目的:探讨着丝粒蛋白F(centromere protein F,CENPF)在腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)发生发展中的作用和分子机制.方法:通过小干扰RNA转染敲低ACC细胞中的CENPF.通过细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、划痕实验和Transwell测定评估敲低CENPF对ACC细胞增殖、迁移、侵袭的影响;通过蛋白免疫印迹实验分析改变CENPF表达后ACC细胞中磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine protein kinase,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路相关蛋白表达变化,通过CCK-8、划痕实验和Transwell测定评估敲低CENPF联合PI3K抑制剂BKM-120对ACC细胞增殖、迁移、侵袭的影响.结果:敲低ACC-M中CENPF表达后,CCK-8实验证明其增殖能力减弱;划痕实验表明其迁移能力减弱,Transwell实验表明其侵袭能力减弱,PI3K/AKT通路关键蛋白p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达水平下降.在下调CENPF的ACC-M中加入PI3K抑制剂,PI3K/AKT通路关键蛋白表达水平进一步下降.此外,加入PI3K抑制剂后,CENPF下调的ACC-M增殖、迁移、侵袭能力较单纯下调CENPF的ACC-M进一步减弱.结论:CENPF通过调控PI3K/AKT信号通路参与ACC进展.

目的 肺鳞癌(Lung squamous cell carcinoma,LUSC)是全世界范围内高频率发生的恶性肿瘤.最近的研究表明,异甘草素(Isoliquiritigenin,ISL)在肿瘤增殖和转移中发挥抗肿瘤活性.因此,研究旨在探讨ISL在抗LUSC转移中的作用机制.方法 利用梯度浓度ISL处理LUSC细胞,探究ISL在LUSC细胞增殖、迁移和侵袭中的抗癌特性.随后,利用生物信息学手段探寻了长链非编码RNA(Long non-coding RNAs,lncRNA)MIR22HG/miR-24-3p/Fas配体 基因(Fas ligand Gene,FASLG)之间可能的互作关系.实时荧光定量 PCR(Quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测 LUSC 细胞中 lncRNA MIR22HG、miR-24-3p、FASLG 的表达,细胞计数盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、克隆形成、划痕愈合和Transwell实验分别检测细胞活力、增殖、迁移和侵袭.蛋白质免疫印迹法(Western blot,WB)检测上皮间充质转换(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)和转移相关蛋白的表达.RNA免疫沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RIP)实验和双萤光素酶实验验证 lncRNA MIR22HG 与 miR-24-3p、miR-24-3p与FASLG的结合关系.结果 ISL可以显著抑制LUSC细胞增殖、迁移和侵袭.生信分析及临床样本分析发现lncRNA MIR22HG在LUSC中低表达,ISL可以促进lncRNA MIR22HG的表达,抑制LUSC细胞 的恶性行为.此外,lncRNA MIR22HG可以海绵吸附miR-24-3p进而调节FASLG的表达.miR-24-3p在LUSC中上调表达,FASLG在LUSC中下调表达.过表达FASLG可以逆转miR-24-3p过表达对LUSC增殖、转移以及EMT进程的促进作用.结论 这些结果表明,ISL通过lncRNA MIR22HG/miR-24-3p/FASLG轴抑制肺鳞癌转移,表明ISL有潜力作为治疗LUSC的新型药物.

组织工程是一个多学科交叉领域，旨在除传统的创后或术后组织再生手段(自体移植、异体移植)外，利用现代技术设计和开发特定的生物材料，为组织损伤修复提供新的治疗思路。在众多组织工程相关生物材料中，水凝胶由于其独特的生物相容性、力学可调性、可降解性及高度亲水性等性质，被广泛应用于生物医学工程领域。除生物材料外，细胞也是组织工程的重要元素之一。干细胞具有多向分化潜能和低免疫原性，在组织工程中被广泛研究和应用。以明胶、胶原蛋白等材料制备的光交联蛋白基水凝胶具有良好的生物相容性和力学性能，可为干细胞提供类似细胞外基质的微环境，有利于促进其粘附、增殖及分化。负载干细胞的光交联蛋白基水凝胶充分发挥两者优势，协同促进组织损伤修复与再生。本文对光交联蛋白基水凝胶的制备及其负载干细胞在组织工程中的研究进行阐述与总结。

