二者可能与结直肠癌的发生和发展有关,并可能作为结肠癌诊断和预后评估的参考指标.

目的 探讨过表达p90核糖体S6蛋白激酶4变异体1(ribosomal protein S6 kinase 4 variant 1,RSK4m1)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长和侵袭的影响.方法 通过负载RSK4m1慢病毒在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中稳定过表达RSK4m1.以MDA-MB-231亲本细胞为空白对照组(Con组)、转染空载病毒的MDA-MB-231细胞为阴性对照组(Mock组)、转染过表达RSK4m1的MDA-MB-231细胞为实验组(OE组).采用qRT-PCR和Westen Blot法检测各组RSK4m1mRNA及蛋白的表达;CCK-8法检测细胞增殖情况;细胞划痕实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力.结果 OE组中RSK4m1 mRNA及蛋白的表达量均明显高于Con组及Mock组(P＜0.05).CCK-8实验显示,24 h、48 h、72 h和96 h时OE组细胞增殖均低于Mock组和Con组(P＜0.05);细胞划痕实验显示,细胞培养24 h后,OE组细胞迁移率显著低于Con组和Mock组[(14.53±0.64)％ vs (25.67±2.44)％、(24.47±2.25)％,P＜0.05].Transwell小室侵袭实验显示,OE组细胞侵袭能力显著低于Con组和Mock组[(35.00±5.57)个vs(66.70±5.86)个、(58.67±4.16)个,P＜0.05].结论 过表达RSK4m1可显著抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭能力,为RSK4m1可能成为乳腺癌的治疗新靶点提供了实验依据.

目的 观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后炎症反应的影响及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/p70核糖体S6蛋白激酶(mTOR/p70S6K)信号通路在其中发挥的作用.方法 7日龄新生SD大鼠90只按随机数字表法随机分为假手术组、缺氧缺血(HI)模型组、G-CSF组、雷帕霉素组及对照组,改良Rice法建立新生大鼠HIBD模型.HI前1 h,雷帕霉素组腹腔注射雷帕霉素250μg/kg,对照组予等体积乙醇腹腔注射.HI 1 h后,G-CSF组、雷帕霉素组及对照组腹腔注射G-CSF 50μg/kg,HI模型组及假手术组予等体积9 g/L盐水腹腔注射.HI 48 h后,Western blot检测脑组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-10及mTOR/p70S6K信号通路蛋白水平,尼氏染色评估海马CA1区及皮质神经元损伤情况,2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色检测脑梗死面积.结果 与HI模型组比较,G-CSF组及对照组脑梗死面积减少[(12.87±1.54)％、(11.90±1.31)％比(24.21±3.28)％],尼氏染色阳性神经元计数增多[海马CA1区:(61.00±4.90)个/视野、(61.67±6.40)个/视野比(42.67±4.46)个/视野;皮质:(92.67±6.68)个/视野、(90.17±4.45)个/视野比(70.83±6.97)个/视野],TNF-α及IL-1β水平降低(TNF-α:0.67±0.07、0.55±0.05比0.86±0.05;IL-1β:0.65±0.06、0.52±0.10比0.86±0.06),IL-10、p-mTOR/mTOR及p-p70S6K/p70S6K水平升高(IL-10:0.68±0.04、0.62±0.05比0.34±0.02;p-mTOR/mTOR:0.53±0.02、0.51±0.01比0.26±0.01;p-p70S6K/p70S6K:0.89±0.03、0.90±0.03比0.55±0.02),差异均有统计学意义(均P<0.05).与G-CSF组及对照组比较,雷帕霉素组脑梗死面积增加[(25.70±1.50)％],尼氏染色阳性神经元计数减少[海马CA1区:(40.67±3.50)个/视野;皮质:(68.33±8.17)个/视野],TNF-α及IL-1β水平升高(分别为0.97±0.06、0.98±0.10),IL-10、p-mTOR/mTOR及p-p70S6K/p70S6K水平降低(分别为0.21±0.02、0.30±0.01、0.55±0.01),差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 G-CSF可能通过上调mTOR/p70S6K信号通路抑制HIBD后的炎症反应.

p90核糖体S6激酶(RSK)是一种高度保守的丝氨酸/苏氨酸激酶,其包括RSK1、RSK2、RSK3及RSK44种亚型.RSK是丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节酶(MAPK/ERK)信号通路下游重要的效应分子,其通过磷酸化底物介导细胞增殖、侵袭、转移、衰老等一系列生物学活动.日前,RSK在化疗耐药方面的作用逐渐清晰,而其介导耐药的机制是学界关注的重点.本文将从RSK家族结构与功能,RSK所在的MAPK/ERK信号通路及RSK在不同癌症耐药中的作用方面,总结与归纳RSK与耐药的相关性及所涉及的研究机制,并探索RSK抑制剂用于逆转化疗耐药的发展潜力.

