目的:探讨谷氨酰胺对经烧伤大鼠血清（以下简称烧伤血清）干预的大鼠心肌细胞的作用及其细胞信号机制。方法:采用实验研究方法。取10只7~8个月龄雌雄各半Wistar大鼠制备正常大鼠血清（以下简称正常血清），另取20只7~8个月龄雌雄各半Wistar大鼠造成30%体表总面积Ⅲ度烧伤后制备烧伤血清，从180只1~3 d龄雌雄不拘Wistar大鼠心尖组织中分离培养原代心肌细胞用于后续实验。按随机数字表法（分组方法下同）将细胞分为正常血清组、烧伤血清组，加入相应血清培养。分别于培养1、3、6、9、12 h，采用锥虫蓝实验检测细胞存活率。将细胞分为单纯烧伤血清组、烧伤血清+4 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+8 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+16 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+20 mmol/L谷氨酰胺组，采用单纯烧伤血清或烧伤血清+相应终物质的量浓度谷氨酰胺处理，培养前实验筛选出的干预时间，同前检测细胞存活率。将细胞分为正常血清组、单纯烧伤血清组、烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+16 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+20 mmol/L谷氨酰胺组，同前处理后采用蛋白质印迹法检测培养30 min哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1（mTORC1）、p70核糖体蛋白S6激酶（p70 S6K）和真核翻译起始因子4E结合蛋白1（4E-BP1）磷酸化水平。将细胞分为正常血清组、单纯烧伤血清组、烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺+25 ng/mL雷帕霉素组，行相应处理后，分别于培养1、3、6 h，采用免疫荧光法检测热休克蛋白70（HSP70）和金属硫蛋白（MT）表达并观测微管形态。各组各时间点各指标样本数均为10。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD- t检验、LSD检验及Bonferroni校正。 结果:培养1、3、6、9、12 h，烧伤血清组细胞存活率均明显低于正常血清组（ t=4.950、16.752、35.484、34.428、27.781， P<0.01）。与组内培养1 h比，烧伤血清组培养3、6、9、12 h细胞存活率明显降低（ P<0.05）；与组内培养3 h比较，烧伤血清组培养6、9、12 h细胞存活率明显降低（ P<0.05）；与组内培养6、9 h比较，烧伤血清组培养12 h细胞存活率明显降低（ P<0.05）；烧伤血清组培养6、9 h细胞存活率比较，差异无统计学意义（ P>0.05）。因此选择培养6 h作为后续烧伤血清干预时间。培养6 h，与单纯烧伤血清组比较，烧伤血清+4 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+8 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+16 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+20 mmol/L谷氨酰胺组细胞存活率均明显升高（ P<0.01）。烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组与烧伤血清+16 mmol/L谷氨酰胺组细胞存活率相近（ P>0.05），烧伤血清+16 mmol/L谷氨酰胺组与烧伤血清+20 mmol/L谷氨酰胺组细胞存活率相近（ P>0.05）。因此选择12、16、20 mmol/L作为后续谷氨酰胺的干预浓度。培养30 min，正常血清组、单纯烧伤血清组、烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+16 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+20 mmol/L谷氨酰胺组细胞mTORC1、p70 S6K、4E-BP1磷酸化水平分别为1.001±0.042、0.510±0.024、0.876±0.022、0.836±0.074、0.856±0.041，1.00±0.11、0.38±0.09、0.95±0.13、0.96±0.13、0.89±0.24，1.00±0.07、0.29±0.08、0.87±0.27、0.68±0.08、0.60±0.21。