胶质瘤是中枢神经系统最常见恶性肿瘤.胶质瘤的形成起源于细胞的基因突变.基因突变的细胞要生长为一个具有全部表型的恶性肿瘤细胞,需要经过一个由细胞增殖、分化、干细胞特征和细胞间相互作用构成的异常发育过程.在这一过程中,肿瘤细胞"征用"了大量的正常发育调控信号通路,如Wnt/β-catenin信号通路.这一通路介导相邻细胞间相互作用,在进化中高度保守,广泛参与正常发育的精确调控和恶性肿瘤的发生发展过程.该文对Wnt/β-catenin信号通路及其在胶质瘤中的作用和机制进行综述,并展望Wnt/β-catenin信号通路为靶点干预和治疗胶质瘤的前景.

目的:探究糖原合成酶1(GYS1)在原发性肝细胞癌(HCC)进展中的作用.方法:基于GEPIA数据库分析GYS1在肿瘤与癌旁组织的表达差异.从天津市西青医院取20例HCC临床样本.采用RT-PCR、Western印迹及免疫组化验证GYS1基因在肿瘤与癌旁组织的表达差异.对于HCC细胞系,分别转染过表达GYS1质粒及siRNA,采用CCK8、EDU以及划痕实验验证过表达或敲除GYS1后HCC细胞增殖及迁移能力变化.采用Western印迹实验验证过表达或敲除GYS1后核因子(NF)-κB通路的变化.结果:与癌旁组织相比,HCC组织中GYS1表达显著上调(F=30.23,P＜0.001);与正常肝细胞相比,肿瘤细胞系中GYS1明显高表达(F=287.35,P＜0.001).基于数据库分析表明,过表达GYS1的HCC患者预后较差(P＜0.05).过表达GYS1在体外促进HCC 细胞增殖(F=58.67,P＜0.01)及迁移(F=67.34,P＜0.01);而敲除 GYS1 则抑制 HCC 细胞增殖(F=66.32,P＜0.01)及迁移(F=79.24,P＜0.01).RT-PCR及Western印迹结果证实,过表达GYS1可激活NF-κB通路,而敲除GYS1可抑制GYS1通路.结论:HCC组织中GYS1表达量明显升高,并且过表达GYS1,可通过激活NF-κB通路促进HCC进展.

目的 研究茯苓酸对结直肠癌细胞葡萄糖代谢及细胞凋亡的调控作用.方法 通过细胞活性测定(Cell Count-ing Kit-8,CCK8)、克隆形成等实验检测茯苓酸对结直肠癌细胞增殖与细胞活性的影响;采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞凋亡实验检测茯苓酸对结直肠癌细胞凋亡的影响;使用细胞氧气消耗率和细胞外酸化率测定仪器及细胞葡萄糖代谢水平测定试剂盒检测茯苓酸对结直肠癌细胞葡萄糖代谢的影响;通过蛋白免疫印迹(Western blotting,WB)实验验证凋亡、糖酵解、磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol3-kinase,PI3K)/丝氨酸、苏氨酸蛋白激酶(AKT Serine/Thre-onine Kinase 1,AKT)/雷帕霉素靶蛋白(Mammalian Target of Rapamycin,mTOR)通路相关蛋白表达情况.结果 茯苓酸能够有效抑制结直肠癌细胞增殖与细胞活性,并能够通过抑制其糖酵解水平促进其细胞凋亡,同时显著抑制PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白表达水平.结论 茯苓酸可通过调控PI3K/AKT/mTOR通路介导葡萄糖代谢促进CRC细胞凋亡,可作为未来结直肠癌代谢靶向治疗的潜在药物.

目的 探讨氧化应激对人卵巢颗粒细胞生长发育的影响.方法 体外培养人卵巢颗粒细胞KGN,用不同浓度的过氧化氢(H2O2)处理KGN细胞,采用CCK8法检测细胞增殖水平,流式细胞术检测细胞内活性氧族(reactive oxy-gen species,ROS)产生量及细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞自噬和凋亡相关蛋白的表达水平.结果 随着H2O2浓度的升高,颗粒细胞增殖受到明显抑制,且呈剂量依赖性(F分别为4.906、4.825、4.653、4.614和4.587,P均＜0.001).细胞内ROS水平随着H2O2浓度的增加而升高,同时细胞凋亡率不断升高;加入抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)后,ROS水平恢复,细胞凋亡率下降,表明细胞凋亡与ROS的产生有关.H2O2处理后,KGN细胞中LC3-Ⅱ、cleaved-caspase3蛋白的表达水平显著升高(t分别为4.809和5.789,P均＜0.05),LC3-Ⅰ、BCL-2、P62蛋白的表达水平显著降低(t分别为4.014、3.982和4.415,P均＜0.05),表明H2O2能够诱导KGN细胞的自噬和凋亡.结论 H2O2能够抑制人卵巢颗粒细胞增殖,诱导其自噬凋亡.氧化应激状态抑制人卵巢颗粒细胞的生长发育,降低卵母细胞质量,卵巢储备功能下降.