目的 探究雷帕霉素对重症急性胰腺炎(severe?acute?pancreatitis,SAP)大鼠胰腺损害的保护性作用,并进一步阐述其保护机制.方法 将90只SPF级雄性SD大鼠随机分为3组,即假手术组(SO组)、SAP组和雷帕霉素组(RAPA组),每组30只大鼠;每组大鼠再随机分为24、36和48h3个时点亚组,每个亚组10只大鼠.每组大鼠均行开腹手术,采用逆行胰胆管注射法制备模型,SO组大鼠仅注射0.9%生理盐水,SAP组和RAPA组大鼠注射5%牛磺胆酸钠溶液,且RAPA组在注射5%牛磺胆酸钠前30min经腹腔注射雷帕霉素.分别于模型制备术后24、36及48h处死相应亚组存活的大鼠,收集大鼠血清和胰腺组织,采用ELISA法检测血清IL-1β、IL-6及TNF-α含量,采用Western blot法检测胰腺组织中磷酸化的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)和磷酸化的核糖体S6蛋白激酶1(p-S6K1)的表达水平;胰腺组织行HE染色,光镜下进行病理学改变评分.结果 ①胰腺组织中p-mTOR和p-S6K1的表达水平:24、36及48h时,胰腺组织中p-mTOR和p-S6K1的表达水平均是SO组＜RAPA组＜SAP组,3组间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).②IL-1β:48h时,3组的血清IL-1β含量顺序为SO组＜RAPA组＜SAP组,3组间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05);IL-6:36h和48h时,3组的血清IL-6含量顺序为SO组＜RAPA组＜SAP组,3组间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05);TNF-α:48h时,3组的血清TNF-α含量顺序为SO组/RAPA组＜SAP组(P＜0.05),但SO组和RAPA组比较差异无统计学意义(P＞0.05).③胰腺织病理学评分:24、36及48h时3组胰腺组织的病理学评分顺序均为SO组＜RAPA组＜SAP组,3组间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).④胰腺组织中p-mTOR和p-S6K1的表达水平与胰腺组织的病理学评分均呈正相关(r=0.97,P＜0.01;r=0.89,P＜0.01).结论 雷帕霉素可以减轻SAP的胰腺损害程度,对胰腺组织具有保护性的作用.

目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR) 1/2双重抑制剂OSI-027对高体积分数氧(高氧)致sprague-dawley(SD)幼鼠肺损伤及纤维化的抑制作用.方法:72只3周龄SD幼鼠随机分为空气+生理盐水、高氧+生理盐水、高氧+雷帕霉素和高氧+OSI-027组,分别建立动物模型(各组n=18).高氧干预采用90％氧气持续处理,生理盐水、雷帕霉素、OSI-027干预分别于观察期第1、3、6、8、10、13天经腹腔注射给药,在造模第3、7、14天取各组幼鼠测量体质量变化、肺湿干重比(wet/dry ratio,W/D)、肺组织病理学检查、肺损伤评分、肺泡间隔厚度测定、肺组织免疫组化和蛋白印迹检测mTOR及磷酸化核糖体S6蛋白激酶(pS6K1)蛋白在肺组织的分布和表达.结果:从时间因素看,各组幼鼠体质量(F时间=297.098,P=0.000)、mTOR免疫组化(F时间=379.978,P=0.000)、mTOR(F时间=166.991,P=0.000)和pS6K1(F时间=122.676,P=0.000)蛋白水平都随时间延长而增加.除空气组外,其余各组肺损伤评分(F时间=1410.362,P=0.000)、肺泡间隔厚度(F时间=356.312,P=0.000)、pS6K1免疫组化(F时间=57.992,P=0.000)都随时间延长而升高,肺W/D(F时间=28.915,P=0.000)第3、7天时升高,第14天时下降.从分组因素看,体质量(F分组=176.597,P=0.000)空气组明显高于其他组,肺W/D(F分组=28.484,P=0.000)和肺泡间隔厚度(F分组=296.223,P=0.000)空气组明显低于其他组,除第3天外,mTOR免疫组化(F分组=134.100,P=-0.000)高氧组明显高于其他组,PS6K1免疫组化(F分组=234.697,P=0.000)、mTOR (F 分组=59.377,P=-0.000)和PS6K1(F分组=101.837,P=0.000)蛋白印迹高氧组明显高于其他组,肺损伤评分(F分组=2 420.076,P=0.000)高氧雷帕组明显高于其他组,高氧OSI组明显低于高氧组和高氧雷帕组.结论:高浓度氧可激活肺组织mTOR信号途径;mTOR可能促进了高氧肺损伤纤维化的发生发展,其调控机制可能与抑制mTOR信号通路的活化有关.mTOR复合物1/2(mTORC1/2)双重抑制剂OSI-027能减轻高氧致SD幼鼠肺损伤及纤维化.