与正常血清组比较，其余4个烧伤血清组细胞mTORC1、p70 S6K、4E-BP1磷酸化水平均明显降低（ P<0.01） 。与单纯烧伤血清组比较，其余3个烧伤血清组细胞mTORC1、p70 S6K、4E-BP1磷酸化水平均明显升高（ P<0.01）。烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组细胞4E-BP1磷酸化水平明显高于烧伤血清+16 mmol/L谷氨酰胺组和烧伤血清+20 mmol/L谷氨酰胺组（ P<0.05）。单纯烧伤血清组细胞培养1 h MT表达明显低于正常血清组（ P<0.05），其余时间点MT表达明显高于正常血清组（ P<0.01）；培养1、3、6 h，单纯烧伤血清组细胞HSP70表达明显高于正常血清组（ P<0.05），烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组细胞HSP70和MT表达均明显高于单纯烧伤血清组（ P<0.05），烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺+25 ng/mL雷帕霉素组细胞HSP70和MT表达均明显低于烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组（ P<0.01）。正常血清组细胞培养1、3、6 h微管结构完整，呈网格排列，染色均匀。单纯烧伤血清组细胞培养1 h部分微管出现断裂，部分网格排列不齐；培养3 h靠近细胞核微管结构清晰，细胞核远端微管模糊不清；培养6 h微管结构模糊不清。烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组细胞培养各时间点微管破坏程度较单纯烧伤血清组轻。烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺+25 ng/mL雷帕霉素组细胞培养各时间点微管形态与单纯烧伤血清组相近。 结论:烧伤血清可导致大鼠心肌细胞受损，细胞存活率明显下降。谷氨酰胺通过调控mTOR/p70 S6K/4E-BP1信号通路，促进心肌细胞HSP70和MT表达，稳定微管结构，从而发挥其细胞保护作用。

目的:探讨p-AKT-mTOR-P70S6K信号通路在多倍体子宫颈癌细胞放射治疗中的作用。方法:取人子宫颈癌HeLa细胞株，使用7 Gy的6 MV X线照射HeLa细胞，诱导第5天后用倒置显微镜观察细胞的形态变化。将细胞分为7 Gy组（经7 Gy X线照射且未经转染的多倍体Hela细胞）和对照组（未经放射诱导且未经转染的Hela细胞）。另外分别将载有pcDNA3阴性对照序列的质粒和载有pcDNA3-TT-AKT序列的质粒转染至HeLa细胞中，转染48 h后经7 Gy X线照射诱导，记为pcDNA3+7 Gy组、pcDNA3-TT-AKT+7 Gy组。采用CCK-8法检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞周期，线粒体膜电位法检测细胞凋亡能力，蛋白印迹法检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞自噬相关蛋白的相对表达情况。结果:7 Gy组HeLa细胞在放射诱导第5天大部分正常细胞已死亡，少部分存活的细胞体积增大，细胞核呈多个核状态。蛋白印迹法检测结果显示，7 Gy组HeLa细胞p-AKT、p-mTOR、p-P70S6K的相对表达水平均低于对照组（均 P<0.05）。CCK-8法检测结果显示，pcDNA3+7 Gy组和pcDNA3-TT-AKT+7 Gy组在培养48、72 h后，吸光度（ A）值分别为0.45±0.06、0.65±0.06和0.75±0.05、1.05±0.02，差异均有统计学意义（均 P<0.05），pcDNA3-TT-AKT+7 Gy组均高于pcDNA3+7 Gy组。流式细胞术检测结果显示，pcDNA3+7 Gy组、pcDNA3-TT-AKT+7 Gy组G 0/G 1期、G 2/M期细胞比例分别为（29.2±3.6）%、（26.7±1.7）%和（29.6±1.6）%、（30.3±0.6）%，差异均无统计学意义（均 P>0.05）；S期细胞比例分别为（10.2±0.9）%、（14.6±1.5）%，差异有统计学意义（ t=2.86， P=0.043）。