目的:研究18株野生云芝种质资源的农艺性状和药材品质,为筛选可供人工培育的高产优质云芝药材菌种提供理论参考.方法:测定18株云芝菌丝、子实体农艺性状及子实体多糖、浸出物、麦角甾醇含量和重金属含量,并进行综合评价.结果:菌株YUN5、HN04、JL3、NX17首茬子实体生物产量较高;菌株YUN4、YUN5、DB5、NX4子实体多糖含量均超过2020年版中国药典规定的3.2％;14个菌株子实体浸出物含量均超过药典标准规定的18％,YUN1、HN02、NX6、NX18未达药典标准.子实体中麦角甾醇含量最高菌株为NX4,达到0.58 mg/g;菌株YUN5、HN01、DB4、JL2、NX4子实体中Cr、Cu、As、Cd、Pb含量均未超过标准规定的限量值.结论:菌株NX4、DB5、YUN5在加权评分及主成分分析评价中排名前列且符合2020年版中国药典规定的云芝外观、多糖含量和浸出物含量要求,可作为优质云芝种质资源,同时也可作为云芝药材品质优良菌种;加权评分排名靠前的YUN2、YUN4以及主成分分析排名靠前的NX17子实体外观不符合药典要求,但菌株YUN4的多糖含量、菌株YUN2的浸出物和麦角甾醇含量、菌株NX17的麦角甾醇含量和单袋首茬产量上相对于其他菌株具有优势,可分别考虑作为有效成分提取的菌种资源.

目的:了解云芝胞内糖肽口服制剂的质量现状并发现存在的质量问题,完善质量标准,为药品监管提供技术支持.方法:从全国范围内抽取54批次云芝胞内糖肽口服制剂样品,依据现行质量标准检验,从药品安全性、有效性等方面进行探索性研究,建立多项检测方法全面分析其质量情况.结果及结论:云芝胞内糖肽口服制剂在原料工艺和制剂工艺中均发现与批准工艺不符的问题,其质量标准有待完善和提高.

目的:通过测定不同处理条件下云芝样品中5个痕量元素含量,评估云芝限量重金属元素安全性及其菌丝体砷(As)富集能力.方法:采用ICP-MS分析非胁迫菌丝体、子实体及As胁迫菌丝体3种处理条件下18批云芝样品中5个痕量元素累积差异、元素间相关性及含量水平,并考察As胁迫下菌丝体对As的富集系数(BCF).结果:非胁迫条件下培养的18批云芝菌丝体中,DB5菌株中5个痕量元素的总含量较高,As与Cr元素累积量间呈极显著正相关;而非胁迫条件下栽培的子实体中HN04、NX18、NX17菌株累积量较高,As与Cr元素累积量间呈极显著正相关,且As、Cd、Cr、Cu在子实体中累积总量较菌丝体均有提升;As胁迫下所有云芝菌株对中高浓度As均有富集,As平均含量为373.356 mg/kg,富集系数为2.18～12.17.结论:尽管云芝从菌丝体到子实体过程中会加速累积限量重金属元素,但云芝菌丝体和子实体重金属元素安全性不存在较大风险,不过As污染较为严重的环境下培养的云芝可能存在一定的安全隐患.

目的 观察云芝胞内糖肽胶囊联合308 nm准分子激光照射治疗斑秃的效果.方法 将73例门诊确诊的斑秃病人随机分为观察组37例与对照组36例.观察组病人每次服用云芝胞内糖肽胶囊1.0 g,每天3次,连用3个月,同时以308 nm准分子激光照射斑秃局部皮损,每周2次,连用2个月.对照组病人单独以308 nm准分子激光照射斑秃局部皮损,每周2次,连用2个月.结果 观察组治愈20例,显效10例,有效7例,无效9例;对照组治愈12例,显效8例,有效5例,无效2例,观察组疗效明显优于对照组,差异有显著性(Uc=2.39,P＜0.05).结论 云芝胞内糖肽胶囊联合308 nm准分子激光照射治疗斑秃效果显著,值得临床推广应用.

