目的:探讨靶向肝癌干细胞的紫杉醇纳米粒的制备及其对肝癌HepG2细胞（CD133阳性亚群占8%）和Huh-7细胞（CD133阳性亚群占65%）的效果。方法:应用单乳溶媒挥发法制备聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物装载的紫杉醇纳米粒，采用1-乙基-3-（3-二甲基氨丙基）-碳化二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺（EDC/NHS）交联法制备由抗CD133抗体修饰的紫杉醇纳米粒，即靶向纳米粒。检测纳米粒的表征及理化特性（包封率和载药率、粒度分布、形态、体外释放）。将肝癌Huh-7和HepG2细胞与紫杉醇纳米粒或靶向纳米粒共培养，应用流式细胞术分析肝癌细胞对纳米粒的摄取和累积，并检测CD133阳性细胞比例，应用平板克隆形成实验分析细胞存活情况。结果:扫描电镜检测显示，靶向纳米粒的粒径为（429.26±41.53）nm，Zeta电位为-11.2 mV，具有球形形态和较高的包封率[（87.53±5.90）%]。流式细胞术检测显示，37 ℃时，Huh-7细胞靶向纳米粒组的荧光强度较紫杉醇纳米粒组荧光强度高（13 397±720比6 898±604），差异有统计学意义（ P<0.05）；37 ℃时，HepG2细胞紫杉醇纳米粒和靶向纳米粒组间荧光强度差异无统计学意义（7 899±343比8 432±516， P>0.05）。Huh-7细胞靶向纳米粒组CD133阳性细胞比例较紫杉醇纳米粒组低[（15.7±2.6）%比（54.9±7.4）%]，差异有统计学意义（ t=7.31， P=0.008）；HepG2细胞两组间差异无统计学意义（ P>0.05）。平板克隆形成实验结果显示，靶向纳米粒作用后，各时间点Huh-7细胞存活率低于紫杉醇纳米粒作用后，差异有统计学意义（ F=5.56， P=0.009）；紫杉醇纳米粒和靶向纳米粒作用后，HepG2细胞存活率差异无统计学意义（ F=1.19， P=0.142）。 结论:制备的靶向肝癌干细胞的纳米粒对肝癌Huh-7细胞有良好抑制作用。

目的 探讨影响恶性疟原虫合子/动合子表面25蛋白(25 kDa Plasmodium falciparum sexual stage protein,Pfs25)偶联的因素,优化Pfs25蛋白的偶联反应条件,制备具有免疫原性的Pfs25纯化聚体蛋白.方法 通过对偶联反应时Pfs25蛋白浓度、偶联反应的酸碱度、不同的缓冲液及偶联试剂添加方式的探索,考察不同反应条件对Pfs25蛋白偶联的影响.凝胶过滤层析纯化Pfs25偶联反应产物,双抗体夹心ELISA和SDS-PAGE对凝胶柱洗脱液进行检测,Western blot检测纯化的Pfs25聚体蛋白.结果 Pfs25蛋白偶联反应选择1/15 mol/L Na2 HPO4-KH2 PO4为偶联缓冲液,反应体系在pH 5.6～6.0时偶联效果更好,而Pfs25蛋白反应质量浓度为25 mg/mL时可获得最佳的Pfs25偶联效率(68.67％),凝胶过滤层析法获得Pfs25聚体蛋白,经双抗体夹心ELISA和Western blot检测,形成的Pfs25聚体蛋白保持了与Pfs25蛋白相同的抗体结合能力.结论 优化了Pfs25蛋白最佳偶联反应条件,获得具有免疫原性的Pfs25纯化聚体蛋白.在形成Pfs25聚体中,以二聚体(Pfs25)2为主要形式,兼有少量三聚体(Pfs25)3和四聚体(Pfs25)4.

目的:构建基于碳点(carbon dots,CDs)的荧光纳米探针CDs@Tf,探讨其材料制备及应用于卵巢癌细胞荧光成像的潜能.方法:以二水合柠檬酸钠和尿素为原料,在高温下经无溶剂法制备一种高效荧光碳点,用新型四唑化合物(MTS)法检测其对人卵巢癌细胞HO-8910及人脐静脉血管内皮细胞EA.hy926的细胞毒性.昆明小鼠经尾静脉注射CDs 7 d和21d后采集主要器官(心、肺、肾、肝、脾)进行组织学分析,评价CDs的活体毒性.利用1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸(EDC· HCl)及N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)作为化学耦合剂,将制备的CDs与转铁蛋白(Tf)共价结合成荧光分子探针CDs@Tf.对其表征分析并应用于细胞成像.结果:制得一种平均粒径为3.85 nm的球形荧光CDs,最佳激发波长为400 nm,最大发射波长为520 nm,量子产率高达93％.所制备的CDs具有较高的荧光强度和低细胞毒性等性质.建立的CDs@Tf分子探针能靶向识别H0-8910卵巢癌细胞.结论:成功构建一种光学性能优良、毒性低的靶向性新型荧光纳米探针CDs@Tf,有助于应用于卵巢癌的早期筛查.

[目的]优化6-生物素氨基己酸-七叶亭(6-biotinamidohexanoic acid-esculetin,Bio-AHA-ESC)制备工艺,并初步评价其生物学活性.[方法]以1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐[1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDCI]和N,N'-二环己基碳化二亚胺(N,N'-dicyclohexyl carbodiimide,DCC)为偶联催化剂,通过考察反应温度、时间、EDCI用量、4-二甲氨基吡啶(4-dimethylaminopyridine,DMAP)用量和七叶亭(esculetin,ESC)与6-生物素氨基己酸(6-biotinamidohexanoic acid,Bio-AHA)投料比,优化合成制备工艺;采用半制备液相色谱法对产物进行分离、纯化,并通过紫外光谱、高分辨质谱和核磁氢谱进行结构鉴定.最后对其氧化应激损伤保护作用和抗炎活性进行初步评价.[结果]EDCI是较为理想的催化剂,优化反应条件为:ESC与Bio-AHA摩尔比为2:1,DMAP添加量为EDCI摩尔数的十分之一,干燥N,N-二甲基甲酰胺(N,N-dimethylformamide,DMF)溶解,室温搅拌反应6 h.经鉴定产物为Bio-AHA-6-位羟基衍生化ESC,该产物在20.00～80.00μmol·L-1剂量范围内均可剂量依赖性抑制过氧化氢诱导的人肝癌细胞HepG2损伤和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)分泌,尤其在80.00μmol·L-1时其与ESC生物学活性差异无统计学意义(P>0.05).[结论]本研究建立了一种温和、高效、专一,而且易于纯化的Bio-AHA-ESC制备方法,所得产物较好保持了ESC生物活性,为下一步深入探究中药活性单体ESC结合靶蛋白奠定了良好基础.