线粒体膜电位法检测显示，pcDNA3+7 Gy组、pcDNA3-TT-AKT+7 Gy组的绿色荧光比例分别为（23.1±2.5）%、（14.3±1.9）%，差异有统计学意义（ t=4.82， P=0.009）。蛋白质印迹法检测结果显示，pcDNA3-TT-AKT+7 Gy组p-cdc25c（Ser216）的相对表达水平高于pcDNA3+7 Gy组（ P<0.001）；Bak、LC3Ⅱ/Ⅰ的相对表达水平均低于pcDNA3+7 Gy组（均 P<0.05）。 结论:p-AKT-mTOR-P70S6K信号通路可能参与调控放射诱导的多倍体HeLa细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡。

目的:研究mTOR信号通路介导的自噬在镉抑制人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）成骨分化中的作用。方法:根据氯化镉的染毒剂量，分为0、2.5和5.0 μmol/L染毒组，每组细胞均处理1 d、4 d和（或）7 d，检测ALP活力、成骨标志物（ALP，RUNX2和OSTERIX）mRNA和蛋白质表达水平、自噬相关蛋白（LC3和Beclin-1）和mTOR信号通路相关蛋白（mTOR，p-mTOR和p-p70S6K）表达情况，碱性磷酸酶染色和茜素红染色情况。选择MHY 1485为信号通路激活剂，设置对照组、氯化镉组（5.0 μmol/L）、MHY 1485组和氯化镉+MHY 1485联合处理组，处理7 d后分别检测各组hBMSCs的自噬相关蛋白和mTOR信号通路相关蛋白表达水平。结果:在第1天和第4天，0、2.5和5.0 μmol/L组之间的ALP活力差异无统计学意义（ P值均>0.05）；在第7天，与0 μmol/L组相比，2.5、5.0 μmol/L组的ALP活力、成骨标志物ALP、RUNX2和OSTERIX表达水平和mTOR信号通路相关蛋白mTOR、p-mTOR、p-p70S6K表达水平均降低（ P值均<0.05），5.0 μmol/L组的自噬相关蛋白LC3、Beclin-1表达均有所增加（ P值均<0.05）。与0 μmol/L组相比，2.5、5.0 μmol/L组的染色变浅，ALP和矿化结节生成减少。与氯化镉组相比，氯化镉与MHY 1485联合处理组的自噬相关蛋白表达下降，mTOR信号通路相关蛋白表达增加，差异具有统计学意义（ P值均<0.05）。 结论:镉抑制hBMSCs成骨分化可能与mTOR信号通路介导的自噬有关。

目的:探讨低剂量光动力对人脂肪间充质干细胞（ADSC）的增殖、调节及分泌功能的作用及其相关机制，以期为慢性创面的修复探索新方法。方法:采用实验研究方法。取2021年2—4月于陆军军医大学（第三军医大学）第一附属医院皮肤科行皮肤外科手术的10例患者（5例男性、5例女性，23~47岁）捐献的术后废弃脂肪组织，提取细胞并鉴定表型。取3批ADSC，各批细胞均分为仅行常规培养的正常对照组，行海姆泊芬处理后常规培养的单纯光敏剂组，行红光照射处理后常规培养的单纯光照组，行海姆泊芬和红光照射处理后再常规培养的光敏剂+光照组，样本数均为3。第1和2批细胞于处理完成后培养24 h，分别采用脱氧尿嘧啶核苷染色法检测ADSC增殖水平，Transwell实验检测与ADSC共培养的HaCaT细胞迁移比例；第3批细胞于处理完成后培养7 d，采用免疫荧光法检测ADSC的细胞外基质蛋白表达。取ADSC分为光动力后0 min组、光动力后15 min组、光动力后30 min组、光动力后60 min组，每组3孔，分别于行光动力处理后相应时间点采用蛋白质印迹法检测并计算磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、磷酸化p70核糖体蛋白S6激酶（p-p70 S6K）/p70核糖体蛋白S6激酶（p70 S6K）比值。取2批ADSC，各批细胞均分为正常对照组、单纯光动力组及光动力+雷帕霉素组，每组3孔，并行相应处理。第1批细胞于处理完成后培养15 min，同前检测并计算p-mTOR/mTOR、p-p70 S6K/p70 S6K比值；第2批细胞于处理完成后培养7 d，同前检测细胞外基质蛋白表达。对数据行单因素方差分析、LSD检验。结果:培养12 d后，细胞鉴定为ADSC。处理完成后培养24 h，单纯光敏剂组和单纯光照组ADSC增殖水平［分别为（4.0±1.0）%、（4.1±0.4）%］和HaCaT细胞迁移比例（分别为1.17±0.14、1.13±0.12）均与正常对照组［分别为（3.7±0.6）%、1.00±0.16］相近（ P>0.05），且均明显低于光敏剂+光照组［分别为（34.2±7.0）%、2.55±0.13， P<0.01］。