目的:比较二维平铺法和三维悬滴法两种培养体系对小鼠胚胎期生血内皮细胞体外诱导生成造血产物的支持作用.方法:分别利用二维平铺法和三维悬滴法将流式细胞术分选的造血干细胞潜能的生血内皮细胞PK44(CD41-CD43-CD45-CD31+ CD201+ Kit+ CD44+)群体与OP9-DL1-GFP基质细胞共孵育6 d后,在显微镜下观察两种培养体系产生造血产物的形态特点;利用流式细胞术分析两种培养体系孵育后的造血产物,并统计分析造血产物的比例和绝对数量;分别对两种培养体系共孵育后的造血产物进行造血细胞集落形成单位培养(colony-forming unit culture,CFU-C)实验,并对不同形态的细胞集落进行计数.结果:(1)利用二维平铺法形成的造血细胞平铺或悬浮于基质细胞上,而利用三维悬滴法共孵育后的产物形成了以基质细胞为中心,造血细胞黏附在周围的细胞聚集体.(2)二维平铺法产生更多CD45+造血细胞;三维悬滴法对造血产物的分化具有谱系偏向性,更有利于肥大细胞的分化.(3)二维平铺法诱导生血内皮的分化产物在体外CFU-C实验中可以产生更多的造血集落.结论:二维平铺法更支持小鼠胚内生血内皮细胞体外诱导产生CD45+的造血细胞以及有集落形成能力的造血干祖细胞.

背景:微弧氧化处理可提高钛合金植入体的生物学性能.目前研究多集中于钛合金片材,有关微弧氧化改性处理后3D多孔钛合金支架对细胞生长及分化的影响鲜有报道.目的:研究微弧氧化表面改性对3D打印多孔钛合金支架表面细胞生物学性能的影响.方法:将大鼠骨髓间充质干细胞分别接种于微弧氧化处理Ti6Al4V合金三维支架(实验组)与未经微弧氧化处理Ti6Al4V合金三维支架(对照组)上,培养4,7 d,进行扫描电镜观察、细胞骨架染色分析及细胞活力分析;培养4,7,11 d,检测细胞上清液中碱性磷酸酶和骨钙素水平;培养1,4,7,11 d,MTT法检测细胞增殖.结果与结论:①培养4,7 d时,live/dead染色显示骨髓间充质干细胞在两组材料上生长良好;细胞骨架染色分析显示,实验组细胞骨架呈立体多角形,对照组支架表面的细胞以扁平梭形状沿支架宏观结构铺展;扫描电镜显示,实验组细胞排列较为紧密,细胞伸展状态良好,细胞间的板状伪足与丝状伪足交叉连接,以锚状结构牢固地黏附于材料表面;对照组细胞伪足间的连接较少,细胞外基质较少,平铺在材料表面生长;②随着培养时间的延长,两组细胞上清液中碱性磷酸酶与骨钙素水平逐渐升高;实验组培养7,11 d的碱性磷酸酶水平高于对照组(P < 0.05),培养11 d的骨钙素水平高于对照组(P < 0.05);③MTT检测显示,随着培养时间的延长,两组细胞数量逐渐增加;实验组培养7,11 d的细胞数量明显多于对照组(P < 0.05);④结果表明,微弧氧化处理后的钛合金支架更有利于细胞的黏附、增殖与分化.

背景:随着干细胞治疗及组织工程的发展,利用生物相容性好的生物高分子材料结合脂肪间充质干细胞构建肝脏组织工程微单元成为治疗肝脏疾病的新策略.目的:探讨脂肪间充质干细胞复合多孔壳聚糖微球对急性肝损伤的修复能力.方法:将SD乳鼠脂肪间充质干细胞与多孔壳聚糖微球在体外复合培养,分别在培养第1,3,5天观察细胞在微球上增殖情况.取36只SD大鼠(北京市维通利华实验技术有限公司提供),随机分为3组(n=12):空白对照组,腹腔注射生理盐水;急性肝损伤组,腹腔注射10％四氯化碳-橄榄油;脂肪间充质干细胞-多孔壳聚糖微球组,腹腔注射10％四氯化碳-橄榄油,于注射后第1天通过手术将脂肪间充质干细胞-多孔壳聚糖微球平铺于肝脏表面.分别于注射后第1,2,3,7天进行大体、血清学及组织学评价.结果与结论:①脂肪间充质干细胞与多孔壳聚糖微球复合后第1,3,5天,经过活/死染色观察到细胞可在微球上正常生长(死细胞数量远远少于活细胞数量),且细胞在不断增殖;②注射后第1,2,3,7天,脂肪间充质干细胞-多孔壳聚糖微球组的大体形态、肝功能及组织学评价均优于急性肝损伤组,从第3天开始脂肪间充质干细胞-多孔壳聚糖微球组与空白对照组已无明显差异;③结果表明,将脂肪间充质干细胞-多孔壳聚糖微球移植入肝脏表面可加速肝损伤的修复.