云芝Trametes versicolor具有很强的环境有机污染物降解能力,其烟酰胺腺嘌呤二核苷酸-细胞色素P450还原酶(NADPH-cytochrome P450 reductase,CPR)为细胞色素P450酶(Cytochrome P450s,CYPs)提供电子,参与有机污染物的降解过程.序列分析显示,云芝基因组拥有1个潜在CPR序列和多个潜在CYP序列.为深入研究云芝CPR参与细胞降解有机污染物的分子机制,实验进行了云芝CPR在大肠杆菌中异源表达和酶学特性分析.结果表明,经IPTG诱导后,去除预测的N端膜锚定区域(氨基酸残基1-24)的CPR蛋白(CPR△24)可在重组菌中实现可溶性表达,且表达蛋白的分子量与理论值(78 kDa)一致.镍离子亲和层析和分子筛层析纯化后测得其比活性为5.82 U/mg.酶学性质分析显示,重组CPR△24的最适温度和pH分别为35℃和8.0,并对一些金属离子及有机溶剂具有不同程度的耐受性.酶在35℃、pH 8.0反应条件下对NADPH的动力学参数Km和Kcat分别为19.7 μmol/L、3.31/s;对底物细胞色素c的动力学参数Km和Kcat分别为25.9μmol/L、10.2/s.以上研究为探究云芝CPR在环境有机污染物降解途径中的功能机制奠定基础.

目的 从体内及体外探讨云芝多糖B(CVPs-B)对溶血磷脂酰胆碱(LPC)诱导兔主动脉平滑肌细胞(SMCs)分泌的蛋白聚糖(PGs)结合低密度脂蛋白(LDL)的抑制作用,及其对LDL在兔主动脉滞留的影响.方法 分离新西兰白兔主动脉SMCs,应用凝胶迁移率移动分析法(GMSA)观察CVPs-B对LPC诱导兔主动脉SMCs分泌的PGs与LDL结合的影响.利用固相氧化剂Iodogen法对人LDL进行125 I-标记,应用γ计数法观察CVPs-B对LDL在新西兰白兔主动脉滞留的影响.结果 CVPs-B在500 mg/L剂量水平以上可抑制LPC(10μmol/L)诱导兔主动脉SMCs分泌的PGs(1250 cpm)与LDL(100 mg/L)结合;CVPs-B在10 mg/(kg·d)剂量水平以上静脉注射7 d,可减少125 I-LDL(10 mg)在兔主动脉的滞留.结论 CVPs-B可抑制兔主动脉PGs结合LDL,及抑制LDL在兔主动脉的滞留.

目的:探讨香菇多糖(Lentinan,LNT)和云芝糖肽(Polysaccharopeptide,PSP)联合使用对免疫抑制小鼠和肺癌小鼠的免疫调节作用和抗肿瘤活性.方法:以Lewis肺癌细胞建立肺癌小鼠模型,随机分为空白组(B1组)、生理盐水组(N1组)、PSP+LNT组(C1组)和阿霉素(Adriamycin,ADM)组(A1组);以多柔比星KM小鼠建立免疫抑制模型,随机分为空白组(B2组)、生理盐水组(N2组)和PSP+LNT组(C2组);2模型中B1组和B2组小鼠不行肺癌细胞和ADM注射,2模型中N1组与N2组、C1与C2组在建模后连续20天分别通过灌胃法注入生理盐水0.2 mL和PSP+LNT的混合溶液0.2 mL,A1组小鼠连续3天腹膜内注射4 mg/(kg·d)ADM.采用自动血细胞分析仪对外周血白细胞(WBC)进行计数;比较各组小鼠胸腺指数、脾脏指数和抑瘤作用;采用流式细胞术测定外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞,并计算其比值;用微量样本多指标流式蛋白定量方法(CBA)和小鼠Th 1/Th2/Th 17细胞因子CBA分析试剂盒测定小鼠血清中白细胞介素-2 (Interleukin-2,IL-2)、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)、干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素-4 (Interleukin-4,IL-4)、白细胞介素-6 (Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-10 (Interleukin-10,IL-10)和白细胞介素-17A (Interleukin-17A,IL-17A)的含量.结果:肺癌模型中,与B1组比较,N1组外周WBC数量、胸腺指数、脾脏指数、CD4+/CD8+T比值、TNF、IFN-γ、IL-2和IL-17A均显著降低(P＜0.05),血清中IL-10的含量增高(P＜0.05);与N1组比较,C1组外周WBC数量、胸腺指数、脾脏指数、CD4+/CD8+T比值、TNF、IFN-γ、IL-2和IL-17A均显著提高(P＜0.05),血清中IL-10的含量降低(P＜0.05),平均肿瘤重量较低(P＜0.05);而A1组外周WBC数量、胸腺指数、脾脏指数、CD4+/CD8+T比值、TNF、IFN-γ、IL-2和IL-17A明显降低(P＜0.05),2组平均肿瘤重量没有差别.免疫抑制模型中,与B2组比较,N2组外周WBC数量、胸腺指数、脾脏指数、CD4+/CD8+T比值、TNF、IFN-γ、IL-2和IL-17A均显著降低(P＜0.05),血清中IL-10的含量增高(P＜0.05);与N2组比较,C2组外周WBC数量、胸腺指数、脾脏指数、CD4+/CD8+T比值、TNF、IFN-γ、IL-2和IL-17A均显著提高(P＜0.05),血清中IL-10的含量降低(P＜0.05).结论:LNT和PSP联合使用对Lewis肺癌小鼠有免疫促进作用和抗肿瘤作用.