处理完成后培养7 d，与正常对照组相比，单纯光敏剂组ADSC的Ⅲ型胶原表达增加（ P<0.05），单纯光照组ADSC的Ⅰ型胶原与Ⅲ型胶原表达均明显增加（ P<0.01）；与单纯光敏剂组和单纯光照组相比，光敏剂+光照组ADSC的Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原与纤维连接蛋白表达均明显增加（ P<0.01）。与光动力后0 min组相比，光动力后15 min组ADSC的p-mTOR/mTOR与p-p70 S6K/p70 S6K比值均明显增加（ P<0.01），光动力后30 min组、光动力后60 min组ADSC的p-p70 S6K/p70 S6K比值均明显增加（ P<0.01）。处理完成后培养15 min，与正常对照组相比，单纯光动力组ADSC的p-mTOR/mTOR与p-p70 S6K/p70 S6K比值均明显增加（ P<0.05或 P<0.01）；与单纯光动力组相比，光动力+雷帕霉素组ADSC的p-mTOR/mTOR与p-p70 S6K/p70 S6K比值均明显减少（ P<0.05）。处理完成后培养7 d，与正常对照组相比，单纯光动力组ADSC的Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原与纤维连接蛋白表达均明显增加（ P<0.01）；与单纯光动力组相比，光动力+雷帕霉素组ADSC的Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原与纤维连接蛋白表达均明显减少（ P<0.01）。 结论:低剂量光动力可以促进ADSC的增殖、提高ADSC调节HaCaT细胞迁移的能力，并通过快速激活mTOR信号通路增强细胞外基质蛋白的分泌。

目的:探讨胚胎干细胞多能因子NANOG通过AMPK/mTOR通路介导乳腺癌细胞活性与侵袭。方法:2019年7月至2020年8月期间收集首都医科大学附属北京同仁医院58例乳腺癌患者，将每例患者入院时的临床资料进行对比分析。qRT-PCR检测癌旁组织与癌组织中NANOG的表达水平，Western blot验证NANOG调控AMPK/mTOR通路。使用敲减NANOG的特异性质粒或AMPK的抑制剂Compound C处理细胞，MTT检测细胞活力，Transwell检测细胞侵袭能力。结果:qRT-PCR检测发现，与癌旁组织（1.00±0.31）相比，癌组织中NANOG表达水平（1.45±0.27）升高（ t=8.34， P<0.001），与正常乳腺上皮细胞MCF-10A（1.00±0.12）相比，乳腺癌细胞系BT474（2.64±0.25， t=10.24， P=0.001）、MCF-7（1.56±0.13， t=5.48， P=0.005）、ZR-75-30（1.84±0.16， t=7.28， P=0.002）中NANOG表达水平均升高，在BT474细胞中表达最高，可作为预测乳腺癌的特异性生物分子。NANOG的表达水平可能与淋巴结转移、组织学分级、病理类型有关，与非淋巴结转移患者（1.36±0.23）或非浸润性患者（1.35±0.25）相比，淋巴结转移患者（1.54±0.27， t=2.61， P=0.012）或浸润性患者（1.53±0.26， t=2.60， P=0.012）中NANOG表达水平升高。敲减NANOG后AMPK蛋白及磷酸化水平升高，mTOR、p70S6K蛋白及磷酸化水平降低（均 P<0.05）。细胞中敲减NANOG能抑制乳腺癌细胞活性（si-RNA：100.00±8.65，si-NANOG：58.36±4.58）（ t=7.37， P=0.002）与侵袭能力（si-RNA：121.41±10.34，si-NANOG：58.34±8.41）（ t=8.20， P=0.001），使用AMPK抑制剂处理细胞后，敲减NANOG产生的作用被解除（均 P<0.05）。 结论:胚胎干细胞多能因子NANOG抑制AMPK/mTOR通路的激活可促进乳腺癌细胞活性与侵袭能力，NANOG可作为预测乳腺癌的有效生物分子。