探讨肝细胞癌(HCC)组织中核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)、B细胞淋巴瘤-2基因(BCL-2)和抑癌基因P53蛋白的表达及其与临床病理因素的关系.选取我院2018年1～12月手术切除的HCC标本(90份)、胆管癌标本(40份)及正常肝组织(10份)为研究对象,采用免疫组化法测定所有标本中S6K1、BCL-2、P53蛋白表达情况,分析S6K1、BCL-2、P53蛋白表达情况与HCC患者临床特点及肿瘤生物学行为的关系.HCC组织中S6K1、BCL-2、P53蛋白表达率分别为75.6％、78.9％和84.4％,显著高于胆管癌组织及正常肝组织,差异有统计学意义(P<0.05).S6K1、BCL-2、P53蛋白的表达与HCC肿瘤包膜是否完整及是否发生血管侵袭有关.包膜完整组的HCC组织BCL-2及P53蛋白表达率明显低于包膜不完整组,差异有统计学意义(P<0.05);血管侵袭组的HCC组织S6K1及P53蛋白表达率明显高于无血管侵袭组,差异有统计学意义(P<0.05).S6K1、BCL-2、P53蛋白的表达与HCC的发生、发展及生物学行为密切相关,可作为诊断、鉴别诊断、疗效判定和预后评估的重要依据.

目的:观察通肺络补宗气方对肺纤维化大鼠肺组织中雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(p70 ribosomal protein S6 kinase,p70S6K)信号通路及部分细胞外基质(extracellular matrix,ECM)蛋白表达的影响.方法:健康雄性SD大鼠96只,随机分为空白组,模型组,中药初期、中期、后期干预组,西药初期、中期、后期干预组,复制肺纤维化动物模型.中药各组给予通肺络补宗气方灌胃,西药各组给予N-乙酰半胱氨酸灌胃,均连续给药90 d.实验第19周处死大鼠,观察肺组织病理学改变,检测肺组织中mTOR和p70S6K的mRNA相对表达水平,以及透明质酸(hyaluronic acid,HA)、Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ)和Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)等ECM蛋白的IOD值及相对表达水平.结果:与空白组比较,模型大鼠肺组织出现肺泡结构破坏、间质纤维增生等病理改变,肺组织中mTOR和p70S6K的mRNA相对表达水平增高(P＜0.01),HA、Collagen Ⅰ和CollagenⅢ蛋白IOD值和相对表达水平增高(P＜0.01);与模型组比较,中药、西药各干预组大鼠肺组织纤维化病变均有所减轻,肺组织中mTOR和p70S6K的mRNA相对表达水平降低(P＜0.01),中药初期、中期干预组和西药初期干预组大鼠HA、Collagen Ⅰ和CollagenⅢ蛋白IOD值均降低(P＜0.05或P＜0.01),中药各干预组和西药初期、中期干预组大鼠HA、Collagen Ⅰ和CollagenⅢ的蛋白相对表达水平降低(P ＜0.05或P＜0.01).结论:通肺络补宗气方可抑制博来霉素致大鼠肺纤维化的发生发展,其机制可能与调控mTOR/p70S6K信号通路,抑制肺成纤维细胞的增殖、生长,减少HA、Collagen Ⅰ、CollagenⅢ等ECM的过度沉积相关.