目的 建立蒽酮-硫酸法测定复方木鸡颗粒(云芝提取物、核桃楸皮、山豆根、菟丝子)中粗多糖的含有量.方法 以葡萄糖为对照品,在626 nm波长处测定粗多糖含有量.结果 葡萄糖在10～ 60 μg/mL范围内呈良好的线性关系(r=O.999 1),平均加样回收率为98.1％,RSD为2.6％.结论 该方法简便稳定,可控性强,重复性好,可用于复方木鸡颗粒的质量控制.

目的:臭牡丹(CBS)在传统中医药中运用广泛,具有一定的抗菌性和提高人体免疫功能的功效,本文探讨CBS对地塞米松(DXMS)所致免疫抑制小鼠免疫功能的影响,为后续综合开发免疫性疾病新药提供参考.方法:通过不同浓度CBS提取物对致病大肠杆菌等6种细菌进行体外抑菌实验,根据外观和抑菌效果,选择合适供试品,用不同浓度CBS对免疫抑制小鼠进行腹腔注射,以云芝多糖(CVP)为阳性对照,检测腹腔免疫器官指数、巨噬细胞吞噬功能及T淋巴细胞亚群等免疫指标.结果:发现CBS水提物在125 g/L时,对致病大肠杆菌等6种细菌均有理想的抑制作用;CBS提纯处理后在10～20 g/L浓度范围内提高免疫器官指数及增强巨噬细胞吞噬功能,对剂量有依赖性,对免疫器官有明显保护作用,同时高浓度CBS使免疫抑制小鼠降低CD4+T细胞数量、升高CD8+T细胞数量、CD4+/CD8+T细胞数量明显降低至正常值,表明了高浓度CBS可使DXMS导致的细胞免疫功能正常化.结论:CBS可提高免疫抑制小鼠免疫器官及细胞的免疫功能,且效果优于CVP.

木腐真菌是一类以木材为生长基质的大型真菌,通过分泌各种水解酶全部或部分降解木材中的木质素、纤维素和半纤维素,促进森林生态系统的物质循环,具有重要的生态功能.本研究调查了丰林国家级自然保护区固定样地中木腐真菌的多样性和倒木特征,并进行了木腐真菌的物种多样性和数量与倒木的种类、数量、腐朽程度、直径大小等的相关性分析.结果 显示:在样地内共采集木腐真菌标本295份,经鉴定为93种,Shannon多样性指数为3.86,Simpson指数为0.96.相关性分析发现木腐真菌的数量和种类与直径为2-5 cm和5-10 cm的倒木、2级腐烂的倒木和红松倒木均显著相关.样地中优势倒木寄主分别为槭属(Acer)、榛属(Corylus)、云杉属(Picea)和松属(Pinus),这4类倒木上生长的木腐真菌种类组成具有明显的差异,槭属和榛属倒木上的共有优势种主要是三色拟迷孔菌(Daedaleopsis tricolor)、云芝(Trametes versicolor)和桦附毛孔菌(Trichaptum pargamenum),而松属和云杉属的共有优势种主要有白囊耙齿菌(Irpex lacteus)、云芝、冷杉附毛孔菌(Trichaptum abietinum)和褐紫附毛孔菌(T.fuscoviolaceum).倒木产生真菌子实体的概率研究表明,同一类寄主倒木上发生木腐真菌子实体的概率在调查面积增加到0.36 ha后趋于一个定值,松属倒木中仅有10.2％产生真菌子实体,槭属和云杉属分别是12.9％和13.4％,榛属最高,达到53.7％.本研究结果对于预测森林生态系统中木腐真菌的发生具有重要理论意义.