目的:探讨骆驼蓬总碱(TAH)能否诱导神经细胞自噬并促进神经毒性蛋白Tau蛋白和α-突触核蛋白(α-Syn)的降解。方法:(1)将体外培养的PC12细胞分为空白对照组及1、2.5、5、10、20、50 μg/mL TAH组，分别加入0、1、2.5、5、10、20、50 μg/mL TAH作用24 h，观察细胞形态及数目的变化，采用MTT法检测细胞存活率；(2)将PC12细胞分为空白对照组、雷帕霉素组及1、2.5、5、10、20 μg/mL TAH组，分别加入等量溶剂、50 nmol/L自噬激活剂雷帕霉素及1、2.5、5、10、20 μg/mL TAH作用4 h，采用免疫荧光染色检测细胞自噬体数；(3)将PC12细胞分为空白对照组、雷帕霉素组、10 μg/mL TAH组，分别加入等量溶剂、50 nmol/L雷帕霉素、10 μg/mL TAH作用4 h，Western blotting检测细胞p62和微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ蛋白的表达；(4)将PC12细胞分为空白对照组、氯喹组、TAH组、TAH+氯喹组，分别加入等量溶剂、50 nmol/L自噬抑制剂氯喹、10 μg/mL TAH、10 μg/mL TAH+50 nmol/L氯喹作用4 h，Western blotting检测细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达；(5)将PC12细胞分为TAH组和空白对照组，分别加入10 μg/mL TAH和等量溶剂处理4 h后，Western blotting检测细胞磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、磷酸化p70核糖体蛋白S6激酶(p-p70S6K)的表达；(6)将过表达Tau-绿色荧光蛋白(GFP)的Tet on HEK293细胞分为空白对照组、TAH组、强力霉素组、强力霉素+TAH组、强力霉素+TAH+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、强力霉素+TAH+氯喹组，后4组细胞加入200 ng/mL强力霉素处理24 h后，空白对照组加入等量溶剂，TAH组加入10 μg/mL TAH，后3组细胞分别加入10 μg/mL TAH、10 μg/mL TAH+5 mmol/L 3-MA、10 μg/mL TAH+50 nmol/L氯喹，作用24 h后在激光共聚焦显微镜下观察细胞绿色荧光强度的变化，Western blotting检测细胞Tau-GFP和LC3-Ⅱ蛋白的表达；(7)将稳定表达α-Syn的HEK293细胞分为空白对照组、氯喹组、TAH组、TAH+氯喹组，分别加入等量溶剂、50 nmol/L氯喹、10 μg/mL TAH、10 μg/mL TAH+50 nmol/L氯喹作用24 h，Western blotting检测细胞α-Syn和LC3-Ⅱ蛋白的表达。结果:(1)与空白对照组比较，20、50 μg/mL TAH组细胞存活率降低，且50 μg/mL TAH组细胞存活率低于20 μg/mL TAH组，差异均有统计学意义( P<0.05)；(2)与空白对照组比较，雷帕霉素组、10、20 μg/mL TAH组细胞自噬体数增多，且10 μg/mL TAH组细胞自噬体数多于20 μg/mL TAH组，差异均有统计学意义( P<0.05)，因此，选择10 μg/mL TAH用于后续实验；(3)与空白对照组比较，雷帕霉素组、TAH组细胞p62蛋白的表达均降低，LC3-Ⅱ蛋白的表达均增加，差异均有统计学意义( P<0.05)；(4)与空白对照组比较，氯喹组、TAH组、TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达均增加，且TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达高于氯喹组，差异均有统计学意义( P<0.05)；(5)与空白对照组比较，TAH组细胞p-mTOR、p-p70S6K的表达均降低，差异均有统计学意义( P<0.05)；(6)强力霉素组细胞Tau-GFP蛋白的表达较空白对照组增加，强力霉素+TAH组细胞Tau-GFP蛋白的表达较强力霉素组降低，强力霉素+TAH+3-MA组、强力霉素+TAH+氯喹组细胞Tau-GFP蛋白的表达较强力霉素+TAH组增高，差异均有统计学意义( P<0.05)。