目的 探究葛根芩连汤调节lncRNA-TUSC7/miR-182/TBX5信号轴对结直肠癌(CRC)发生发展的作用机制.方法 1)体外实验:将培养好的HCT-116细胞分为对照组、oe-NC组、oe-TUSC7组、inhibitor-NC组、miR-182 inhibitor组、oe-TUSC7+miR-NC组、oe-TUSC7+miR-182 mimic组.RTqPCR检测 lncRNA-TUSC7、miR-182、TBX5 mRNA的表达;CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting检测细胞TBX5、Ki67、Caspase-9蛋白表达水平;双萤光素酶报告基因实验检测miR-182与lncRNA-TUSC7和TBX5的靶向关系.2)体内实验:皮下注射DMH建立大鼠CRC模型,将大鼠分为模型组、葛根芩连汤组、葛根芩连汤+LV-NC组、葛根芩连汤+LV-shTUSC7组,另设对照组(无处理).测量肿瘤数量、质量和体积;RT-PCR检测肿瘤组织TUSC7、miR-182、TBX5 mRNA 的表达;Western blotting检测TBX5、Ki67、Caspase-9蛋白表达.结果 1)体外实验:与对照组和oe-NC组相比,oe-TUSC7组细胞中TUSC7、TBX5 mRNA表达、凋亡率、TBX5、Caspase-9蛋白表达显著升高,miR-182表达、OD450值(24、48 h)、Ki67表达显著降低(P＜0.05);与inhibitor-NC组相比,miR-182 inhibitor组细胞中TBX5 mRNA表达、凋亡率、TBX5、Caspase-9蛋白表达显著升高,miR-182表达、OD450值(24、48 h)、Ki67表达显著降低(P＜0.05);与 oe-TUSC7+miR-NC组相比,oe-TUSC7+miR-182 mimic组细胞中TBX5 mRNA表达、凋亡率、TBX5、Caspase-9蛋白表达显著降低,miR-182表达、OD450值(24、48h)、Ki67表达显著升高(P＜0.05);双萤光素酶报告基因实验验证miR-182与TUSC7和TBX5存在靶向调控关系.2)体内实验:与对照组相比,模型组大鼠肿瘤数量、肿瘤质量和肿瘤体积、miR-182表达、Ki67蛋白表达显著升高,肿瘤组织中TUSC7和TBX5 mRNA表达、TBX5、Caspase-9蛋白表达显著降低(P＜0.05);与模型组相比,葛根芩连汤组大鼠肿瘤数量、肿瘤质量和肿瘤体积、肿瘤组织miR-182表达、Ki67表达显著降低,肿瘤组织TUSC7和TBX5 mRNA表达、TBX5、Caspase-9蛋白表达显著升高(P＜0.05);与葛根芩连汤组和葛根芩连汤+LV-NC组相比,葛根芩连汤+LV-shTUSC7组大鼠肿瘤数量、肿瘤质量和肿瘤体积、miR-182表达、Ki67表达显著升高,肿瘤组织中TUSC7和TBX5 mRNA表达、TBX5、Caspase-9蛋白表达显著降低(P＜0.05).结论 葛根芩连汤可能通过上调TUSC7,海绵化miR-182,从而促进TBX5表达,进而抑制CRC细胞的生长.

