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铁皮石斛中性/碱性转化酶(DoNI2)基因的克隆和表达分析
编辑人员丨2023/8/6
目的 克隆珍稀濒危兰科药用植物铁皮石斛中性/碱性转化酶(alkaline/neutral invertase,NI)家族基因成员,并对其进行定量表达以及生物信息学分析.方法 采用转录组测序和RACE技术相结合克隆NI基因的cDNA序列,利用生物信息学工具对其进行分析,并采用实时荧光定量PCR方法检测NI基因在铁皮石斛根、茎和叶中的表达情况.结果 克隆获得1个新的铁皮石斛NI基因,命名为DoNI2(GenBank登录号KY794404),全长2 397 bp,开放阅读框(ORF)为1 836 bp,编码611个氨基酸.DoNI2蛋白预测的理论相对分子质量和等电点分别为69 050和6.38,不稳定系数为42.95,疏水性系数为-0.232.DoNI2基因在铁皮石斛根、茎和叶中均有表达,其中在茎中表达量最高,根中最低.不同生长年限茎中DoNI2基因表达量与NI酶活性呈显著正相关.结论 克隆了线粒体型的DoNI2基因的全长cDNA序列,为进一步阐明该基因在铁皮石斛蔗糖代谢途径中的重要作用奠定基础.
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编辑人员丨2023/8/6
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植物A/N-Invs基因家族研究进展
编辑人员丨2023/8/6
碱性/中性转化酶(A/N-Invs)是从蓝细菌中演化而来的一类蛋白,它是一类仅存在于光合生物中的特殊酶.A/N-Invs通过催化蔗糖水解形成的产物来调控植物的正常生长发育及对胁迫的应激反应,研究发现A/N-Invs定位在不同的细胞器中,推测其可能参与细胞器碳源的调控.本文将结合近些年对植物中A/N-Invs基因家族的研究进行系统的综述,为阐明其在不同植物中的功能提供参考.
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编辑人员丨2023/8/6
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木薯MeNINV4基因在原核细胞中的表达及优化
编辑人员丨2023/8/5
转化酶是植物中蔗糖降解过程的关键酶之一,可催化蔗糖不可逆地分解为葡萄糖和果糖,在植物生长发育、平衡碳水化合物及对逆境胁迫的响应等方面具有重要的作用.本研究利用从木薯中克隆到碱性/中性转化酶MeNINV4基因,将其重组构建到原核表达载体pGEX-6p-1上,构建重组载体MeNINV 4-pGEX-6p-1,并对其融合蛋白表达的IPTG诱导浓度、起始菌液浓度、诱导温度和诱导时间条件进行优化.研究结果发现:GST-MeNINV4融合蛋白的表达量在一定范围内随着IPTG诱导浓度、起始菌液浓度和IPTG添加时间的增加而增加.重组菌在OD600为1.0左右,IPTG浓度为0.6 mmol/L,在37℃条件下诱导5h后,重组蛋白的表达量达到最大值.本研究通过诱导目的蛋白在原核细胞中的表达并且优化表达条件,使目的蛋白在原核细胞中的表达量显著增加,为进一步研究目的蛋白的结构、功能及酶学特性等生物学功能提供理论依据.
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编辑人员丨2023/8/5