TAH组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较空白对照组增加，强力霉素+TAH组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较强力霉素组增加，强力霉素+TAH+3-MA组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较强力霉素+TAH组降低，强力霉素+TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较强力霉素+TAH组增高，差异均有统计学意义( P<0.05)；(7)与空白对照组比较，TAH组HEK293细胞α-Syn蛋白的表达降低，LC3-Ⅱ蛋白的表达升高，差异均有统计学意义( P<0.05)；TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达高于氯喹组，TAH+氯喹组细胞α-Syn蛋白的表达高于TAH组，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:TAH可能通过抑制mTOR/p70S6K信号通路激活神经细胞自噬，从而促进Tau和α-Syn的降解。

目的:观察推拿、跑台训练及联合干预对急性骨骼肌损伤大鼠腓肠肌蛋白代谢信号通路相关分子雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化(p-)mTOR、p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)、p-p70S6K、Smad2/3、肌生成抑制素(MSTN)表达的影响，探讨骨骼肌修复的可能机制。方法:采用随机数字表法将30只雄性SD大鼠分为正常组、自然恢复组、推拿组、跑台组及联合组。通过打击器制备大鼠右后肢急性骨骼肌损伤动物模型。于造模24 h后推拿组予以患侧拇指揉法干预，跑台组予以跑台训练，联合组则予以推拿及跑台训练联合干预；各组大鼠每周干预5次，连续干预3周。于干预结束后进行行为学检测，分析各组大鼠步态并统计落入电网次数，采用HE染色测定腓肠肌纤维横截面积，采用免疫印迹法检测mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K、Smad2/3蛋白相对表达量，采用实时荧光定量PCR法检测腓肠肌中MSTN mRNA相对表达量。结果:电网打击实验结果显示，推拿组、跑台组及联合组被打击次数均较自然恢复组明显减少( P<0.05)。推拿组、跑台组及联合组肌纤维横截面积、患侧腓肠肌湿重均较自然恢复组明显增加( P<0.05)；且跑台组、联合组肌纤维横截面积亦较推拿组明显增大( P<0.05)。与正常组比较，自然恢复组、推拿组、跑台组及联合组mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K蛋白相对表达量均明显升高( P<0.05)，Smad2/3蛋白相对表达量和MSTN mRNA相对表达量均明显降低( P<0.05)；与自然恢复组比较，推拿组、跑台组及联合组mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K蛋白相对表达量均明显升高( P<0.05)，Smad2/3蛋白相对表达量及MSTN mRNA相对表达量均明显减少( P<0.05)；与推拿组比较，跑台组及联合组mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K蛋白相对表达量均明显增加( P<0.05)，Smad2/3蛋白相对表达量及MSTN mRNA相对表达量均明显降低( P<0.05)。 结论:早期推拿、跑台训练及联合干预均可能通过抑制Myostatin-Smad2/3信号通路，促进mTOR-p70S6K信号通路来增加急性骨骼肌损伤大鼠肌蛋白合成，促进肌肉肥大，改善损伤后腓肠肌结构及功能，且以跑台训练及跑台训练联合推拿干预的疗效较显著。

目的:观察二甲双胍对慢性支气管哮喘(哮喘)动物模型的气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的影响及机制。方法:使用OVA致敏法制备慢性哮喘模型，末次激发48 h后处死大鼠，使用酶消化法进行ASMCs的原代分离培养。对原代培养的ASMCs的一磷酸腺苷活化的蛋白激酶α1(AMPK-α1)、S期激酶相关蛋白(SKP-2)的表达使用shRNA进行干扰，之后采用Western blot检测AMPK/mTOR通路相关蛋白的表达。结果:在原代培养的ASMCs中，二甲双胍可激活AMPK通路，能明显抑制ASMCs的增殖；雷帕霉素亦可明显抑制细胞的增殖，两者均存在明显的量效关系( P值均<0.05)。沉默AMPK基因表达后，可使ASMCs增殖增加( P<0.01)，进一步分析发现mTOR及下游的p70s6k磷酸化增加( P<0.05)，从而上调SKP-2基因表达( P<0.05)、下调P21基因表达( P<0.01)；沉默SKP-2基因表达，再干扰AMPK基因的表达，可逆转其促进细胞增殖的作用( P<0.01)。 结论:AMPK/mTOR通路对ASMCs增殖的调节是通过调节SKP2表达，进而影响P21水平实现的。二甲双胍作为AMPK的激动剂，有潜在的抑制哮喘患者气道平滑肌增生、进而改善气道重塑的作用。