目的 探究内源性和外源性趋化因子CXC基序配体1(CXCL1)对乳腺癌细胞干细胞样特性表达的影响.方法 外源性实验将 MDA-MB-231 和 MCF-7 乳腺癌细胞分为 4 组:0 nmol/L CXCL1 组,1 nmol/L CXCL1 组,10 nmol/L CXCL1 组,anti-CXCR2组(先用CXCL1的受体CXCR2阻断剂处理后再加入10 nmol/L外源性CXCL1).内源性实验将MDA-MB-231细胞分为3组:control组(仅加入等量PBS溶液),siNC组(加入空白转染试剂),siCXCL1组(转染CXCL1特异性小干扰RNA).平板克隆形成实验检测乳腺癌细胞增殖能力;微球形成实验通过细胞球的形成能力评价乳腺癌干细胞的自我更新能力;流式细胞术检测干细胞比例(表达CD133+的MDA-MB-231细胞比例和表达CD44+/CD24-/low的MCF-7细胞比例)及表达干细胞标志物乙醛脱氢酶1(ALDH1)阳性的细胞比例;Western blot法检测各组ALDH1和Oct3/4表达的变化.为进一步探索PI3K通路在其中的作用,本实验用PI3K特异性抑制剂Ly294002对MDA-MB-231和MCF-7细胞进行预处理后,再加入10 nmol/L外源性CXCL1,检测ALDH1和Oct3/4的表达.结果 与0 nmol/L组相比,1,10 nmol/L CXCL1组克隆形成数均明显增多(P＜0.001),乳腺癌细胞形成的微球数量更多(P＜0.001)、直径更大(P＜0.05),表达CD133+的MDA-MB-231细胞数量增多(P＜0.001),表达 CD44+/CD24-/low的 MCF-7 细胞增多(P＜0.05),表达 ALDH1+的 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞数均增多(P＜0.05,P＜0.01);Western blot结果提示MDA-MB-231和MCF-7两种乳腺癌细胞中干细胞标志物ALDH1和Oct3/4的表达均随CXCL1的浓度增加明显增多.与10 nmol/L CXCL1组相比,anti-CXCR2组克隆形成数、干细胞比例及ALDH1的表达均有所减少(P＜0.05).与control组和siNC组相比,siCXCL1组微球培养后形成的细胞球直径减小(P＜0.001),细胞球数量减少(P＜0.01);表达CD133+的MDA-MB-231乳腺癌细胞比例下降(P＜0.001);ALDH1和Oct3/4蛋白表达量均明显减少(P＜0.001).Ly294002组MDA-MB-231和MCF-7细胞中ALDH1和Oct3/4表达较CXCL1组减少.结论 内、外源性CXCL1均可促进乳腺癌细胞向乳腺癌干细胞的转化,促进其干细胞样特性的表达,其机制可能与调控PI3K/Akt通路有关.

目的 以核转录因子-κB/上皮间充质转化(NF-κB/EMT)信号通路为基础,探讨和胃降逆含药血清对胃腺癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 制备不同药物剂量(3,6,12 g/kg)的和胃降逆含药血清,作为含药血清低、中、高剂量组,不含药物的血清作为空白对照组.采用不同药物剂量的和胃降逆含药血清分别干预AGS细胞24,48,72 h后,用CCK-8法观察细胞增殖;DAPI染色法检测细胞凋亡;划痕试验观察细胞迁移;实时定量聚合酶链反应法(RT-qPCR)检测NF-κB、EMT标志物相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)mRNA水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内NF-κB、E-cadherin、Vimentin相关信号通路蛋白的表达.结果 同一时间点,与空白对照组比较,和胃降逆含药血清组细胞活力降低(P＜0.01);同一含药血清剂量组48,72 h与24 h比较细胞活力降低(P＜0.05).干预48 h,与空白对照组比较,不同剂量含药血清组AGS细胞凋亡率剂量依赖性增加(P＜0.05).与空白对照组比较,和胃降逆含药血清组划痕愈合速度均减慢,迁移率降低(P＜0.05);干预24 h,与空白对照组比较,高剂量组细胞迁移降低(P＜0.01),干预48 h,中、高剂量组细胞迁移率降低(P＜0.01).与空白对照组比较,和胃降逆含药血清组AGS细胞中NF-κB、Vimentin的mRNA水平剂量依赖性下调(P＜0.05),E-cadherin的mRNA水平剂量依赖性上调(P＜0.01).与空白对照组比较,和胃降逆含药血清组AGS细胞中NF-κB、Vimentin的蛋白表达剂量依赖性下调,E-cadherin的蛋白表达剂量依赖性上调(P＜0.05).结论 和胃降逆胶囊可能通过抑制NF-κB活化、调控下游EMT相关蛋白的表达介导胃腺癌细胞AGS的迁移和侵袭,进而抑制AGS细胞增殖并促进其凋亡.