背景:牙髓干细胞在适宜诱导条件下能够向牙本质分化,是牙齿组织工程的重要种子细胞.然而,以往所使用的诱导剂多为化学制剂,不利于体内应用.近来有报道称间充质干细胞能够顺材质硬度分化,这种由物理特性诱导的细胞分化研究报道较少.目的:观察人源性乳牙牙髓干细胞在硬介质表面的延展特点及向牙本质分化潜能,为牙组织工程提供参考.方法:原代分离培养和鉴定儿童自然脱落的乳牙牙髓干细胞;使用低熔点琼脂糖配制弹性模量为(9.12±0.94),(27.18±3.55),(59.37±4.05)和(86.45±5.33)kPa 4个梯度的固体凝胶基质,二维克隆形成实验和划痕实验检测第4代乳牙牙髓干细胞在上述硬基质表面的延展能力,Western blot方法检测牙本质基质蛋白1、牙本质磷蛋白、牙本质涎蛋白的表达.结果与结论:当人乳牙牙髓干细胞接种于极低和低等硬度凝胶介质表面时,乳牙牙髓干细胞几乎均以边缘整齐的细胞克隆存在,很少见细胞平铺和延展现象;但是当将其接种于中等和高等硬度凝胶介质表面时,乳牙牙髓干细胞克隆边缘则表现出明显的平铺和延展,表现为细胞胞体变大,细胞边缘外伸明显.相似的现象也经细胞划痕实验所验证.人源性乳牙牙髓干细胞在中等和高等弹性模量介质表面培养时,表达较高水平的牙本质基质蛋白1、牙本质磷蛋白、牙本质涎蛋白.结果表明,人源性乳牙牙髓干细胞随着培养基质硬度的增加其延展性及成牙本质分化能力逐渐增强,为未来牙组织工程提供方法借鉴.

目的 观察负压封闭引流术(VSD)联合刃厚皮片修复大面积皮肤恶性肿瘤术后创面的临床疗效.方法 34例皮肤恶性肿瘤患者扩大切除皮损后,遗留皮肤缺损区,充分止血,将刃厚皮片平铺于创口上,用具有生物透性的半透薄膜完全封闭VSD敷料覆盖的整个创面,放置引流管并将其连接到负压装置上,7～10d拆除VSD并观察皮片存活情况.结果 33例患者全部皮片I期成活,植皮区未见感染及坏死灶;1例隆突性皮肤纤维肉瘤患者皮片坏死,但肉芽组织生长良好,予以二次清创后植皮,皮片生长良好.2例患者出现缺损边缘皮片未覆盖,予以换药后愈合.结论 负压封闭引流术联合刃厚皮片移植可以作为修复大面积皮肤恶性肿瘤术后创面的一种有效方法.

目的 优化小鼠窦前卵泡二维体外培养体系,探讨卵泡刺激素(FSH)对小鼠窦前卵泡体外发育的影响.方法 将分离自14 d雌鼠的初级卵泡(80～100μm)和早期次级卵泡(110～130μm)分别培养在浓度为10、100 mU/ml r-FSH的培养液中,观察并记录卵泡体外生长情况和卵母细胞的成熟情况;检测并分析第10天窦卵泡的空间生长情况及不同培养液中卵泡的雌二醇(E2)分泌水平;Western blotting检测卵泡中FSH受体(FSHR)、类固醇激素合成限速酶3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)、17α-羟化酶(CYP17)及芳香化酶(CYP19)的表达水平.结果 初级卵泡在10、100 mU/ml r-FSH培养液中的成腔率(0.00％±0.00％,36.14％±4.02％)及卵母细胞成熟率(0.00％±0.00％,23.54％±7.62％)明显低于早期次级卵泡成腔率(78.63％±4.13％,92.74％±2.54％)及卵母细胞成熟率(48.55％±3.73％,80.88％±4.02％),差异有统计学意义(P<0.05);在100 mU/ml r-FSH培养液中的早期次级卵泡成腔率(92.74％±2.54％)、卵母细胞成熟率(80.88％±4.02％)明显高于在10 mU/ml r-FSH培养液中的卵泡成腔率(78.63％±4.13％)及成熟率(48.55％±3.73％),差异有统计学意义(P<0.05);早期次级卵泡在10 mU/ml r-FSH的培养液中呈平铺式生长模式,而在100 mU/ml r-FSH培养液中呈立体空间生长模式,后者更接近于体内卵泡的生长模式;早期次级卵泡中FSHR的相对表达水平明显高于初级卵泡(1.86±0.32 vs.1.19±0.28,t=4.94,P<0.05).100 mU/ml r-FSH培养液中早期次级卵泡组卵泡3b-HSD、CYP17及CYP19的表达以及E2的分泌水平明显高于用10 mU/ml r-FSH培养液培养时.结论 FSH不仅会影响窦前卵泡的体外发育率,还会改变窦前卵泡的体外发育模式.选择早期次级卵泡培养在含100 mU/ml r-FSH的二维培养液中培养可获得理想的卵泡发育率及发育模式.