目的:探讨左旋门冬酰胺酶对伯基特淋巴瘤细胞株增殖、细胞周期和凋亡的影响及其作用机制。方法:应用CCK-8法检测左旋门冬酰胺酶对伯基特淋巴瘤细胞株细胞增殖的影响，流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期，实时定量PCR和Western blot检测分析细胞周期、凋亡、自噬和PI3K/Akt/mTOR信号通路中各种分子的表达变化。结果:左旋门冬酰胺酶明显抑制多种伯基特淋巴瘤细胞株的增殖，并引起细胞周期G 0/G 1期阻滞，诱导细胞凋亡和自噬。进一步结果表明左旋门冬酰胺酶抑制c-Myc的表达，同时抑制p-PI3K、p-Akt-S473、p-mTOR、p-70S6K和p-4E-BP1的表达。PI3K抑制剂LY294002联合左旋门冬酰胺酶进一步诱导了细胞凋亡。此外，左旋门冬酰胺酶抑制STAT和ERK信号通路。 结论:左旋门冬酰胺酶抑制伯基特淋巴瘤细胞株细胞增殖和G 0/G 1期细胞阻滞，诱导自噬和凋亡并通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路调控细胞凋亡。

目的:探讨西罗莫司通过磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路对淋巴管畸形的治疗机制研究。方法:30只雌性Wistar大鼠(河南实验动物中心)在颈部皮下注射弗氏不完全佐剂构建大鼠淋巴结畸形模型，按照随机数字表法分为模型组、西罗莫司低剂量组和高剂量组，每组10只，西罗莫司低剂量组和高剂量组经尾静脉注射西罗莫司25 mg/kg和100 mg/kg，模型组注射等体积生理盐水。3组大鼠治疗6周后，计算病变组织质量和体积变化；蛋白质免疫印迹(Western blot)分析PI3K/Akt/mTOR通路及其底物p70S6K活性。免疫组织化学分析病变部位细胞核增殖抗原(Ki-67)和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平。测量体重分析药物的安全性。组间比较采用单因素方差分析。结果:模型组大鼠病变部位质量[(0.51±0.06) g]明显高于西罗莫司低剂量组[(0.41±0.04) g]，差异有统计学意义( t＝4.342， P<0.05)。西罗莫司低剂量组大鼠病变部位质量[(0.41±0.04) g]明显高于西罗莫司低剂量组[(0.24±0.05) g]，差异有统计学意义( t＝7.726， P<0.05)。模型组大鼠病变部位体积[(297.60±22.10) mm 3]明显高于西罗莫司低剂量组[(245.20±23.33) mm 3]，差异有统计学意义( t＝5.155， P<0.05)。西罗莫司低剂量组大鼠病变部位体积[(245.20±23.33) mm 3]明显高于西罗莫司高剂量组[(189.60±22.84) mm 3]，差异有统计学意义( t＝5.385， P<0.05)。模型组大鼠淋巴管畸形病灶Ki-67和VEGF表达水平(171.30±17.55、208.70±23.57)明显高于西罗莫司低剂量组(136.70±13.06、156.80±16.31)，差异有统计学意义( t＝5.002，5.727， P<0.05)。西罗莫司低剂量组大鼠淋巴管畸形病灶(136.70±13.06、156.80±16.31)明显高于西罗莫司高剂量组(99.30±9.18、113.20±12.65)，差异有统计学意义( t＝7.411、6.681， P<0.05)。模型组大鼠淋巴管畸形病灶磷酸化mTOR和磷酸化p70S6K表达水平(0.98±0.07、0.88±0.10)明显高于西罗莫司低剂量组(0.79±0.07、0.60±0.09)，差异有统计学意义( t＝7.704、6.453 P<0.05)。西罗莫司低剂量组大鼠淋巴管畸形病灶磷酸化mTOR和磷酸化p70S6K表达水平(0.79±0.07、0.60±0.09)明显高于西罗莫司高剂量组(0.50±0.13、0.36±0.10)，差异有统计学意义( t＝6.231、5.691， P<0.05)。 结论:西罗莫司治疗淋巴管畸形具有较好的效果，且安全性较高，可能与其抑制mTOR激酶活性有关。